真菌原生质体技术在遗传学和虫生真菌研究领域中的应用

原生质体融合技术自70年代中到80年代末的十几年间有着相当快速的发展过程,从无机试剂诱导的融合(Binding,1974;Ferenczy,1975)到PEG辅助融合(Kao,1974)以至发展到电场诱导原生质体融合(Zimmermann, 1980; Halfmannet al.1983; Call et al. 1984;Broda et al. 1987; Foerster et al.,1986; Fikus et al., 1985; Magae etal., 1986; 汪和睦1986a,b;张博润等,1986;彭卫宪等,1987)反映了原生质体融合方法的演变全貌。随着原生质体融合手段的不断更新,在遗传学研究领域中,利用这项技术进行     

人参原生质体培养再生愈伤组织

人参原生质体培养未见报道成功。Harn(1974)曾用人参幼叶,幼根和上胚轴进行原生质体分离,但得到的数量很少,无法进行培养。本实验以人参培养细胞为材料,通过培养再生了愈伤组织。     

钙在IAA诱导绿豆下胚轴原生质体膨大过程中的作用

含钙培养液(对照)和仅用IAA处理的原生质体的体积和~(45)Ca~(2 )放射性强度均无变化。IAA处理含钙培养液中的原生质体,5min后~(45)Ca~(2 )积累明显增多,体积开始膨大。处理30min时~(45)Ca~(2 )积累最多,此时原生质体的膨大效应最好;随后~(45)Ca~(2 )积累和膨大效应逐渐下降。K~ 、Zn~(2 )、Ba~(2 )、Mg~(2 )等也可在一定程度上代替Ca~(2 )使原生质体体积膨大。原生质体的吸水在膨大中起着一定作用。EGTA、LaCl_3和verapamil均抑制IAA诱导的原生质体~(45)Ca~(2 )积累和体积膨大。说明Ca~(2 )可能在6-BA诱导原生质体膨大的过程中起着重要作用。     

分子遗传学术语解释(续)

原生质体融合(Protoplast fusion) 原生质体是一种没有细胞壁的细胞,仅有一层质模包裹着。通过两个原生质体的结合(joining)、或者一种原生质体与另一种细胞的任何成分的结合而获得遗传转化的一种工具,在植物遗传学、微生物学、病毒学等学科中得到广泛应用。     

水稻原生质体再生小植株

水稻的原生质体培养一直是引人注意的问题,多年来进展不大。近年来Fujimura等Coulibaly等Yamada等分别由水稻盾片和未成熟胚愈伤组织原生质体;胚芽鞘幼嫩愈伤组织的原生质体和水稻雄性不育系细胞游离原生质体得到再生植株。我们用水稻(Oryzasativa)农虎6号种子胚诱导愈伤组织制备原生质体,也培养得到再生小植株,结果简报如下:     

藻酸盐珠粒对少量原生质体的滋养培养作用

最近,K.I.Draget等人指出,植物原生质体在藻酸钙珠中固定化的优点是(1)提供了对抗环境的机械压力、迅速变化或明显的梯度差异的保护;(2)更易于处理;(3)产生的原生质体平板效率高于未固定化原生质体。他们通过把原生质体埋置于琼脂块里,然后在含有营养细胞的液体培养基中培养,最后,从五种水稻品种的原生质体中获得了较高的再生率。澳大利亚联邦科学与工业研究组织(CSIRO)的科学家P.J.Larkin等人发现,把原     

一种溶高等担子菌细胞壁酶的制备

我们试图以高等担子菌(主要是食用菌)为材料进行原生质体融合,以期获得新型杂种菌株。我们先后采用过制备植物原生质体的纤维素酶(上海东风生化试剂厂生产和从日本进口)、制备酵母菌原生质体的蜗牛酶(来源于中国科学院生物物理研究所)、和制备细菌原生质体的溶菌酶(上海禽蛋二厂生产)单独或混合酶解担子菌菌丝,均难以获得担子菌原生质体。其     

植物原生质体培养研究进展

自从Ｃｏｃｋｉｎｇ(196 0 )用酶法首次分离出有活性的原生质体 ,1971年Ｔａｋｅｂｅ等首次从烟草叶片分离原生质体 ,经培养获得再生植株 ,原生质体的研究和应用进入了一个新阶段。1　原生质体培养影响因子的研究1 1　培养基种类及成分不同植物原生质体培养的基本培养基不尽相同。培养基种类影响到原生质体的分裂频率、植板率以及小愈伤组织的出现等[1,2 ] 。潘增光[3 ] 等比较了 4种培养基 (ＭＳ、ＭＴ、改良ＭＴ、ＢＨ3)对苹果叶肉原生质体培养的影响 ,结果表明 ,只有在改良ＭＴ培养基中能观察到多细胞团形成 ,而在ＭＳ、ＭＴ、ＢＨ3作为…     

豆科植物的体细胞杂交

包括许多重要粮食和饲料作物在内的豆科植物的体细胞杂交研究已有20多年历史。早在70年代，Kao等[15]即利用豌豆、大豆原生质体与其它植物原生质体进行融合，观察到可以分裂的大豆（＋）豌豆、玉米（＋）大豆、小麦（＋）大豆异核体，大麦和大豆融合细胞最后形成细胞团，同时指出核融合发生在融合后的第一次分裂过程中。1974年，Kartha等[16]将大豆（Glycinemax）悬浮培养细胞原生质体与油菜原生质体融合，也得到细胞团。1976年，Constabel等[10]得到了大豆悬浮培养细胞与豌豆、Viciahajastana（一种野豌豆）、烟草、番红花叶肉细胞原生质…     

美味猕猴桃子叶愈伤组织的原生质体培养和再生植株

从B_5和NN-69培养基(含1mg/L 2,4-D)上分别选出美味猕猴桃子叶愈伤组织系A_(11)B_2和A_(16)N_1。在B_5原生质体培养基中,A_(11)B_2的原生质体再生细胞形成小细胞团;在NN-69原生质体培养基中,A_(16)N_1的原生质体再生细胞能持续分裂形成愈伤组织。经过分步诱导再生,获得A_(16)N_1原生质体再生植株。     

植物原生质体培养及体细胞杂交植物名录

自六十年代初,英国Cocking采用酶法分离植物原生质体获得成功以来,经过十年多时间的努力,Takebe等(1971)首次证明植物原生质体有全能性。从那时起大约已有10个科、19个属、40余种植物(大部分属于茄科)的原生质体已再生成植株。随着植物原生质体培养及体细胞杂交技术的进展,显示了它在开辟农作物育种新途径及遗传工程研究的巨大潜力,     

钙在6-BA诱导黄化绿豆幼苗下胚轴原生质体体积膨大中的作用

对照和仅用6-BA(无Ca~(2 ))处理的原生质体的体积均无变化。含钙培养液中的原生质体经6-BA处理后10min~(45)Ca~(2 )积累明显增多,15min后开始膨大;处理30min时~(45)Ca~(2 )积累最多,此时原生质体的膨大效应最好;随后~(45)Ca~(2 )积累和膨大效应逐渐下降。两者的时间进程十分相似。K~ 、Zn~(2 )、Ba~(2 )、Mg~(2 )等可在不同程度上代替Ca~(2 )的作用。EGTA、verapamil和LaCl_3处理均可使原生质体~(45)Ca~(2 )累积降到对照的水平,膨大效应完全消失。表明Ca~(2 )可能在6-BA诱导原生质体膨大的过程中起着重要作用。     

应用ImageMaster^TM图象分析系统计算原生质体活力

植物原生质体的活力高低是代表原生质体样品质量的重要指标之一,它也反应了用于游离原生质体的原始植物材料本身的质量高低。原生质体活力高证明所用的原始材料质量高,原生质体活力低说明这种材料质量低。因此估算样品中原生质体的活力,是原生质体培养、原生质体融合、基因转化等涉及原生质体的各项生物工程中的常规工作。可是原生质体的计数却是十分费力。为了克服这一困难,我们试图借用Pharmacia公司的ImageMaster~(TM)图象分析系统来完成这一过程。     

脯氨酸对黑麦原生质体膨胀势的影响

从未经抗寒锻炼的黑麦(Secale cereale cv.Puma)叶片中分离的原生质体,悬浮于山梨醇或NaGl,CaCl_2(10:1)溶液中,其可忍受的表面积增加值(TSAI_(50))为1000μm~2左右,该值不受原生质体收缩程度的影响。悬浮于脯氨酸溶液中的原生质体,其TSAI_(50)随收缩程度而改变。等渗脯氮酸溶液(0.53Osm)中的原生质体若在低渗溶液中膨胀,TSAI_(50)为1000μm~2左右,而在0.83,1.20和2.0 Osm高渗脯氨酸溶液中收缩后的原生质体再膨胀,它们的TSAI_(50)分别增加到1710±85,1873±91μm~2和2200±283μm~2。这些数值与经抗寒锻炼后的原生质体在高渗收缩后的TSAI_(50)相似。脯氨酸增加未经锻炼的原生质体膨胀势的效应发生在收缩过程中,与膨胀时的介质种类无关。     

烟草原生质体微滴培养及细胞早期分裂的定点观察

原生质体培养的常规技术是群体培养。而建立单个(或少数)原生质体培养技术则可以跟踪每一原生质体的动态变化与研究不同类型原生质体之间的相互关系,从而使有关的细胞生物学研究更加精确深入;还可以有选择地单独培养细胞融合体、突变体、转化细胞等遗传操作     

啤酒酵母原生质体的制备、融合及再生

本文以16号(his~-)啤酒酵母和STA(ade~-)啤酒酵母作出发菌株进行原生质体融合,并探讨了菌龄、酶解时间,菌体分散程度和培养基种类等对原生质体融合的影响。     

琼脂糖凝胶透镜体:原生质体融合的新方法

西德Christian-Albrechts大学的H.Binding等人描述了一种植物原生质体融合的新方法,步骤是:用一种含有0.2M Ca(No_3)_2的薄层琼脂糖于pH6.2下复盖培养皿底部,把沉积的原生质体制备物置于凝胶表面,然后,用琼脂糖-硝酸钙溶液的小滴包覆原生质体,以形成夹层式或条纹状的琼脂糖透镜体。最后用0.18M Ca(NO_3)_2水溶液于pH10.3下包覆透镜体。琼脂糖透镜体使原生质体相互紧密接触,加入0.18M Ca(NO_3)_2(pH10.3),使原生质体挤在一块。温育20分钟后,用培养基替代Ca(NO_3)_2溶液。     

米曲霉两株营养缺陷型原生质体的形成和再生的条件实验*

采用1%溶壁酶加1%玛瑙螺酶(褐云玛瑙螺消化液的冷冻干粉)的混合酶,自米曲霉(Aspergillus oryzae)的两株营养缺陷型中获得了大量的原生质体,并比较了渗透压稳定剂、温度、菌丝体的培养基成分等因素对原生质体形成和再生的作用。无机盐类稳定剂(NaCl、KCl)获得了高产量的原生质体,而有机类(蔗糖、甘露醇、山梨醇)做为稳定剂不甚理想。对120和720菌株的原生质体在高渗再生培养基上进行再生试验,再生率分别为52%和65%。     

对原生质体纯化技术的评估

苏格兰作物研究所及Polytechnic的S.Millam等比较了纯化芸苔原生质体的3种技术的效果:(1)在13％甘露醇中低速(150g)离心沉淀;(2)用蔗糖溶液浮集;(3)在覆以等体积Percoll的甘露醇中的低速离心沉淀。 Millam等未发现3种方法中总原生质俸回收率有显著差异。方法(1)、(3)的同收率为35.6～37.6％,而方法(2)的回收率为26.6％。但是,液泡化与叶绿体型原生质体亚类间的相对回收率有显著差异。方法(3)的液泡化原生质体回收     

米曲霉两株营养缺陷型原生质体的形成和再生的条件实验

采用1%溶壁酶加1%玛瑙螺酶(褐云玛瑙螺消化液的冷冻干粉)的混合酶,自米曲霉(Aspergillus oryzae)的两株营养缺陷型中获得了大量的原生质体,并比较了渗透压稳定剂、温度、菌丝体的培养基成分等因素对原生质体形成和再生的作用。无机盐类稳定剂(NaCl、KCl)获得了高产量的原生质体,而有机类(蔗糖、甘露醇、山梨醇)做为稳定剂不甚理想。对120和720菌株的原生质体在高渗再生培养基上进行再生试验,再生率分别为52%和65%。