银杏悬浮培养细胞的生长、分化与萜内酯化合物的积累

研究了来源于银杏种子胚和幼苗茎的悬浮细胞的生长、分化和培养物中的白果内酯、银杏内酯A和B的含量变化。结果表明：在悬浮培养中,细胞聚集而成的细胞团大小、细胞中叶绿体的分化、外植体来源都影响培养物中的萜内酯的种类和含量,胚来源的悬浮细胞培养物中,银杏内酯B仅存在于直径<2mm的小细胞团悬浮培养中,且在<1 mm的细胞团中的含量最高,达0.437 mg /g(DW);而直径>3mm的细胞团悬浮培养物中只含有白果内酯和银杏内酯A。相同大小的悬浮细胞团中,胚来源的细胞中萜内酯含量高于茎来源的细胞。     

银杏愈伤组织培养及其代谢产物银杏内酯的研究

筛选出了愈伤组织生长的最佳培养基;考察了各种理化因子对培养细胞生长及银杏内酯产生的影响;应用生物法和HPLC对愈伤组织中的银杏内酯A和B进行了成功的测试。结果显示,银杏愈伤组织培养物中银杏内酯的含量可达0.01%,属国际领先水平。     

银杏植物各部位及银杏组织培养细胞中银杏内酯B和白果内酯含量的初步研究

用高压液相色谱法对五年生扦插银杏各部位及银杏组织培养细胞中银杏内酯B和白果内酯的含量进行了测定.结果表明银杏内酯B和白果内酯在银杏植物各部位的含量差异很大.银杏内酯B在银杏叶中含量最高,白果内酯在银杏侧根中含量最高.在6,7-v培养基下银杏组织培养细胞中同时测出银杏内酯B和白果内酯,提示用植物组织培养方法有可能同时产生银杏内酯B和白果内酯.     

银杏致密细胞团颗粒悬浮培养生产银杏内酯研究

以MS培养基上培养的银杏高产细胞系MH－3为材料,SH培养基为出发培养基,通过优化营养元素和激素配比,建立银杏致密细胞团悬浮培养体系,在培养过程中添加前体异戊二烯和香叶醇有助于提高银杏内酯产量。结果表明：颗粒粒径大小影响银杏内酯的产生,选用0．8SH培养基,添加浓度为3mg/L的2,4－D和2mg/L的6－BA,致密颗粒的平均粒径为3．36mm,细胞中银杏内酯的含量为557μg/g.dw.在培养过程中的10d添加100mg/L的香叶醇,细胞中银杏内酯的含量达到676μg/g.dw。     

缺氧胁迫法选育高产银杏内酯悬浮细胞系研究

以银杏优良品种的种子萌发的幼苗诱导愈伤组织,考察了不同培养基地对愈伤组织生长和银杏内酯产生的影响。采用缺氧胁迫小细胞团法从愈伤组织中共选育出7个高产悬浮细胞系,其合成银杏内酯的能力比选前的愈伤组织有了显著提高,其中细胞系MH－3培养周期18d,细胞生物量增加3．71倍,银杏内酯含量达到细胞干重的0．048％,比选育前提高了182．4％,为国内领先水平。并对MH－3在遥瓶培养时其生产银杏内酯能力的稳定性进行了研究。     

银杏细胞固定化培养及银杏内酯的产生

探讨利用银杏 (GinkgobilobaL .)细胞固定化培养方法 ,大规模生产药用成分银杏内酯类化合物的可能性。考察了植物生长调节剂对银杏固定化培养细胞生长及发酵液中银杏内酯类成分产生的影响。结果显示 ,最优培养基生长调节剂配比为 2 ,4 D 8 0mg L KT 0 0 4mg L NAA 0 4mg L。优化培养后 ,固定化细胞最高生物量出现在第 1 2d ,为 0 4gDW 瓶。发酵液中银杏内酯含量 :GKA在 2 2d时最高 (2 0 0 μg L) ,GKB在 1 8d时最高 (1 2 2 μg L) ,GKC在 1 8d时最高 (5 0 9μg L)。     

芦荟汁对银杏悬浮培养细胞的生长及次生代谢产物合成的影响

将无菌芦荟汁按不同比例添加于银杏细胞悬浮培养基中,研究其对银杏细胞的生长及次生代谢产物合成的影响,结果表明,添加０．１％的芦荟汁,银杏细胞干重达１６．０７ｇ／Ｌ,比对照提高了１３％;添加０．０５％的芦荟汁可明显促进银杏悬浮培养细胞次生代谢产物合成,总黄酮含量比对照提高了１６．７４％。     

NO对银杏悬浮细胞生长及黄酮类物质合成的影响

以硝普钠(sodium nitroprusside,SNP)为一氧化氮(NO)的供体,向银杏悬浮细胞培养液中加入不同浓度的SNP,研究外源NO对银杏悬浮细胞生长状况、过氧化氢酶(CAT)活性、苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性和黄酮类物质生物合成的影响.结果表明,低浓度SNP有利于银杏悬浮细胞生长,而高浓度SNP可以促进黄酮类物质的合成.银杏悬浮细胞在添加0.5和10 mmol/L SNP的培养基中培养16 d时,细胞干重分别为对照组的134%和73%;在添加10 mmol/L SNP的培养基中培养20 d时,细胞中黄酮类物质的含量为对照组的136%.同时,10 mmol/L SNP促进银杏悬浮细胞PAL和CAT活性显著升高.NO专一性淬灭剂c-PITO(carboxyl phenyltetramethylimidazoleoxide)抑制SNP对银杏悬浮细胞生长、CAT活性、PAL活性和黄酮类物质含量的促进作用,说明SNP是通过其分解产物NO影响细胞生长和黄酮类物质的合成.根据这些结果推测,NO可能通过触发银杏悬浮细胞的防卫反应,激活了细胞中黄酮类物质的生物合成途径.     

银杏内酯B 对星形胶质细胞氧化损伤的保护作用

目的:探讨银杏内酯B对过氧化氢(H_2O_2)诱导的星形胶质细胞损伤的保护作用及可能机制。方法:星形胶质细胞传代培养,分为阴性对照组(以正常培养液培养),氧化损伤组(100μmol·L~(-1)的H_2O_2作用12 h),银杏内酯B低剂量组(1×10~(-6) mol·L~(-1)银杏内酯B孵育24 h后,加入H_2O_2作用12 h)和银杏内酯B高剂量组(1×10~(-4) mol·L~(-1)银杏内酯B孵育24 h后,加入H_2O_2作用12 h),MTT比色法检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞活性氧(ROS)水平,分光光度计检测上清液中超氧化物歧化酶(SOD)、如谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)的含量。结果:银杏内酯B能抑制氧化损伤引起的细胞活性的下降,降低星形胶质细胞内ROS的生成,促进SOD、GSH-Px水平的升高及MDA水平的下降。结论:银杏内酯B通过提高细胞内SOD、GSH-Px含量,降低细胞内MDA含量发挥其较强的抗氧化作用,从而为其用于治疗神经系统疾病提供可靠的实验依据。     

银杏组织培养生产黄酮、内酯的研究

该文从品种、外植体类型、培养方式、外源添加物、诱导发根等方面对近几年来组织培养生产银杏内酯和黄酮类化合物取得的进展进行了系统。     

银杏内酯的研究进展

银杏内酯是从裸子类植物银杏中提取的化合物,属于二萜类内酯,主要分为银杏内酯A、B、C、J、K、L和M (ginkgolide A, B, C, J, K, L, M)及属于倍半萜内酯的白果内酯(bilobalide, BB),具有拮抗血小板活化因子受体的功能。其中银杏内酯B (ginkgolide B, GB)是生理活性最强的。目前银杏内酯主要从银杏叶和根的提取,少量可由生物合成提供。因其丰富的药理作用和微弱的副作用而被广泛用于抗氧化、保护心脑血管系统、保护神经系统等方面。近年来在治疗癌症方面的研究也取得了重大进展,发现银杏内酯可以抑制多种肿瘤,有望将其大量运用于癌症治疗。     

银杏中营养成分和功能因子的研究进展

银杏含有淀粉、蛋白质、脂类、氨基酸、微量元素等营养成分和银杏多糖、银杏黄酮类化合物、银杏内酯、银杏酸等多种保健功能因子.本文主要介绍了各种营养成分和功能因子的营养和保健功能,并对银杏资源的开发利用进行了分析.     

银杏再生根和不定根的形成及其中银杏内酯的产生

附加０．５ｍｇ／Ｌ２,４－Ｄ的ＤＣＲ２基较适合愈伤组织再生根的形成,子叶上能直接诱发不定根,根培养物的生长速度远比愈伤组织慢,但共合成银杏内酯的能力却较愈伤组织强。     

产银杏内酯内生真菌的筛选及培养条件研究

通过对内生真菌的发酵提取物进行TLC和HPLC-UV分析,进行菌株筛选;对该菌株在不同培养基上的生长情况、产孢量、银杏内酯类物质产量的测定,确定最佳培养基;并用HPLC-ELSD测定了不同时间段的发酵液中银杏内酯类物质含量。结果,筛选出一株产量较高的烟曲霉原变种(Aspergillus fumigatusvar.fumigatus)FG052;对其培养条件的研究表明,PDA培养基、查氏培养基分别为其最佳传代和发酵培养基,菌丝最大生物量在发酵168 h,产银杏内酯类物质高峰在发酵144 h,此时总内酯产量可达0.13 mg/mL,pH值为4.86。本实验筛选的菌株稳定性较好,筛选的培养基价格低廉,碳氮比明确,且总内酯的产量高,可作为规模生产银杏内酯类物质的培养基。     

银杏内酯对胚基底前脑NOS、AChE阳性神经元发育的影响

目的 探讨银杏内酯对胚基底前脑NOS和AChE阳性神经元发育的影响。方法 实验分成银杏组,NGF组,BDNF组和单纯对照组。取孕17dSD大鼠胚基底前脑原基制成细胞悬液接种于96孔培养板和2块24孔培养板中,分别加入含银杏内酯,NGF,BDNF及不含上述成份的DMEM培养液,于体外培养18d后,96孔培养板行MTT比色分析测定光吸收值（OD值）,以检测培养的神经元活力,2块24孔培养板分别行NADPH-d和AChE组化染色,显微镜下计数各组每了忆中的NOS和AChE阳性神经元数,并用CMM-301图像分析系统对两种神经元的细胞面积和细胞周长进行处理。数据用方差分析和SNK检验进行统计学处理。结果 银杏组MTT比色分析的OD值和NOS,AChE阳性神经元数,细胞面积,细胞周长等指标均明显地好于单纯对照组,达到或仅稍差于NGF组或BDNF组的指标。结论 银杏内酯在促进胚基底前脑NOS和AChE阳性神经元发育方面具有类似NGF和BDNF的作用。     

银杏双黄酮和银杏内酯B与人体肠道菌群体外互作研究

【目的】银杏提取物在防治心血管系统和神经系统疾病方面发挥重要功能。鉴于肠道菌群已被认定为一个新兴的药物作用靶标,研究银杏双黄酮和银杏内酯与人体肠道菌群之间的相互作用具有非常重要的意义,这将为进一步理解银杏提取物的功能和作用机制奠定基础。【方法】本研究使用人体肠道菌群体外批量发酵、细菌总量测定、细菌16S rDNA高通量测序、气相色谱和液相色谱检测等方法,对银杏双黄酮和银杏内酯B单独或复合在体外与人体肠道菌群的相互作用进行研究。【结果】银杏双黄酮和银杏内酯B单独添加对人体肠道菌群总量、肠道菌群结构组成和短链脂肪酸产量没有显著影响。但有意思的是,复合添加银杏双黄酮和银杏内酯B后,Coriobacteriaceae科和Cupriavidus属细菌的比例显著升高,Gemella菌细菌比例显著降低。功能基因预测分析发现,编码K00076、K12143、K07716和K00220的基因在复合添加银杏双黄酮和银杏内酯B后显著富集。K00076和K00220是氧化还原酶,催化CH-OH供体基团的电子转移,可能参与银杏双黄酮和银杏内酯B的代谢和修饰。HPLC检测发现,人体肠道菌群体外对银杏双黄酮和银杏内脂B的降解修饰率分别为70%和35%左右。【结论】体外复合添加银杏双黄酮和银杏内酯B可显著改变肠道某些细菌的丰度。同时,体外研究表明肠道菌群具有代谢修饰银杏双黄酮和银杏内酯B的功能。     

UPLC-TOF-MS快速测定不同核用银杏品种银杏叶中银杏内酯和白果内酯含量

为比较鄂西南不同核用银杏品种叶片中银杏内酯和白果内酯含量,采用超高压液相色谱-飞行时间质谱(UPLC-TOF-MS)联用方法测定微量银杏内酯和白果内酯含量,分析柱为ZORBAX C18(2.1×50 mm,1.8μm)色谱柱,流动相为乙腈-0.1%甲酸水溶液,采用梯度洗脱,飞行时间质谱作为检测器,选择离子采集方式。方法测定银杏内酯和白果内酯的线性范围为0.2~4μg/m L,相关系数为0.9996以上,相对标准偏差小于1.65%。测定结果表明,在四个核用银杏品种中,恩银23号具有较高的银杏内酯和白果内酯含量,同时白果内酯和银杏内酯A、B及C总含量比例较佳,可以作为叶用银杏发展的优选品种。     

银杏落叶化学成分研究

采用硅胶与Sephadex LH-20柱色谱等手段从银杏落叶中分离得到22个化合物,通过理化性质和波谱数据分别鉴定为白果醇(1)、二十八烷酸(2)、棕榈酸(3)、三十七烷(4)、二十四烷(5)、4,10-二十九烷二醇(6)、β-谷甾醇(7)、胡萝卜苷(8)、银杏内酯A(9)、银杏内酯B(10)、银杏内酯C(11)、白果内酯(12)、对羟基苯甲酸(13)、莽草酸(14)、芫花素(15)、芹菜素(16)、银杏素(17)、异银杏素(18)、金松双黄酮(19)、白果黄素(20)、芦丁(21)和甘露醇(22),其中化合物2、4～6和22为首次从该种植物中分离得到,这些研究为银杏落叶及银杏资源的综合利用奠定了基础。     

不同银杏无性系叶药用成分差异及聚类分析

运用HPLC技术分析了54个银杏(Ginkgo biloba)无性系叶总黄酮和萜内酯及其组分含量的差异,并进行了聚类。结果表明,银杏无性系间叶中总黄酮、萜内酯及其组分含量存在遗传变异,且萜内酯及其组分含量的变异系数明显高于总黄酮及其组分。总黄酮含量较高的无性系有18、42、32和50号,其槲皮素、异鼠李素、山奈酚含量均较高。萜内酯含量较高的无性系为13、42、33、51和65号,其银杏内酯A(GA)、银杏内酯B(GB)、银杏内酯C(GC)及白果内酯(BB)含量均较高。通过对总黄酮-萜内酯进行联合复选,显示叶中总黄酮和萜内酯含量均较高的无性系为13、65、33、51、18、32和42号。这些无性系可通过嫁接、扦插直接在银杏采叶园进行推广种植,或作为叶用银杏新品种的育种材料。     

银杏叶中银杏内酯B及白果内酯的分离鉴定

前文中作者已报道从我国特有植物银杏(Ginkgo biloba L.)的叶子中分到银杏内酯A及C(ginkgolide A,C),本文报道从银杏叶中分到的另外二个结晶,经理化性质、薄层层析、红外光谱及质谱分析,鉴定结晶Ⅲ为银杏内酯B(ginkgolide B),结晶Ⅳ为白果内酯(bilobalide),后者为国内首次分离。