SCGE技术检测镉对大弹涂鱼外周血细胞DNA损伤

本研究以大弹涂鱼为实验材料,采用SCGE技术并对该技术中通过对缓冲液、铺胶方法、裂解液及不同解旋时间的优化来检测镉对大弹鱼外周血细胞DNA的损伤作用.结果表明,染毒后镉使大弹涂鱼外周血细胞均出现了拖尾现象,经过筛选,采用Ringer's缓冲液、"三明治"式铺胶法、裂解液C、40 min解旋时间进行实验效果最好.通过优化SCGE条件所得结果来看,本研究提高了SCGE对大弹涂鱼血细胞DNA损伤的检测效率,为SCGE技术间接作为水环境监测的有效工具提供更多的方法学参考.     

DNA断裂检测方法──单细胞凝胶电泳法

单细胞凝胶电泳(single cell gel electrophoresis assay,SCGE)也叫彗星试验(comet assay),是一种快速、敏感、简便、廉价的检测单个哺乳动物细胞DNA断裂的技术,目前已用于检测氧化、紫外线和电离辐射引起的损伤,以及三氯乙烷、丙烯酰胺等化学物及老化、吸烟所致损害的研究.文章介绍SCGE的发展、检测分析方法、原理及其在DNA损伤与修复、生物监测、遗传毒理研究、肿瘤治疗方案优化和疗效研究方面的应用前景．     

Ames实验及彗星实验检测辅酶NADH的抗突变作用

采用Ames实验及单细胞凝胶电泳（SCGE,彗星实验）,对还原型辅酶NADH进行抗突变研究。NADH中、高剂量组在加或不加S9的情况下,均能不同程度地抑制由致突变物引起的TA98、TA100回变菌落数的增加,降低SCGE拖尾细胞率。表明还原型辅酶NADH具有一定的抗突变作用。     

苯胺致小鼠肝细胞和淋巴细胞DNA损伤及其修复效应

目的研究苯胺的遗传毒性及其修复动力学效应。方法应用单细胞凝胶电泳(SCGE)技术,检测100 mg/kg苯胺单次灌胃3、8、16、24、32 h后,对KM小鼠肝细胞和淋巴细胞DNA损伤及时效关系。结果 SCGE实验结果显示肝细胞从8 h开始尾长和尾矩逐渐增大,至16 h DNA损伤程度达到最大,相比对照组差异有显著性(P0.01),随着时间的延长,DNA损伤程度逐渐减轻,在32 h DNA损伤已恢复正常,与对照组相比差异无显著性(P0.05);而淋巴细胞则在16 h开始尾长和尾矩逐渐增大,24 h时达到最大,32 h时DNA损伤逐渐恢复。结论苯胺对肝细胞和淋巴细胞具有潜在的遗传毒性;2个DNA损伤指标的变化存在明显的时间效应关系,说明这两种细胞具有有效DNA修复机制。     

DNA damaging effects of carbofuran and its main metabolites on mice by micronucleus test and single cell gel electrophoresis

The DNA damaging effects of the carbamate pesticide carbofuran and its four metabolites (carbofuranphenol, 3-ketocarbofuran, 3-hydrocarbofuran and nitrosocarbofuran) on mice were evaluated by single cell gel electrophoresis (SCGE) assay and micronucleus test. KM mice were exposed to test compounds with different doses of 0.1, 0.2 and 0.4mg/kg through in-traperitoneal injection two times with an internal of 24 h, and then killed by cervical dislocation 6 h after the second injection. In SCGE assay, isolated mice peripheral blood lymphocytes were employed to determine DNA damaging degree after a 1 h treatment by test compounds and a following electrophoresis. Carbofuran and carbofuranphenol showed negative results in both test and had no obvious toxicity. 3-hydrocarbofuran and nitrosocarbofuran were positive. 3-ketocarbofuran could not induce micronucleus formation but caused significant DNA migration in SCGE test. These tests revealed that 3-ketocarbofuran, 3-hydrocarbofuran and nitrosocarbofuran are pote     

SCGE法检测敌敌畏对大鳞副泥鳅DNA损伤的研究

目的 采用SCGE技术检测敌敌畏对大鳞副泥鳅DNA的损伤效应.方法 设置敌敌畏0.64 μg/L、1.28μg./L、1.92μg/L、2.56μg/L、3.20μg/L 5个浓度组和一个空白对照组(15尾大鳞副泥鳅/组),通过单细胞凝胶电泳技术(scGE)研究各浓度敌敌畏处理组在分别处理l d、2 d、3 d后对大鳞...     

彗星系统定量检测柠檬醛损伤黄曲霉DNA的研究

理化因素致细胞DNA损伤,彗星测试提供了一个直观的方法。采用新型SCGE图象分析系统(IMI10),将细胞显微分光光度分析与显微成像及图象分析结合,直接检测柠檬醛致黄曲霉核DNA损伤,与国际流行的SCGE图象分析系统相比,具有分析速度快、便于分析,同时具有中英文可切换界面和多格式输出打印特点。该系统使彗星试验的检测时间缩短2/3,并提高了准确性,可实现对活细胞多种结构参数、细胞内分子与膜的变化状况同时进行长时间连续的动态瞬间监测,具有广阔应用前景。     

人参皂甙对缺氧大鼠海马DG区神经细胞DNA损伤保护作用的研究

目的:用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)研究急慢性缺氧大鼠海马DG区神经细胞细胞DNA损伤和人参皂甙对缺氧大鼠海马细胞DNA的保护作用.方法:健康成年SD大鼠随机分为急、慢性缺氧正常对照组、急性缺氧组和慢性缺氧组(分别在模拟海拔5000米高原环境连续缺氧暴露0d、3d和30d)、急性缺氧人参皂甙干预组、慢性缺氧人参皂甙干预组.应用SCGE检测海马DG区神经细胞DNA损伤.结果:随着缺氧时间的增加,海马DG区神经细胞DNA的损伤程度加重,尾长、尾部DNA百分含量和尾距显著增加(P＜0.05).人参皂甙能使缺氧损伤的海马DG区神经细胞的尾长、尾部DNA百分含量和尾距均较缺氧组减少(P＜0.05).结论:人参皂甙能有效地减轻缺氧引起的海马组织细胞DNA的断裂损伤.     

微囊藻毒素对尼罗罗非鱼原代肝细胞致毒机理的探讨

采用离体细胞培养诱导方法,研究微囊藻毒素-LR(microcystin-LR,MC-LR)对尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)原代肝细胞的毒性效应.尼罗罗非鱼原代肝细胞经10、50、150、500 μg/L MC-LR体外诱导24h后,单细胞微量凝胶电泳(SCGE)检测显示,与对照组相比处理组出现明显的彗星拖尾现象,说明MC-LR可引起尼罗罗非鱼肝细胞DNA的损伤,并随着剂量的增加,DNA的损伤程度增大.PI/Annexin V双染色流式细胞仪(FCM)检测表明MC-LR能明显引起肝细胞凋亡,与SCGE结果一致,且DNA损伤程度越大,细胞早期凋亡率越高,呈现明显的时间、剂量依赖性.本研究为进一步从分子、细胞水平阐明MC-LR的毒性以及致毒机理提供重要的理论依据.     

抗菌肽CM4组分对K562癌细胞染色质DNA断裂作用的SCGE研究

单细胞凝胶电泳法（singe cell gel electrophoresis, SCGE)是一种快速,敏感的检测单个哺乳动物细胞DNA断裂的技术,也叫彗星实验（comet assay).此实验首次通过SCGE法观察抗菌肽CM4组分对人髓样白血病K562细胞和正常人白细胞核染色质DNA的影响,从而进一步研究抗菌肽抗癌作用的机制.荧光显微镜观察显示经抗菌肽CM4组分处理过的K562癌细胞核染色质DNA出现断裂,形成一个亮的荧光头部和彗星似的尾部,而经同样处理的正常人白细胞和未经抗菌肽处理的K562癌细胞核染色质DNA未出现断裂,核完整,呈圆形.经彗星尾长分析,前者DNA损伤率平均为73.62%,统计学处理P＜0.001,具高度显著性差异.这表明,抗菌肽CM4对K562癌细胞核染色质DNA有明显的断裂作用,而对正常人白细胞则没有断裂作用.