靶向survivin的siRNA联合5-Fu转染抑制肝细胞株HepG2增殖的研究

目的：研究靶向survivin的（小分子干扰RNA）siRNA和（氟尿嘧啶）5-FU联用对肝癌细胞HepG2的增殖抑制及凋亡的影响。方法：将HepG2细胞分为空白对照组、阴性对照组、5-FU处理组、siRNA转染组、5-FU＋siRNA转染组。转染采用脂质体法。RT-PCR法检测HepG2细胞survivinmRNA转录水平;MTT法检测靶向survivin的siRNA和5．FU对HepG2细胞增殖的抑制作用;流式细胞术检测HepG2细胞凋亡情况。结果：空白对照组、阴性对照组、5-FU处理组survivinmRNA表达无明显变化（P〉0．05）,siRNA转染组、5-FU＋siRNA转染组survivinmRNA表达明显下降（F=280．326,q=4．72-7．34,P〈0．05）。5-FU＋siRNA转染组增殖抑制率为51．58％±1-35％,与其它各组相比抑制率明显增高（F=280．326,q=5．27-9．84,P〈0．05）。5-Fu＋siRNA组与其它各组相比细胞凋亡率明显增高（F=13568．68,q=110．47-327．16,P〈0．01）。结论：将靶向survivin的siRNA和5一Fu联合应用可以显著抑制肝癌细胞survivin基因表达,并协同抑制HepG2细胞增殖,共同发挥诱导细胞凋亡作用。     

奥沙利铂或5-FU对人肝癌HepG2细胞低氧低血清损伤后的增殖的影响

目的：探讨奥沙利铂或5．Fu单药对经低氧低血清损伤的人肝癌HepG2细胞增值的抑制作用。方法：体外培养HepG2细胞,建立低氧低血清细胞模型,分组选用奥沙利铂、5．F1J、奥沙利铂＋低氧、5-FU＋低氧、奥沙利铂＋低血清、5-FU＋低血清、奥沙利铂＋低氧低血清、5．Fu＋低氧低血清,48h后MTT法检测不同浓度的奥沙利铂或5-Fu对低氧、低血清和低氧低血清组的细胞增殖情况。结果：奥沙利铂或5．Fu对HepG2细胞的抑制作用呈明显的剂量依赖关系（P〈0．05）,细胞低氧低血清损伤同时奥沙利铂或5．Fu处理后的抑制率明显高于单独用药组（P〈0．01）。结论：奥沙利铂或5-Fu可抑制HepG2细胞的增殖,低氧低血清处理后,抑制作用更强。     

靶向VEGF小干扰RNA协同5-FU诱导人乳腺癌细胞MCF-7凋亡机制的研究

探讨慢病毒介导的靶向VEGF小干扰RNA联合应用化疗药物5 FU诱导人乳腺癌细胞MCF-7凋亡的机制。以携带VEGF siRNA的慢病毒载体感染MCF-7细胞,应用RT-PCR和Western blot分别检测各组VEGF mRNA、VEGF蛋白及凋亡相关蛋白的表达,流式细胞术检测细胞凋亡。结果表明,慢病毒VEGF siRNA干扰组细胞VEGF mRNA和蛋白表达水平明显低于对照组,凋亡相关蛋白P53及P21表达上调,而SIRT1、Bcl-2及Survivin表达下调。流式细胞术检测显示慢病毒干扰组及5-FU组细胞凋亡率显著升高,联合治疗组的协同作用更为明显。上述结果表明：慢病毒介导的RNA干扰能明显抑制MCF-7细胞VEGF的表达,通过下调SIRTI蛋白的表达,导致P53蛋白表达上调,并调控其下游P21、bcl-2和Survivin的表达,从而诱导MCF-7细胞的凋亡,并且提高了MCF-7对5-FU的敏感性。     

旋转磁场联合5-FU对SP2/0细胞超微弱发光强度的影响

目的:研究旋转磁场(RMF)联合氟尿嘧啶(5-Fu)对小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0)超微弱发光的影响,探讨两者联合对肿瘤细胞的杀伤作用.方法:SP2/0细胞分为四组:对照组,单纯5-FU化疗组(单化组),单纯磁疗组(单磁组),磁场联合5-FU组(磁化组).用RMF、5-FU作用于SP2/0细胞,化学发光仪进行分析.结果:对照组的化学发光强度值最低,单化组、单磁组、磁化组化学发光强度值均明显高于对照组(P均<0.001).单磁组低于单化组及磁化组,有明显差别(P<0.001);磁化组的化学发光强度值最高,高于单化组(P<0.001).结论:磁场和5-Fu均可引起SP2/0细胞化学发光强度值的变化,以磁场联合5-Fu的化学发光强度值变化最明显,提示磁场单独及联合5-FU对SP2/0细胞有明显的杀伤作用.其机理可能与旋转磁场和5-FU引起细胞自由基增高有关.     

紫花牡荆素诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的研究

目的：研究紫花牡荆素（Casticin）对肝癌HepG2细胞增殖抑制和凋亡诱导的作用,并探讨其作用机制。方法：用终浓度为0、0.5、1.0、2.0umol/L的Casticin作用于HepG2细胞,于12、24、48h后采用MTT法检测细胞增殖抑制率;Hoechst33342核染色,观察细胞形态学变化;24h后收集各组肝癌HepG2细胞,流式细胞术检测细胞周期及凋亡率;RT-PCR检测survivin mRNA表达。结果：MTT法检测显示,Casticin对肝癌HepG2细胞有增殖抑制作用,并存在浓度和时间依赖关系;Hoechst33342染色后,可见核染色质凝集,凋亡细胞呈致密浓染,与对照组相比,Casticin处理后凋亡细胞比例增加;Casticin作用24h后,细胞被阻滞于G2/M期,随药物质量浓度的增加,细胞凋亡率逐渐增加;RT-PCR结果显示,Casticin下调肝癌HepG2细胞survivin mRNA表达。结论：Casticin在体外对肝癌HepG2细胞有明显的增殖抑制和凋亡诱导作用,初步推断Casticin诱发肝癌细胞凋亡与其对survivin基因表达的抑制有关。     

miR-34a-5p通过靶向醛缩酶A抑制肝癌细胞的增殖和迁移

[目的]证明醛缩酶A(ALDOA)在肝癌细胞的增殖和迁移作用并探索miR-34a-5p靶向调控ALDOA的分子机制,为肝癌治疗提供潜在的分子靶标。[方法]分子生物学技术构建了ALDOA表达质粒,蛋白质印迹(Western Blotting)和实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测ALDOA的过表达和敲降效果,CCK-8验证细胞的增殖,划痕实验验证细胞的迁移。[结果]在肝癌细胞中过表达ALDOA能促进肝癌细胞的增殖与迁移(P <0.05),敲降ALDOA后肝癌细胞的增殖与迁移受到抑制(P <0.05),miR-34a-5p是通过靶向结合ALDOA的3’UTR抑制其表达从而抑制肝癌细胞的增殖与迁移(P <0.05)。[结论]miR-34a-5p通过靶向ALDOA抑制肝癌细胞的增殖和迁移。     

姜黄素与5-FU联用对结肠癌SW480细胞的生长抑制与凋亡诱导作用的研究

本文应用MTT检测法、基于EB/AO双染的荧光显微观察法和FITC/PI双染的流式细胞检测技术,从细胞生长、细胞凋亡和细胞周期等方面研究了姜黄素与5-FU联用对结肠癌SW480细胞的效应。结果显示,姜黄素(25μM)分别与低剂量(2.4μM)、中剂量(4.8μM)5-FU联合作用能有效地抑制SW480细胞的生长,诱导细胞凋亡并将细胞周期阻滞在S期。姜黄素与低剂量5-FU联用组的效果好于中剂量(4.8μM)5-FU单用组(P0.05),而姜黄素与中剂量5-FU联用组的效果好于高剂量(9.6μM)5-FU单用组(P0.05),提示姜黄素能增强5-FU抗结肠癌SW480细胞的作用或对5-FU有协同效应。本研究为临床上应用姜黄素作为5-FU治疗结肠癌的辅助用药,以减少5-FU的使用剂量,从而降低其毒副作用提供了初步的实验依据。     

抑制survivin表达增强人肝癌HepG2细胞对高线性能量转移射线的辐射敏感性

探讨了肿瘤细胞中survivin的表达对高线性能量转移(LET)射线辐射敏感性的影响.根据Gen Bank提供的survivin序列,合成特异性survivin-siRNA寡核苷酸,转染人肝癌HepG2细胞,抑制survivin的表达.发现siRNA转染后诱导了HepG2细胞G2/M期阻滞,增加了自发性和辐射诱导的细胞凋亡.在高线性能量转移(LET)碳离子辐照后,siRNA转染细胞的克隆存活率明显下降.这些结果表明survivin表达是HepG2细胞产生对高LET射线辐射抗性的关键因素.     

MPEP阻断mGlu5抑制肝癌细胞HepG2增殖

代谢型谷氨酸受体5（metabotropic glutamate receptors 5, mGlu 5）在神经系统的多种病理生理过程中发挥重要作用. mGlu5与肝细胞癌的发生发展关系密切,其抑制剂2-甲基-6-(苯乙基）-吡啶（2-methyl-6-(phenylethyl)-pyridine, MPEP）能够促进肝癌细胞凋亡,抑制肝癌细胞的迁移.在此基础上,进一步探讨了MPEP与肝癌细胞增殖之间的关系.结果显示：在无血清和有血清的条件下,MPEP均能显著降低肝癌细胞HepG2的细胞活力.同时发现,有血清条件下MPEP能使HepG2细胞周期停滞在G1 期,显著降低HepG2细胞的DNA合成能力和克隆形成能力,并能下调细胞增殖信号ERK 通路的活性.该研究结果为进一步认识MPEP对肝癌细胞的抑制作用提供了新的实验证据.     

姜黄素与5-FU联用对结肠癌SW480细胞的生长抑制与凋亡诱导作用的研究北大核心CSCD

本文应用MTT检测法、基于EB/AO双染的荧光显微观察法和FITC/PI双染的流式细胞检测技术,从细胞生长、细胞凋亡和细胞周期等方面研究了姜黄素与5-FU联用对结肠癌SW480细胞的效应。结果显示,姜黄素(25μM)分别与低剂量(2.4μM)、中剂量(4.8μM)5-FU联合作用能有效地抑制SW480细胞的生长,诱导细胞凋亡并将细胞周期阻滞在S期。姜黄素与低剂量5-FU联用组的效果好于中剂量(4.8μM)5-FU单用组(P<0.05),而姜黄素与中剂量5-FU联用组的效果好于高剂量(9.6μM)5-FU单用组(P<0.05),提示姜黄素能增强5-FU抗结肠癌SW480细胞的作用或对5-FU有协同效应。本研究为临床上应用姜黄素作为5-FU治疗结肠癌的辅助用药,以减少5-FU的使用剂量,从而降低其毒副作用提供了初步的实验依据。     

塞来西布及5- 氟尿嘧啶对人胆管癌QBC939 细胞生长抑制 及诱导凋亡的影响

目的:研究塞来西布(Celecoxib)和5-氟尿嘧啶(5-FU)对人胆管癌QBC939细胞生长抑制和凋亡的影响。方法:体外培养人胆管癌QBC939细胞,噻唑兰比色实验(MTT)观察Celecoxib和5-FU对胆管癌QBC939细胞生长抑制作用;流式细胞术检测细胞生长周期和凋亡率改变。结果:不同浓度的Celecoxib和5-FU可抑制胆管癌QBC939细胞的生长,细胞生长抑制率呈时间-浓度依赖性(P<0.01);实验组QBC939细胞凋亡率随药物浓度的升高逐渐增高(P<0.01),S期细胞逐渐减少(P<0.05),G1期细胞逐渐增加(P<0.05),G2期细胞无明显变化。结论:Celecoxib和5-FU可抑制人胆管癌QBC939细胞的增殖,诱导其凋亡;联合用药效果优于Celecoxib和5-FU单药效果。     

PEI-CS/siRNA复合颗粒对肝癌耐药细胞BEL7402/5-FU中MRE11表达的影响

目的:探讨聚乙烯亚胺-壳聚糖(PEI-CS)/si RNA复合颗粒对肝癌耐药细胞BEL7402/5-FU中MRE11表达的影响。方法:采用复凝聚法将PEI-CS(100μg/m L)与不同浓度的MRE11 si RNA-FAM形成PEI-CS/si RNA复合颗粒,并转染BEL7402/5-FU细胞,用荧光显微镜和Real-time PCR检测转染效率和沉默效率。结果:荧光显微镜观察结果显示:转染细胞48 h后,3.125、6.25、12.5、25、50μg/m L的si RNA与PEI-CS形成的复合颗粒的转染率分别为62.31%、76.09%、79.99%、86.49%、96.59%。转染细胞48、72、96 h后,12.5μg/m L的si RNA与PEI-CS形成的复合颗粒的转染率分别为78.22%、55.76%、42.85%,25μg/m L的si RNA与PEI-CS形成的复合颗粒的转染率分别为83.67%、74.23%、67.45%。Real-time PCR检测结果显示:25μg/m L的si RNA与PEI-CS形成的复合颗粒转染48小时后,对BEL7402/5-FU细胞中MRE11基因的沉默效率为35.4%。结论:聚乙烯亚胺-壳聚糖/si RAN复合颗粒能有效转染肝癌耐药细胞Bel7402/5-FU,并对BEL7402/5-FU细胞中MRE11基因表达有一定抑制作用。     

封闭EFNA2 基因表达对肝癌细胞HepG2 的转移和运动的抑制作用

目的:构建Ephrin-A2(EFNA2)基因的干扰RNA重组腺病毒,并观察其对肝癌细胞HepG2转移能力的影响。方法:合成EFNA2基因的干扰RNA片段,用基因重组技术构建于腺病毒载体pAD-X,经293细胞包装得到高滴度重组腺病毒pAEFNA2/siRNA,并用real-time PCR进行EFNA2基因表达的验证。将重组腺病毒pAEFNA2/siRNA感染HepG2细胞,48h后用transwell小室法检测病毒对HepG2细胞侵袭和运动能力的影响。结果:经验证病毒正确构建,且HepG2细胞感染病毒pAEFNA2/siRNA后48小时的real-time PCR检测结果未见到有EFNA2基因的表达。病毒感染后transwell小室可见,HepG2细胞的侵袭和运动能力均受到显著的抑制(分别为105±12 v.s.21±7cells/孔和194±22 v.s.39±11,P<0.01)。结论:成功构建了重组EFNA2siRNA腺病毒,并观察到封闭EFNA2对肝癌细胞HepG2的侵袭和运动均有抑制作用。     

骨形成蛋白7基因诱导人肝癌细胞的凋亡

目的 构建表达重组人骨形成蛋白7 （bone morphogenic protein 7, BMP7）基因的重组逆转录病毒,观察其对人肝癌细胞HepG2的凋亡诱导活性,并探讨其作用机制。方法 克隆BMP7基因,以loxP同源重组法构成逆转录病毒载体pLP-LNCX-BMP7（pLLBMP7）,转染包装细胞PT67进行病毒包装并测定病毒滴度;将逆转录病毒感染人成骨细胞,MTT法检测细胞生长变化,琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测肿瘤细胞的凋亡;Western blotting检测BMP7,caspase-3和bcl-2蛋白表达。结果 重组逆转录病毒载体pLLBMP7经鉴定连接正确,转染PT67细胞后上清液中可得到病毒,滴度达1×109pfu;MTT检测见pLLBMP7病毒组48和72h细胞抑制率高于对照组（35.1% vs. 5.3%,68.5% vs.18.3%,均p<0.05）,48h可见BMP7蛋白高表达。琼脂糖凝胶电泳出现典型梯形条带;流式细胞仪检测出现凋亡峰,于转染48h后达最高峰,其凋亡百分率高达14.42%;BMP7蛋白高表达时caspase-3蛋白的表达亦有显著升高,但bcl-2蛋白未见表达差异。结论 构建了BMP7逆转录病毒,在体外能够有效地诱导人肝癌细胞HepG2的凋亡,其可能是通过激活caspase-3而发生作用。     

表达人肝再生增强因子肝细胞系生物人工肝治疗安全性 的动物实验初步研究

目的:评价表达人肝再生增强因子基因的HepG2细胞系的细胞培养上清及细胞裂解物的小鼠急性毒性和近期致瘤性。方法:SPF级昆明种小鼠18只,随机分为空白对照组、细胞培养上清组、细胞裂解物组,每组小鼠各6只,腹腔分别接种空白培养液、细胞培养上清、细胞裂解物0.5ml。连续14天,每天观察记录动物毒性反应,14d后宰杀小鼠,取血测血生化指标,及观察病理改变。结果:各组小鼠均存活。除对照组1例小鼠,细胞培养上清组1例小鼠,细胞裂解物组2例小鼠次日活动稍减少外,均未见异常反应。血液生化检测ALT、AST、AFP、TBIL无明显异常,且各组间无差别。普通光镜下各组动物肝脏病理切片染色均未见明显异常。结论:目的细胞系细胞培养上清、细胞裂解物对实验用昆明小鼠无明确毒副作用及短期致瘤性,可能提供一种安全的可用于生物人工肝新的细胞来源。     

表达人肝再生增强因子肝细胞系生物人工肝治疗安全性的动物实验初步研究

目的：评价表达人肝再生增强因子基因的HepG2细胞系的细胞培养上清及细胞裂解物的小鼠急性毒性和近期致瘤性。方法：SPF级昆明种小鼠18只,随机分为空白对照组、细胞培养上清组、细胞裂解物组,每组小鼠各6只,腹腔分别接种空白培养液、细胞培养上清、细胞裂解物0．5ml。连续14天,每天观察记录动物毒性反应,14d后宰杀小鼠,取血测血生化指标。及观察病理改变。结果：各组小鼠均存活。除对照组1例小鼠,细胞培养上清组1例小鼠,细胞裂解物组2例小鼠次日活动稍减少外,均未见异常反应。血液生化检测ALT、AST、AFP、TBIL无明显异常,且各组间无差别。普通光镜下各组动物肝脏病理切片染色均未见明显异常。结论：目的细胞系细胞培养上清、细胞裂解物对实验用昆明小鼠无明确毒副作用及短期致瘤性。可能提供一种安全的可用于生物人工肝新的细胞来源。     

靶向survivin基因的siRNA对姜黄素诱导胃癌细胞凋亡的影响

目的:研究靶向survivin基因的siRNA对胃癌细胞,survivin表达的影响,抑制survivin基因表达对姜黄素诱导胃癌细胞凋亡的影响。方法:通过脂质体将survivinsiRNA导入胃癌细胞株BGC-803,用Real-timePCR和Western-blotting检测转染后细胞内survivin基因表达水平,流式细胞仪和Hochest染色检测细胞凋亡的改变。结果:姜黄素可抑制BGC-803细胞的生长,其生长抑制率和药物浓度与作用时间呈依赖关系;姜黄素作用BGC-803细胞后,survivin蛋白和mRNA表达降低;通过转染survivinsiRNA抑制BGC-803细胞survivin基因的表达能促进姜黄素诱导BGC-803细胞凋亡的作用。结论:靶向抑制survivin基因表达后姜黄素诱导胃癌细胞BGC-803凋亡的作用增强。