骨髓基质干细胞诱导分化为神经元过程中miR-124和miR-128的表达

目的探讨骨髓基质干细胞诱导分化为神经元过程中miR-124和miR-128的表达变化及作用。方法采用全骨髓培养法体外分离培养获得骨髓基质干细胞,取传代培养至第3代的骨髓基质干细胞,在神经干细胞培养液及细胞因子等条件下诱导其分化为神经元,倒置显微镜下观察其形态变化,应用ABI公司的TaqManMicroRNAAssaysreal-timePCR技术,检测miR-124和miR-128在诱导分化过程中的表达。结果 miR-124分化后神经元的表达是未分化BMSCs的0.051倍(P0.05);miR-128分化后神经元的表达是未分化BMSCs的0.070倍(P0.05)。结论 miR-124和miR-128在骨髓基质干细胞诱导分化为神经元过程中可能起重要作用。     

miR-221在肝癌干细胞亚群中的差异表达

目的：分离肝癌细胞系MHCC97中肝癌干细胞并分析肝癌细胞高表达miR-221在肝癌干细胞和非干细胞亚群中的表达差异情况,探讨miR-221表达水平与肝癌干细胞分化之间的关系。方法：利用流式细胞荧光激活分选法从肝癌细胞系MHCC97中分选出肝癌干细胞（hepatocareinoma stem cells,HSCs）和非干细胞（non-hepatocareinoma stem cells,non-HSCs）两个亚群。采用实时荧光定量RT-PCR（Real-time RT-PCR）检测miR-221在两个不同肝癌细胞亚群中的表达。结果：HSC亚群肝癌细胞仅占细胞总体的2.59%;HSC亚群细胞中miR-221的表达明显高于non-HSC亚群（P〈0.01）。结论：miR-221在HSC亚群肝癌细胞中的明显高表达,提示miR-221可能在维持HSC亚群肝癌细胞的干细胞特性方面具有重要意义。通过调控肝癌干细胞中miR-221的表达,可以促进其分化成熟,从而为肝癌治疗提供新的思路。     

miR-126增加非小细胞肺癌细胞A549对顺铂的敏感性

miR-126在多种恶性肿瘤中存在表达下调并显示抑癌基因的功能,然而其在肿瘤敏感性中的作用仍不明确.为了探讨miR-126在非小细胞肺癌细胞A549对顺式铂氨(cis-diammine dichloroplatoum, cisplatin, CDDP)敏感性中的作用及可能机制,本研究用MTS法检测非小细胞肺癌细胞A549及其衍生的CDDP耐受细胞A549/DDP对CDDP的敏感性.结果表明,A549/DDP细胞对CDDP的耐受性是A549细胞的4.05倍(P=0.0078)|用qRT-PCR检测发现,相比于A549细胞,A549/DDP细胞中miR-126的表达下调了8.45倍(P=0.0063),而survivin和Bcl-2的表达明显上调|通过MTS、qRT-PCR及Western印迹实验发现,miR-126 mimics使A549/DDP细胞中miR-126的表达上调了12.63倍(P=0.0013),并明显增加A549/DDP细胞对CDDP的敏感性及下调survivin和Bcl-2的表达;相反,miR-126 inhibitor能明显增加A549细胞对CDDP的耐受性及增加survivin和Bcl-2的表达.本研究结果提示,miR-126在非小细胞肺癌CDDP耐受细胞中的表达下调,上调miR-126的表达能增加耐药细胞对CDDP的敏感性. miR-126是逆转肺癌CDDP耐受的可能潜在靶标.     

MicroRNAs-126（miR-126）的生物学功能

MicroRNAs(MiRNAs)负向调控基因的表达,在细胞分化和细胞功能调节中起着重要作用,且涉及血管新生。应用克隆和测序方法,检测出miR-126在人内皮细胞高度表达。MiR-126与许多肿瘤关系密切,miR-126通过信号传导通路负向调控肿瘤细胞增殖、迁移和侵袭,并且抑制肿瘤生长延长患者存活率;相反的,在某些肿瘤中miR-126也可通过促进肿瘤细胞血管生长加速肿瘤进展,可能是未来作为相关肿瘤治疗的手段之一。本文就miR-126在生理进程和病理进程的表达及其作用进行综述。     

脊髓源神经干细胞诱导分化为胆碱能神经元过程中Aldoc和Stmn1表达的研究

目的探讨脊髓源神经干细胞在诱导分化为胆碱能神经元过程中Aldoc和Stmn1的表达变化情况。方法从孕17天Wistar胚胎大鼠取出脊髓组织,制成细胞悬液,采用含EGF和bFGF的无血清限定性培养基培养,然后进行诱导分化,观察脊髓源神经干细胞向胆碱能神经元分化的情况,应用荧光定量PCR方法分析Aldoc和Stmn1基因在脊髓源神经干细胞诱导分化为胆碱能神经元的过程中的表达变化情况。结果神经干细胞在诱导分化为胆碱能神经元后,经免疫荧光检测有ChAT阳性细胞表达;Aldoc基因的表达量在胆碱能神经元较神经干细胞低(P<0.05);Stmn1基因的表达量则在诱导分化后较神经干细胞升高(P<0.05)。结论 Aldoc对神经干细胞的干性维持有重要作用,Stmn1在胆碱能神经元的成熟过程中起作用。     

miR-21 和miR-155在系统性红斑狼疮患者外周血B 细胞中的表达及意义

目的：探讨miR-21 和miR-155 在系统性红斑狼疮患者外周血B 细胞中的表达及意义。方法：将93 例系统性红斑狼疮(SLE) 患者根据SLEDAL评分分为轻度活动组(n=49)和中重度活动组(n=44),并选择40 例健康者作为对照组,采用实时荧光定量PCR 技术检测其外周血B细胞中miR-21、miR-155、骨形成蛋白-2(BMP-2)和骨形成蛋白受体Ⅱ(BMPRⅡ)的表达。结果：SLE 患者外 周血B 细胞中miR-21 和miR-155 相对表达量均高于对照组(P<0.05),中重度活动组患者外周血B 细胞中miR-21 和miR-155 相 对表达量均高于轻度活动组和对照组,且轻度活动组高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);SLE 患者外周血B 细胞中 BMP-2 mRNA 和BMPRⅡ mRNA 相对表达量均高于对照组(P<0.05),中重度活动组患者外周血B 细胞中BMP-2 mRNA和BMPR Ⅱ mRNA 相对表达量均高于轻度活动组和对照组,且轻度活动组高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关分析显 示SLE 患者外周血B 细胞中miR-21 和miR-155 相对表达量与BMP-2 mRNA和BMPRⅡ mRNA均呈正相关(r=0.292、0.365 和 0.481、0.279,P<0.05),SLE 患者外周血B细胞中miR-21 和miR-155 相对表达量均与补体C3 和补体C4 水平呈显著负相关(r=-0. 570、-0.289 和-0.751、-0.308,P<0.05)。结论：miR-21 和miR-155 在SLE 患者外周血B细胞中呈高表达,可能通过BMP信号通路 异常活化而发挥作用,且与补体C3 和C4 呈负相关,有望作为监控SLE 患者病情的参考指标。     

miR-221 通过作用DVL2 影响前列腺癌细胞系的侵袭功能*

目的:评价miR-221在前列腺癌细胞系中表达的变化对其神经内分泌样转化及其侵袭功能的影响。方法:以Northern blot检测LNCaP,LNCaP-AI两种前列腺癌细胞系中7种microRNA的表达变化;细胞转染法检测在雄激素剥夺环境中LNCaP和LNCaP-AI细胞系中miR-221的作用;CCK-8法检测细胞在不同阶段的生长增殖水平;Transwell法检测转染细胞的侵袭能力;qRT-PCR和Western blot检测转染的细胞中神经元特异性烯醇化酶(NSE)及dishevelled-2(DVL2)表达的变化。结果:与雄激素依赖性前列腺癌(ADPC)的细胞系LNCaP相比,miR-221在雄激素非依赖性前列腺癌(AIPC)的细胞系LNCaP-AI中明显高表达。通过转染使miR-221在LNCaP细胞系中高表达可促进细胞的NSE表达,加速其神经内分泌样分化。而在LNCaP-AI细胞系中下调miR-221水平则会升高靶基因DVL2的表达水平,并增强LNCaP-AI细胞的迁移和侵袭能力。结论:该实验证实在AIPC和ADPC细胞系中miR-221存在表达差异。miR-221可促进前列腺癌细胞的神经内分泌样转化,这可能是导致前列腺癌雄激素非依赖转化的重要原因。MiR-221可通过作用DVL2调节晚期前列腺癌细胞的转移和侵袭。     

miR-34a在幼鼠海马神经元细胞增殖和凋亡中的作用

目的:探讨miR-34a在幼鼠海马神经元细胞增殖凋亡中的作用。方法:分离幼鼠海马神经元细胞,转染miR-34a抑制剂(miR-34a inhibitor)、抑制剂对照(inhibitor control)、miR-34a模拟物(miR-34a mimics)、模拟物对照(mimics control),RT-PCR检测细胞中miR-34a表达水平。MTT检测转染后细胞增殖情况。流式细胞仪检测细胞凋亡情况。Western blot检测细胞中Cleaved-caspase-3、Bcl-2、Bax的表达水平。结果:转染miR-34a inhibitor可以抑制miR-34a的表达,miR-34a mimics可以促进miR-34a的表达。miR-34a mimics对细胞增殖抑制率明显高于mimics control组(P0.05),miR-34a inhibitor组抑制率明显低于inhibitor control组(P0.05)。miR-34a inhibitor组神经元细胞凋亡率明显低于inhibitor control组(P0.05),miR-34a mimics组神经元细胞凋亡率明显高于mimics control组(P0.01),inhibitor control组和mimics control组神经元细胞凋亡率差异不显著(P0.05)。miR-34a inhibitor组Cleaved-caspase-3、Bax蛋白表达量低于inhibitor control组,差异显著(P0.05);miR-34a inhibitor组Bcl-2蛋白表达量高于inhibitor control组,差异显著(P0.05);miR-34a mimics组Cleaved-caspase-3、Bax蛋白表达量高于mimics control,差异显著(P0.05);miR-34a mimics组Bcl-2蛋白表达量低于mimics control,差异显著(P0.05)。结论:miR-34a抑制海马神经元细胞增殖,促进细胞凋亡,其作用机制可能与调控Cleaved-caspase-3、Bcl-2、Bax表达有关。     

肿瘤干细胞标记物CD_(133)与miR-429在大肠癌组织中的表达及其相关性研究

目的:检测CD133不同亚群大肠癌细胞HT-29的miR-429表达情况,探讨miR-429及CD133的表达与肿瘤的发生发展之间的关系。方法:采用荧光活化细胞分选法(FACS)分选出CD133不同亚群细胞,实时荧光定量PCR分别检测两组细胞miR-429的表达,合成miR-429寡核苷酸和阴性对照miRNA并分别转染CD133+和CD133-两个亚群细胞。再将细胞种植于非肥胖糖尿病/严重联合免疫缺陷(NOD/SCID)小鼠体内构建移植瘤模型,不同时间测量肿瘤体积和重量,RT-PCR及蛋白质印迹检测CD133+和CD133-两组肿瘤CD133mRNA和蛋白质表达。结果:血清检出CD133+细胞为67.9%,miR-429的表达量是CD133+细胞的(1.83±0.91)倍(P0.05),CD133+比例与miR-429表达呈负相关(r=0.591,P0.05);miR-429+/CD133+组的移植瘤体积及重量与对照组比较有统计学差异(P0.05),且miR-429+/CD133+组成瘤时间较对照组晚约2周,但miR-429+/CD133+组的移植瘤CD133表达量低,与阴性对照组比较无明显差异(P0.05)。结论:miR-429可能作为CD133的负性调控因子,具有抑制肿瘤生长的作用,但miR-429与CD133在肿瘤发生、发展过程中的作用机制有待进一步研究阐明。     

miR-15a-5p和miR-16-5p在骨肉瘤组织中的表达分析

目的:使用microRNAs基因芯片及实时定量PCR法测定骨肉瘤组织中miR-15a-5p和miR-16-5p的相对表达含量,并与瘤旁组织对比,分析骨肉瘤细胞内miR-15a-5p和miR-16-5p的表达变化。方法:选取34例骨肉瘤组织蜡块样本,使用microRNAs基因芯片观察miR-15a-5p和miR-16-5p在骨肉瘤和瘤旁组织内的表达差异;实时定量PCR法测定骨肉瘤组织和瘤旁组织中miR-15a-5p和miR-16-5p的相对表达含量,并将两种结果对比分析。结果:microRNAs基因芯片结果显示,在骨肉瘤组织中,miR-15a-5p在肿瘤中的表达较瘤旁组织低1.79倍,miR-16-5p较瘤旁组织低1.62倍。实时定量PCR实验结果表明,miR-15a-5p和miR-16-5p表达较瘤旁组织降低,差异有统计学意义(P0.05)。经过统计学计算,miR-15a-5p在肿瘤中的表达较瘤旁组织低3.14倍,miR-16-5p较瘤旁组织低5.65倍。结论:在骨肉瘤中,miR-15a-5p和miR-16-5p表达含量降低,提示这两种microRNAs在骨肉瘤中可能做为抑癌因子存在。     

MiR-615在平行培养的神经干细胞与运动神经元的表达比较

目的探讨MiR-615在脊髓源性神经干细胞与运动神经元间的表达特征。方法通过免疫磁珠法分离纯化胚胎大鼠脊髓运动神经元;通过神经克隆球形成技术分离纯化胚胎大鼠脊髓源性神经干细胞。采用TaqMan miR-615Assay定量检测培养的脊髓源性神经干细胞与运动神经元中miR-615的表达差异。结果通过平行培养技术分别获得了纯化的脊髓源性神经干细胞与运动神经元。定量检测结果显示,miR-615在分离的运动神经元中较在脊髓源性神经干细胞中显著高表达。结论本文提示miR-615可能在神经干细胞定向分化为运动神经元过程中发挥重要的调节作用。     

微小RNAmiR-21和miR-31在13腔鳞癌组织中的表达及意义

目的：检测口腔鳞癌中微小RNA miR-21和miR-31的表达,探讨其与肿瘤发展的关系。方法：应用实时荧光定量PCR的方法检测72例口腔鳞癌,38例正常口腔粘膜miR-21和miR-31的表达,统计学分析其表达与肿瘤临床分期和病理分型的关系。结果：①口腔鳞癌组织与对照组比较,微小RNA miR-21和miR-31的表达都有显著增高（P〈0.05）,其中miR-21的增高更为显著（P〈0.001）。②统计学分析表明,miR-21的表达在晚期鳞癌组织较早中期鳞癌组织增高更为显著（P〈0.01）,在低分化鳞癌组织较中、高分化鳞癌组织增高更为显著（p〈0.001）;MiR-31的表达水平在不同肿瘤临床分期和病理分型鳞癌组织中无明显差异（P〉0.05）。结论：miR-21和miR-31在口腔鳞癌发生发展过程中表达有明显增高,其中miR-21表达水平可作为潜在的口腔鳞癌临床分期分级和预后的指标。     

脑挫裂伤致miR-9升高促进神经干细胞分化

目的：探讨颅脑损伤后miR-9表达的变化和对神经干细胞分化和增值的影响,为颅脑损伤后神经功能修复治疗提出新的思路。方法：通过RT-PCR技术检测miR-9在挫裂伤脑组织中的表达情况;培养胚胎来源神经干细胞,并通过免疫荧光鉴定神经干细胞及其分化;转染miR-9后,通过MTT测定神经干细胞的增殖情况,和流式细胞仪检测分化神经元所占比例。结果：miR-9在挫裂伤脑组织中表达显著上升。对神经干细胞过表达miR-9可显著促进细胞增殖,并诱导分化成神经元。结论：脑挫裂伤时miR-9显著升高,并具有着促进神经干细胞增值和诱导分化的作用,可为伤后神经功能修复提供新的治疗方法。     

MicroRNA-134/CREB/pCREB通路在癫痫中的表达及意义

目的探讨miR-134、CREB、pCREB在癫痫大鼠海马及难治性癫痫患者颞叶脑组织中的表达及意义。方法难治性癫痫患者及非癫痫对照组颞叶组织、氯化锂-匹罗卡品癫痫大鼠及空白对照组海马组织中,应用实时荧光定量PCR技术检测microRNA-134（miR-134）的表达,用Western blot方法检测CREB及p CREB的表达,用免疫组织化学方法检测人脑颞叶皮质及大鼠海马区CREB、p CREB的表达。结果与对照组相比miR-134表达在难治性癫痫患者中明显降低（P〈0.05）,在癫痫模型组中点燃后3、7、14、60 d明显降低（P〈0.05）,1 d与30 d表达降低较对照组差异无显著性（P〉0.05）;癫痫模型组CREB在3、7、14、60 d时间点明显升高（P〈0.05）、pCREB各时间点表达均高于空白对照组（P〈0.05）。结论难治性癫痫患者颞叶皮质及癫痫动物海马中miR-134表达下降,CREB、pCREB表达升高,提示其可能在癫痫发生发展机制中起重要作用。     

肿瘤干细胞标记物CD133与miR-429在大肠癌组织中的表达及其相关性研究

目的：检测CD133不同亚群大肠癌细胞HT-29的miR-429表达情况,探讨miR-429及CD133的表达与肿瘤的发生发展之间的关系。方法：采用荧光活化细胞分选法（FACS）分选出CD133不同亚群细胞,实时荧光定量PCR分别检测两组细胞miR-429的表达,合成miR-429寡核苷酸和阴性对照miRNA并分别转染CD133＋和CD133＋两个亚群细胞。再将细胞种植于非肥胖糖尿病／严重联合免疫缺陷（NOD／SCID）小鼠体内构建移植瘤模型,不同时间测量肿瘤体积和重量,RT—PCR及蛋白质印迹检测CD133＋和CD133＋两组肿瘤CD133mRNA和蛋白质表达。结果：血清检出CD133＋细胞为67．9％,miR-429的表达量是CD133＋细胞的（1．83±0．91）倍（P〈0．05）,CD133＋比例与miR-429表达呈负相关（r=0．591,P〈0．05）;miR-429＋／CD133＋组的移植瘤体积及重量与对照组比较有统计学差异（P〈0．05）,且miR-429＋/CD133＋组成瘤时间较对照组晚约2周,但miR-429＋/CD133＋组的移植瘤CD133表达量低,与阴性对照组比较无明显差异（P〉0．05）。结论：miR-429可能作为CD133的负性调控因子,具有抑制肿瘤生长的作用,但miR-429与CD133在肿瘤发生、发展过程中的作用机制有待进一步研究阐明。     

miR-126调控前列腺癌机制研究

miR-126通过靶向作用于表皮生长因子域7（EGFL7）、同源框A9（HOXA9）、胰岛素受体底物-1（11LS-1）、p85-B基因等,在转录后水平调控靶基因表达,在肿瘤形成中起重要作用。前列腺癌细胞中高表达miR,126,能明显下调VEGF—A、EGLF7、HOXA9、VCAM—1等与肿瘤生长、转移密切相关的蛋白分子。miR-126作为抑癌因子,在多种肿瘤中均下调。其抑癌作用及机制在肺癌、白血病、乳腺癌、宫颈癌等中均已得到证实。本课题拟对miR-126调控前列腺癌机制做一综述。     

miR-15a和miR-16-1模拟物对人骨肉瘤细胞系SOSP-9607凋亡和增殖的影响

目的：探讨miR-15a和miR-16-1模拟物对于人骨肉瘤细胞系SOSP-9607凋亡和增殖的影响。方法：将SOSP-9607细胞分为实验组和对照组。实验组分为miR-15a组、miR-16-1组、miR-15a＋miR-16-1组。以miR-15a组为例,采用miR-15a模拟物（hsa-miR-15a mimics）上调SOSP-9607细胞内的miR-15a表达量。对照组分为阴性对照组和空白对照组。采用流式细胞仪测定细胞凋亡率,四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定细胞增殖,并计算细胞增殖效率。结果：通过统计学分析,实验组凋亡率与阴性对照组凋亡率相比明显增高（P〈0.05）;实验组的细胞增殖率明显低于对照组（P〈0.05）。结论：上调SOSP-9607细胞内miR-15a和miR-16-1的表达量可促进SOSP-9607细胞的凋亡并抑制其增殖。     

miR-335对骨肉瘤细胞增殖和迁移的影响

目的:通过研究miR-335对骨肉瘤细胞系SOSP-9607增殖和迁移的影响,探讨miR-335在骨肉瘤细胞生物学行为中的作用。方法:体外培养SOSP-9607细胞并将其分三组,分别为实验组、阴性对照组和空白对照组。实验组转染miR-335模拟物(has-miR-335 mimics),阴性对照组转染阴性对照序列(negative control,NC),空白对照组细胞不行任何转染。采用噻唑蓝(MTT)比色实验法检测和比较细胞处理24、48、72和96 h的增殖情况,采用Transwell实验检测和比较各组细胞的迁移情况。结果:MTT结果显示,实验组细胞48、72和96 h增殖率较阴性对照组明显降低(P0.01),而阴性对照组及空白对照组细胞增殖率比较未见明显差异(P0.05)。在Transwell迁移和侵袭实验中,与阴性对照组比较,实验组细胞的侵袭及迁移能力也明显降低(P0.05),而两对照组细胞迁移及侵袭能力也无明显差异(P0.05)。结论:miR-335可显著抑制骨肉瘤细胞的增殖及迁移,有望成为骨肉瘤治疗的新靶点,值得深入研究。