内毒素血症时大鼠心肌细胞凋亡与血管紧张素受体表达关系的研究

目的:对脂多糖诱导大鼠内毒素血症时心肌细胞凋亡与血管紧张素II受体AT1、AT2表达变化进行分析。方法:Wistar大鼠随机分为3组(n=10):空白组、脂多糖(LPS)干预2 h(L2)组、LPS干预6 h(L6)组。根据分组情况经腹腔注射LPS(10 mg/kg)制备内毒素血症模型,对照组给予等体积生理盐水腹腔注射。应用免疫组织化学法检测凋亡相关因子Bcl-2和Bax蛋白表达,并通过TUNEL法检测心肌细胞凋亡变化,并采用免疫组织化学、RT-PCR方法观察了大鼠心肌AT1、AT2受体表达变化,电镜观察心肌组织病理变化。结果:LPS干预2 h后Bcl-2阳性细胞表达开始明显上调,之后开始下降,但仍高于对照组(P<0.05)。Bax的表达随着干预时间的延长不断增加,6 h后表达与对照组相比,有显著的统计学差异(P<0.01)。Bcl-2/Bax的比率在干预开始2 h时升高,随后开始下降,心肌细胞凋亡增加。随着LPS干预的时间延长,AT1受体、AT2受体蛋白、mRNA表达水平呈下降趋势,6 h后表达与对照组相比,有显著的统计学差异(P<0.01)。结论:大鼠经LPS干预后随时间延长Bcl-2/Bax的比率呈下降趋势,心肌细胞凋亡增加,与AT1受体、AT2受体表达水平下降呈负相关,说明血管紧张素受体表达下调可能与内毒素血症时大鼠心脏功能损伤有关,为临床预防及治疗全身炎症反应所致心功能损伤提供一条新的思路以及实验室理论基础。     

心房钠尿肽对内毒素血症大鼠肺动脉和主动脉舒缩的影响

目的:探讨心房钠尿肽(ANP)对内毒素血症大鼠(ETR)肺动脉和主动脉内皮和平滑肌细胞的调节作用.方法:24只雄性SD大鼠随机分为对照组,模型组(LPS组),治疗组(ANP组).各组分别静脉注射生理盐水、2 mg/kg的LPS和2 mg/kg LPS与2μg/kg的ANP,4 h后处死动物分离肺动脉、主动脉,进行离体血管务体外灌注实验.结果:LPS组、ANP治疗组主动脉环和LPS组肺动脉环对去甲肾上腺素(NE)引起的收缩作用在NE低浓度时较对照组减弱(P＜0.01),在较高浓度时较对照组均明显增强(P＜0.01);主动脉环ANP治疗组与LPS组无显著差异(P＞0.05);肺动脉环ANP治疗组与对照组相比无显著差异(P＞0.05).ANP可明显改善ETR离体主动脉和肺动脉对乙酰胆碱(ACh)的舒张反应(P＜0.01),ANP可提高ETR离体主动脉和主动脉环对硝普钠(SNP)引起的舒张反应的敏感性(P＜0.01).结论:ANP对ETR肺动脉和主动脉内皮和平滑肌细胞可能存在调节作用.     

硫化氢与内毒素血症大鼠心肌损伤的关系

为探讨硫化氢（hydrogen sulfide,H2S）与内毒素血症大鼠心肌损伤的关系,采用静脉注射脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）的方法制备内毒素血症大鼠模型,将雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、LPS组、LPS＋炔丙基甘氨酸（propargylglycine,PPG,H2S代谢酶抑制剂）组、LPS＋NaHS（H2S供体）组。观察给药后4h内大鼠平均动脉压（mean arterial pressure,MAP）的变化,测定血浆肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）和H2S含量,光学显微镜观察心肌组织形态学变化并测定心肌组织中TNF-α、H2S含量及乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）和髓过氧化物酶（myeloperoxidase,MPO）的活性。结果如下：（1）与正常对照组相比,LPS组大鼠血压迅速下降,血浆TNF-α、H2S含量显著增高,且血浆中H2S含量与血压呈显著负相关,LPS注射后1、2、4h时相关系数分别为-0．936、-0．913和-0．908（均P〈0．05）;心肌组织TNF-α、H2S含量及LDH、MPO活性也明显升高,并出现组织损伤;（2）给予PPG能显著抑制血浆TNF-α、H2S含量的增高,并可显著减轻LPS所致的血压下降（均P〈0．05）和心肌组织损伤,降低心肌组织中TNF-α、H2S含量及LDH、MPO活性;（3）给予NaHS后,与LPS组相比,大鼠血浆TNF-α、H2S含量增高,血压明显下降（均P〈0．05）,心肌组织损伤加重,心肌组织中TNF-α、H2S含量及LDH、MPO活性增高。结果提示,内毒素血症大鼠低血压和心肌损伤的部分原因是由于H2S生成增多。     

内毒素血症大鼠肠系膜微循环中血管内皮细胞与白细胞的粘附性变化

本实验采用中文吖啶橙荧光标记技术,结合微循环观察用显微超高速摄录像装置,观察了内毒素对微血管内白细胞与微静脉血管内皮细胞的粘附性的影响。结果表明,内毒素对大鼠的血压、微血管口径和微动脉血流速度影响不大,微静脉血流速度在滴注内毒素后４５和６０ｍｉｎ下降了１６．６７％和１７．９５％（Ｐ＜０．０５）;但内毒素能迅速改变微静脉内的白细胞流态,明显增加附壁滚动的白细胞数和粘附白细胞密度指数,经测量同一微静脉内的白细胞和红细胞流速,求得白细胞与微静脉内皮细胞之间的破裂力在５ｍｉｎ和１５ｍｉｎ时下降了２５．９６％和４２．８８％（Ｐ＜０．０１）,下降趋势持续整个实验过程;说明内毒素能明显地增加白细胞与微静脉血管内皮细胞之间的粘附力。由此提示,研究白细胞与微静脉血管内皮细胞之间粘附力增强机制及寻找其抑制因素对改善微循环紊乱、抢救休克具有重要的临床意义。     

内毒素血症对大鼠肝细胞线粒体的损伤及其机制

目的:观察内毒素血症大鼠肠粘膜与肝细胞线粒体氧化磷酸化功能的损伤及其机制.方法:测定血PaO2和肠黏膜Phi,提取肝细胞线粒体测定其超氧阴离子O-2生成量,同时测定线粒体呼吸链功能:ADP/O、呼吸控制率(RCR).结果:在内毒素血症大鼠动脉血氧分压尚正常时,其肝细胞线粒体O-2生成量显著增加.结论:在内毒素血症的发病机制中存在由于肝细胞线粒体内源性氧自由基生成增加对线粒体呼吸功能所造成的氧化损伤.肠粘膜酸中毒的发生提示细胞利用氧的功能障碍.     

大鼠内毒素血症不同时期血CGRP和背根神经节CGRP mRNA水平的变化

本文采用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法测定大鼠内毒素血症不同时期胸腰段背根神经节降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）ｍＲＮＡ水平的改变,结合血浆ＣＧＲＰ水平的改变,以期全面了解大鼠内毒不血症不同时期ＣＧＲＰ释放与合成的变化。结果显示：注射内毒素（５ｍｇ／ｋｇ）后３０ｍｉｎ时,大鼠血浆ＣＧＲＰ开始增高,而背根神经节ＣＧＲＰ ｍＲＮＡ水平无明显变化;注射内毒素后３ｈ时,血浆ＣＧＲＰ及背根神经节ＣＧＲＰ     

Mipu1基因在内毒素血症小鼠组织中的表达研究

Mipu1是本研究室首次克隆的一个核转录因子,其在内毒素血症中的表达改变情况目前尚不清楚.本研究采用real-time PCR方法检测了Mipu1基因在内毒素血症(12 mg/kg,2 h)小鼠心、肝、肺、脾、脑、肠和骨骼肌7个器官组织中的表达改变.结果发现,LPS(12 mg/kg,2 h)处理可促进小鼠肺和脾组织中Mipu1基因表达增高;但可抑制小鼠心、肝、脑、肠和骨骼肌组织中Mipu1基因的表达.Mipu1基因在内毒素血症小鼠各器官中表达的改变可能与其在内毒素血症中的生物学功能密切相关.     

大鼠内毒素血症不同时期血浆CGRP和背根神经节CGRP mRNA水平的变化

本文采用逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）方法测定大鼠内毒素血症不同时期胸腰段背根神经节降钙素基因相关肽（CGRP）mRNA水平的改变,结合血浆CGRP水平的改变,以期全面了解大鼠内毒素血症不同时期CGRP释放与合成的变化。结果显示：注射内毒素（5mg／kg）后30min时,大鼠血浆CGRP开始增高,而背根神经节CGRPmRNA水平无明显变化;注射内毒素后3h时,血浆CGRP及背根神经节CGRPmRNA均明显增高．分别为142％和32％,8h时则进一步增高,分别为216％和85％。提示内毒素不仅刺激外周组织释放CGRP,而且还能通过某些机制激活背根神经节CGRPmRNA的转录,使CGRP合成增加,以作为CGRP大量释放的重要补充来源。     

脐带间充质干细胞对内毒素血症诱发的大鼠急性肝功能损伤的影响

目的评价脐带间充质干细胞（hUC-MSCs）对内毒素血症诱发的大鼠急性肝功能损伤的影响及其与凋亡机制的关系。 方法6周龄雄性SD大鼠18只,随机分为3组,分别是对照组（C组）、内毒素血症组（M组）和内毒素血症+hUC-MSCs治疗组（M+cells组）,每组6只。大鼠腹腔注射5 mg/kg脂多糖（LPS）诱导内毒素血症模型,并经尾静脉注射含20×10⁶个hUC- MSCs。4 h时检测血清谷草转氨酶（AST）和谷丙转氨酶（ALT）,ELISA方法检测肿瘤坏死因子（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）,HE常规染色鉴定肝脏组织病理,Western Blot法检测肝脏组织抗凋亡蛋白Bcl-2、促凋亡蛋白Bax、凋亡信号调节激酶1（ASK1）、应激活化蛋白激酶即JUN氨基末端激酶（JNK）蛋白的表达。多组间比较采用单因素方差分析,相关分析选用pearson。 结果（1）C组AST、ALT、TNF-α和IL-6浓度分别为（74.66±6.39）U/ L、（40.07±6.07）U/ L、（37.74±3.08）ng/L和（0.42±0.07）ng/L;与M组比较（310.75±9.13）U/L、（107.04±10.04）U/ L、（160.32±4.88）ng/L和（0.90±0.09）ng/L,差异具有统计学意义（P均 < 0.05）,M组AST、ALT、TNF-α、IL-6浓度分别为（310.75±9.13）U/L、（107.04±10.04）U/ L、（160.32±4.88）ng/ L和（0.90±0.09）ng/L,与M+cells组比较（204.49±15.36）U/L、（71.24± 7.34）U/ L、（117.61±9.37）ng/ L和（0.60±0.10）ng/L,差异具有统计学意义（P均 < 0.05）。（2）C组大鼠肝细胞形态正常,可见肝小叶结构清晰,肝汇管区无炎性细胞浸润,M组大鼠肝小叶散在点状坏死肝细胞伴炎性浸润,肝细胞间隙散布增生的Kuffer细胞,M+cells组大鼠肝小叶炎性细胞浸润及肝细胞间隙Kuffer细胞浸润改善。（3）与C组比较,M组大鼠肝脏组织JUN、ASK1和Bax蛋白表达均增高（P均 < 0.05）,Bcl-2蛋白表达降低（P < 0.05）;与M组比较,M+cells组大鼠肝脏组织JUN、ASK1和Bax蛋白表达降低（P均 < 0.05）,Bcl-2蛋白增加（P < 0.05）。（4）单因素相关分析显示大鼠血清ALT、AST与TNF-a指数呈正相关（r值分别为0.9580、0.9865,P均< 0.05）,大鼠血清ALT、AST与IL-6指数呈正相关（r值分别为0.9892、0.9630,P均 < 0.05）,大鼠血清ALT、AST分别与BAX、ASK1、JNK指数均呈正相关（r值分别为0.9993、0.9851、0.7901、0.9864、0.9557、0.7128,P均 < 0.05）,大鼠血清ALT、AST分别与BCL-2指数均呈负相关（r值分别为-0.8824、-0.9338,P均 < 0.05）,大鼠血清TNF-α分别与BAX、ASK1、JNK指数均呈正相关（r值分别为0.9466、0.8958、0.6025,P均< 0.05）,大鼠血清TNF-α与BCL-2指数呈负相关（r = -0.6025,P均 < 0.05）,大鼠血清IL-6分别与BAX、ASK1、JNK指数均呈正相关（r值分别为0.9941、0.9997、0.8679,P均< 0.05）,大鼠血清IL-6与BCL-2指数呈负相关（r = -0.8078,P均 < 0.05）。 结论hUC-MSCs具有减轻内毒素血症大鼠急性肝功能损伤的作用,其机制与抑制肝脏细胞凋亡相关。     

内毒素致大鼠肺损伤时肺组织β受体的变化与膜磷脂代谢的…

采用放射性配基结构分析法,观察内毒素致大鼠急性肺损伤时肺β－肾上腺素能受体（β－ＡＲ）的变化。分别用荧光偏振法和高效液相色谱测定肺组织膜脂流动性和磷脂含量。结果显示：（１）静脉注射内毒素后４ｈ,大鼠肺β－ＡＲ的最大结合容量明显降低,较对照组减少４７％;（２）内毒素组肺膜脂流动性和磷脂含量均明显降低,同时伴有肺组织磷脂酶Ａ２（ＰＬＡ２）活性升高。提示：（１）β－ＡＲ下调导致其介导的功能减弱,在内毒素     

KLF4在内毒素血症小鼠中的表达模式及其意义

目的探讨Kruppel样因子4（Kruppel-like factor 4,KLF4）在内毒素血症小鼠中的表达模式及意义。方法运用实时荧光PCR技术和Western blot技术,分别从mRNA水平和蛋白水平探讨内毒素血症小鼠肝脏和肺脏中KLF4的表达;运用生物信息学技术,对启动子区含有KLF4的结合位点的炎症介质基因进行了预测;运用RT-PCR技术,从mRNA水平探讨内毒素血症小鼠肝脏和肺脏中IL1β的表达模式。结果内毒素血症小鼠肝脏和肺脏中KLF4 mRNA的表达下凋,KLF4蛋白的表达先下凋后升高;IL-18、IL-15、IL-12、IL-18、IL-10等炎症介质基因的启动子区均含有KLF4的结合元件,这些炎症基因的表达可能直接受到KLF4的调控;内毒素血症小鼠肝脏和肺脏中IL-IB的表达模式与KLF4的表达模式呈相反趋势。结论内毒素血症小鼠肝脏和肺脏中KLF4表达下调,KLF4在炎症介质基因表达调控中可能具有重要作用。     

解毒舒肝颗粒对CCL4致大鼠慢性肝损伤的保护作用研究

目的:探讨CCL_4慢性肝损伤模型大鼠肝功能指标及肝组织氧自由基代谢的变化以及解毒舒肝颗粒对其变化的影响。方法:用40?L_4花生油混合液皮下注射诱导复制慢性肝损伤模型,并用不同剂量的解毒舒肝颗粒进行干预,腹主动脉取血测定肝功能相关指标ALT、AST、ALB、TP、A/G;取肝组织匀浆测SOD、MDA、GSH-Px。结果:CCL_4急性肝损伤模型大鼠血清中AST、ALT含量均明显升高;肝组织中SOD、GSH-Px含量下降明显,MDA含量上升;解毒舒肝颗粒对上述指标有一定的逆转作用。结论:解毒舒肝颗粒对CCL_4慢性肝损伤较好的防治作用,机制可能与其抗氧化活性,清除氧自由基及调节代谢,促进肝细胞蛋白的合成有关。     

骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠肝损伤的实验研究

目的:了解肝损伤大鼠在输注骨髓间充质干细胞后肝功能生化指标和肝脏组织病理变化情况,为临床应用提供实验依据。方法:将大鼠随机分为正常组和造模组。造模组采用腹腔注射四氯化碳的方法构建,然后将造模组随机分为干细胞移植治疗组、模型对照组。干细胞移植组经门静脉输注标记的骨髓间充质干细胞。3周后处死大鼠。然后检测大鼠肝功能、肝脏病理改变分析干细胞移植治疗肝损伤效果。结果:干细胞移植治疗3周后,大鼠的肝脏与对照组比较,明显恢复,但是并没有恢复到正常水平。结论:骨髓间充质干细胞对肝损伤的大鼠有治疗作用。     

Bone Marrow and Nonbone Marrow Toll Like Receptor 4 Regulate Acute Hepatic Injury Induced by Endotoxemia

Background

Toll-like receptors (TLRs) are expressed in immune cells and hepatocytes. We examined whether hepatic Toll-like receptor 4 (TLR4) is involved in the acute hepatic injury caused by the administration of lipopolysaccharide (LPS) (septic shock model).

Methods

Wild type (WT), TLR4-deficient and chimera mice underwent myeloablative bone marrow transplantation to dissociate between TLR4 expression in the liver or in the immune-hematopoietic system. Mice were injected with LPS and sacrificed 4 hours later.

Results

Compared to TLR4 deficient mice, WT mice challenged with LPS displayed increased serum liver enzymes and hepatic cellular inflammatory infiltrate together with increased serum and hepatic levels of interleukin 1β (IL-1β), tumor necrosis factor α (TNFα) ,Up-regulation of hepatic mRNA encoding TLR4, IκB and c-jun expressions. TLR4 mutant mice transplanted with WT bone marrow were more protected than WT chimeric mice bearing TLR4 mutant hemopoietic cells from LPS, as seen by IL-1β and TNFα levels. We then used hepatocytes (Huh7) and macrophages from monocytic cell lines to detect TLR mRNA expression. Macrophages expressed a significantly higher level of TLR4 mRNA and TLR2 (more than 3000- and 8000-fold respectively) compared with the hepatocyte cell line. LPS administration induced TLR4 activation in a hepatocyte cell line in a dose dependent manner while TLR2 mRNA hardly changed.

Conclusions

These results suggest that TLR4 activation of hepatocytes participate in the immediate response to LPS induced hepatic injury. However, in this response, the contribution of TLR4 on bone marrow derived cells is more significant than those of the hepatocytes. The absence of the TLR4 gene plays a pivotal role in reducing hepatic LPS induced injury.     

慢性溴氰菊酯摄取对大鼠胃黏膜损伤及P物质的表达的影响

目的:探索溴氰菊酯慢性中毒对大鼠胃黏膜的病理损伤及损伤后P物质表达的影响.方法:实验组大鼠分别给予不同荆量溴氰菊酯灌胃,对照组仅给予橄榄油.取胃体部组织,制成石蜡切片,HE及免疫组织化学染色,镜下观察胃黏膜损伤及胃黏膜组织P物质的表达情况,并对损伤程度进行累计积分、壁细胞计数.结果:高剂量组大鼠胃粘膜慢性损害病理积分与各组相比差异均有显著性(P＜0.05);壁细胞计数与对照组相比较其差异有P＜0.05).免疫组化发现SP在实验组大鼠胃黏膜组织中呈强阳性表达,在对照组则呈弱阳性表达;平均光密度(OD)值显示高、中剂量组之间及与其余各组之间差异均有显著(P＜0.05l.结论:溴氰菊酯对大鼠胃黏膜有较明显的慢性损伤,SP可能参与胃黏膜局部病变.     

感觉神经损伤性盐敏感性高血压大鼠心、肾AT1R的表达

目的对感觉神经损伤性盐敏感性高血压大鼠的心肌、肾脏组织中的血管紧张素Ⅱ1型受体（AT1R）在mRNA和受体水平的表达进行检测,探讨AT1R与盐敏感性高血压的关系。方法用乳鼠皮下注射辣椒辣素法建立模型。哺乳期后,大鼠被随机分成4组：对照＋正常盐饮食组（CON-NS）;对照＋高盐饮食组（CON-HS）;辣椒辣素＋正常盐饮食组（CAP-NS）;辣椒辣素＋高盐饮食组（CAP-HS）。至7周龄（分组饲养后第4周）处死大鼠,免疫组织化学方法和反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）分别检测大鼠心肌和肾脏AT1R蛋白,以及AT1 R mRNA的表达。结果①Wistar大鼠在给予不同程度的感觉神经损伤和饲料干预后,各组大鼠尾部收缩压均有明显增加,最终CAP-HS组的尾收缩压显著高于其他三组（P〈0.01）。②免疫组织化学结果显示,CAP-HS组组织有显著的AT1R蛋白表达（P〈0.01）;CON-HS组肾脏、心肌组织中AT1R蛋白表达高于CON-NS组（P〈0.05）。③RT-PCR检测基因表达,与对照组CON-NS相比,实验组CAP-HS的AT1R mRNA表达显著升高（P〈0.01）;CON-HS组肾脏、心肌组织中AT1 R mRNA表达有显著性（P〈0.05）。结论感觉神经损伤性盐敏感性高血压大鼠心、肾AT1R表达升高,AT1R表达水平的差异可能与盐敏感性高血压的形成有关。     

气温突变对高血压大鼠心梗发病及心肌损害的影响

目的:探索气温突变对高血压大鼠心梗发病及心肌损害的影响。方法:给予肾动脉半结扎大鼠一次维生素D370 U/kg体重腹腔注射,22℃环境下饲以高脂饲料。10周后随机分为S、J和D三组,S组予以30分钟内升温至40℃处理,J组予以30分钟内降温至4℃的处理,D组为对照组。结果:S组大鼠急性心梗发病率为59.09%,J组大鼠发病率为26.32%,D组发病率为28.57%,S组大鼠以及J组大鼠血清肌钙蛋白、肌酸激酶、谷草转氨酶、肌酸激酶同工酶、乳酸脱氢酶含量(P<0.05)均明显高于D组大鼠,S组与D组大鼠肌钙蛋白等含量(P>0.1)无显著差异。结论:气温骤升、骤降均能加重造成心肌损害,但夏季气温骤升所造成的急性心梗发病率高于气温的骤降。     

大鼠脑创伤后caspase-3的过度表达与细胞凋亡的关系

目的：探讨大鼠脑创伤后海马神经组织中casepase-3表达及其在细胞凋亡中的机制。方法：雄性Wistar大鼠72只随机分成对照组和创伤组。用Marmarou方法造成大鼠重型弥漫性颅脑创伤,采用免疫组织化学检测海马CA1区神经细胞casepase-3蛋白表达情况,原位细胞DNA断裂检测末端标记（TUNEL）法观察大鼠海马CA1区神经细胞凋亡动态变化。同时行TUNEL与caspase-3双标染色。结果：对照组海马区神经细胞casepase-3未见明显表达,创伤组海马CA1区神经细胞casepase-3表达在伤后3小时开始升高,伤后3天达高峰（P〈0．01）,伤后7天下降明显。对照组海马区未见TUNEL阳性细胞,创伤组海马区TUNEL阳性细胞伤后3小时开始增多,伤后3天达高峰（P〈0．01）,伤后7天下降。可见创伤组TUNEL染色与caspase-3免疫染色双标阳性的细胞伤后6小时细胞数量逐渐增多,于伤后3天达高峰（P〈0．01）,伤后7天双标阳性细胞数量下降。Casepase-3表达与TUNEL阳性细胞明显相关（P〈0．01）。结论：大鼠脑创伤后casepase-3的过度表达是影响大鼠脑创伤后神经细胞凋亡原因之一,抑制casepase-3活性表达对神经组织起保护作用。     

大鼠脑创伤后caspase-3的过度表达与细胞凋亡的关系

目的:探讨大鼠脑创伤后海马神经组织中casepase-3表达及其在细胞凋亡中的机制。方法:雄性Wistar大鼠72只随机分成对照组和创伤组,用Marmarou方法造成大鼠重型弥漫性颅脑创伤,采用免疫组织化学检测海马CA1区神经细胞casepase-3蛋白表达情况,原位细胞DNA断裂检测末端标记(TUNEL)法观察大鼠海马CA1区神经细胞凋亡动态变化。同时行TUNEL与caspase-3双标染色。结果:对照组海马区神经细胞casepase-3未见明显表达,创伤组海马CA1区神经细胞casepase-3表达在伤后3小时开始升高,伤后3天达高峰(P0.01),伤后7天下降明显。对照组海马区未见TUNEL阳性细胞,创伤组海马区TUNEL阳性细胞伤后3小时开始增多,伤后3天达高峰(P0.01),伤后7天下降。可见创伤组TUNEL染色与caspase-3免疫染色双标阳性的细胞伤后6小时细胞数量逐渐增多,于伤后3天达高峰(P0.01),伤后7天双标阳性细胞数量下降。Casepase-3表达与TUNEL阳性细胞明显相关(P0.01)。结论:大鼠脑创伤后casepase-3的过度表达是影响大鼠脑创伤后神经细胞凋亡原因之一,抑制casepase-3活性表达对神经组织起保护作用。     

Spin Trapping of Free Radicals Produced in vivo in Heart and Liver During Endotoxemia

Studies using free radical scavengers and measurements of lipid peroxidation have suggested that free radicals are generated during endotoxemia. Conclusions from these studies have implied that free radicals may participate in the sequence of pathologic events following endotoxin challenge in the experimental animal. Current inferences of free radical generation and involvement have been derived from indirect evidence and are therefore inconclusive. To quantitate the generation of free radicals in vivo during endotoxemia this study employed the use of electron paramagnetic resonance spectroscopy (EPR) combined with spin trapping techniques. Five minutes before intraperitoneal endotoxin administration, trimethoxy-a-phenyl-t-butyl-nitrone [(MeO), PBN] was administered intraperitoneally. Experimental animals were always matched with control animals receiving no endotoxin. At either five minutes or twenty-five minutes following endotoxin administration animals were decapitated and hearts and livers were rapidly taken for lipid extraction and EPR evaluation. Analysis of the EPR spectra revealed hyperfine splitting constants that indicated the presence of carbon-centered radical spin adducts in both organ tissues from animals exposed to endotoxin for twenty-five minutes. No signals were present in hearts and livers taken five minutes after endotoxin administration. EPR evaluation did not indicate spin adduct formation in control tissue. These data directly demonstrate that activation of processes in vivo involving free radical generation occur early during endotoxemia, but are not detectable immediately after the endotoxin challenge.