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相似文献
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1.
巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)AS1.127的淀粉酶基因的全碱基序列已被测定。结构基因由1982bp的单一开读框架组成。由DNA序列推测出的前体酶蛋白由659个氨基酸组成,N-端33个氨基酸为信号肽。成熟酶分子由626个氨基酸组成,分子量为68.676kD。该淀粉酶属糖化型α-淀粉酶。并与枯草杆菌(B.subtilis)168产生的糖化型α-淀粉酶之间有83.3%的同源性。分析发现两种菌产生的酶分子的N-端3/4的同源性为90.4%,而C-端1/4的同源性只有70%。序列排比结果说明在淀粉酶基因的趋异进化过程中,基因突变和遗传重组都曾起过作用。  相似文献   

2.
三角酵母D—氨基酸氧化酶基因的克隆,测序及表达   总被引:1,自引:0,他引:1  
利用跨越内含子的PCR技术,从三角酵母(Trigonopsisvariabilis)变种FA110中扩增得到D氨基酸氧化酶基因(daao),并通过TA克隆的方法将其克隆至pGEMT载体。序列测定结果表明,所得daao基因的5′端内含子已被删除,基因总长度为1071bp,它与Trigonopsisvariabilis的D氨基酸氧化酶同源性达983%,与Fusariumsolani和Rhodotorulagracilis的同源性分别是389%和308%。为提高表达水平,又将此基因转移至高表达载体pET28b上,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达。经IPTG诱导,目的蛋白的产生量可占菌体总蛋白量的46%,分子量约为38kD。D氨基酸氧化酶的活力可达802u/L。  相似文献   

3.
根据猪瘟病毒C株的序列,以计算机辅助设计,化学合成1对引物(PF5648/PR6604),应用RTPCR技术从感染猪血中成功地扩增了我国猪瘟病毒强毒石门株NS23基因片段,大小为957bp,位于NS3基因的中部NTPase和Helicase活性区。克隆后测序,结果表明该段基因产物具有解旋酶超家族全部七个特征性保守序列,包括共同的NTP结合基序A位点(GXGKT/S)和B位点(3hy,2x)D。序列同源性比较表明,石门株与日本的ALD和GPE-株同源性最高,与其它3株猪瘟病毒(C株、Brescia株和Alfort株)的同源性也很高,并与2株牛病毒性腹泻病毒(BVDV)(NADL株和SD1株)也有较高的同源性,尤其是由核苷酸序列推导的氨基酸序列,同源性均大于90%,是瘟病毒属基因组中最保守的区段,这与该基因产物在病毒复制及聚蛋白前体加工过程中所具有的重要功能是一致的  相似文献   

4.
参考已发表的猪瘟病毒序列,设计并合成了一对引物,应用RTPCR 技术,扩增了猪瘟兔化弱毒(Hog cholera virus lapinized Chinese strain , HCLV) 和石门强毒株的E0 糖蛋白基因,并将其克隆到pGEMT 载体中,测定了其核苷酸序列,并推导了其氨基酸序列。结果表明我国这两株强弱不同毒株E0 糖蛋白核苷酸序列同源性和推导的氨基酸序列同源性分别为95-0 % 和94-3 % ,有13 个氨基酸的差异,HCLV 比石门株多了一个潜在的N糖基化位点。将我国这两株病毒与国外已报导的HCV 毒株E0 基因序列进行了比较,发现石门株与日本的两株毒株ALD 和GPE- 同源性较高,核苷酸序列同源性分别为97-4 % 和96-5 % ,氨基酸同源性分别为97-4 % 和96-0 % ,而与欧洲Brescia 株和Alfort 株同源性较低,核苷酸同源性分别为92-2 % 和86-5 % ,氨基酸同源性为95-2 % 和92-5 % , HCLV 与ALD、GPE- 、Brescia、Alfort 株核苷酸同源性分别为95-6 % 、94-9 % 、91-3 % 、85-5 % …  相似文献   

5.
从水稻矮缩病毒(Ricedwarfvirus,RDV)中国福建分离物中克隆分离了最外层外壳蛋白基因(S2)全长cDNA,并对其进行了序列分析,结果表明RDVS2cDNA全长3512bp,仅含一个3348bp的阅读框架,编码一个含有1116个氨基酸的蛋白(P2)。与基因库中已知基因序列比较,发现它与日本RDVH株系相应片段的核苷酸和氨基酸同源率分别为946%和954%,与轮状病毒VP2氨基酸序列有一定的同源性。S2核苷酸序列二级结构预测结果表明,5’端50个核苷酸的二级结构为一个发夹结构和一个茎环结构。P2有4个富含亮氨酸的区域,位于N端亲水区域的10个氨基酸(AA69~78)残基形成一个α螺旋,这些特点均与轮状病毒VP2的结构特征相似。SDSPAGE和Western印迹分析表明在大肠杆菌中分段高效表达了S2编码蛋白的N端和C端。  相似文献   

6.
新城疫病毒F48E8株融合蛋白基因序列分析   总被引:15,自引:0,他引:15  
吴艳涛  刘秀梵 《病毒学报》1999,15(2):143-146
本研究报道了新城疫病毒(NDV)中国标准强毒株F48E8融合蛋白(F)基因的序列。该基因核苷酸序列长度为1700bp,编码由553个氨基酸组成的F0多肽。F0酶切激活部位序列为RRQRR↓F,具有NDV强毒的特征。F0中有3个主要由疏水性氨基酸组成的区域和6个可糖基化位点。经比较,NDVF48E8株和Miyadera株、TexasGB株的氨基酸同源性分别为93.64%和92.41%。  相似文献   

7.
水稻脂质转移蛋白基因的分离和分析   总被引:3,自引:0,他引:3  
用水稻脂质转移蛋白(lipidtransferprotein,LTP)的cDNA(pFDRSC110)为探针,从水稻(OryzasativaL.sp.indica)“广陆矮4号”基因文库中筛选出LTP基因,完成了1.8kb长片段的序列测定。该基因编码一个121个氨基酸组成的肽,编码区中间有一个90bp的内含子,基因的调控区除有2个TATAbox和polyA加工信号外,还存在多个回文序列和逆向重复序列。该基因编码的蛋白质N端是由28个氨基酸组成的信号肽,同源性比较表明它具有典型的植物LTP特征。  相似文献   

8.
枯草芽孢杆菌B034拮抗蛋白的分离纯化及特性分析   总被引:29,自引:2,他引:29  
枯草芽孢杆菌(Bacilussubtilis)B034分离自水稻叶面,对水稻白叶枯病菌具有较强的拮抗能力。除去菌体培养液以70%饱和度硫酸铵沉淀所得的拮抗物粗提液对热稳定,对胰蛋白酶不敏感,对蛋白酶K、链霉蛋白酶E部分敏感,对氯仿部分敏感,其作用的活性pH范围低至4,高至12以上,比较耐碱性。粗提液经PhenylSepharoseCL4B柱层析、DEAESephacel柱层析和HPLC的Superdex75HR10/30柱层析,得到二个拮抗活性峰:P1和P2。P2经SDSPAGE和PAGEIEF电泳显示为单一蛋白带,分子量503kD,等电点625。自动Edman降解法从P2的N端测出残基序列为IleSerAsnProXIleAspVal  相似文献   

9.
柴胡皂甙s的结构鉴定   总被引:4,自引:0,他引:4  
从南柴胡(BupleurumscorzonerifoliumWild.)根中分得5个三萜皂甙。根据理化性质和波谱数据,鉴定其中新皂甙为3β,16α,23,28四羟基齐墩果烷11,13(18)二烯3OβD吡喃葡萄糖基(1→6)[αL吡喃鼠李糖基(1→4)]βD吡喃葡萄糖甙,命名为柴胡皂甙s(saikosaponins)。另4个皂甙分别为柴胡皂甙a、c、b1、b2。  相似文献   

10.
盐生杜氏藻甘油-3-磷酸脱氢酶的分离纯化及其特性的研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
利用PEG分级,DEAE离子交换层析,BlueSepharose拟亲和层析,MonoQ离子交换层析等手段,分离纯化盐生杜氏藻(Dunalielasalina(Dunal)Teod.)甘油三磷酸(G3P)脱氢酶(EC1.1.1.8),得到比活为12.6U/mg的电泳纯的酶,并对此酶的生化特性进行了研究。4%~20%非变性聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳测得全酶分子量约为270kD,SDSPAGE表明该酶只有一种分子量约为65kD的亚基,据此推测该酶应为同四聚体。酶催化磷酸二羟丙酮(DHAP)还原的最适pH值为7.5,催化G3P脱氢的最适pH值为10。该酶对4个底物还原型辅酶Ⅰ(NADH),二磷酸吡啶核苷酸(DHAP),辅酶Ⅰ(NAD),G3P的表观Km值分别为63μmol/L,272μmol/L,1.53mmol/L,6.52mmol/L。该酶在保存过程中易失活。NADH能降低酶失活的速度,而NAD则不然。低浓度NaCl对酶略有保护作用,但高浓度NaCl加快酶的失活,且浓度越高效应越明显。  相似文献   

11.
从甘蓝型油菜(Brassica napus cv.H165)叶绿体基因组克隆得到了编码核糖体蛋白的基因rps7。经序列分析得知,该基因编码区包含个核苷酸,编码一个分子量为20 109 D、由155个氨基酸组成的蛋质。该基因的核苷酸和编码的氨基酸序列与烟草对应基因的同源性皆高达97%;而与水稻对应基因的同源性为90%和84%。该基因不含内含子,没有典型的SD序列,但在5’端-25~-22位发现一个与  相似文献   

12.
鉴定了E.coliHB101和JM110的部分遗传标记,作为受体菌分别用于BstNI同功酶限制-修饰系统中限制性内切酶(Restrictionendonuclease,简称R)基因和甲基化酶(Methylase,简称M)基因表达的检测。用外切酶II单向删切含RM基因的DNA片段,获得23个缺失突变亚克隆。通过检测各亚克隆表达的R酶和M酶活性,将R和M基因分别定位在距克隆位点PstI的02→14kb和15→3.3kb范围内。分析表明:该系统属于I类限制修饰系统,两个基因受控于不同的启动子;该系统与E.Coli染色体编码的胞嘧啶DNA甲基转移酶(Dcm)的识别序列相同,后者的甲基化作用也能阻止R酶的切割。R+M-的重组质粒对Dcm+和Dcm-的宿主都是致死性的,这说明在进化过程中,与R基因紧密连锁的M基因对系统的存在至关重要  相似文献   

13.
江国托  刘思国 《病毒学报》1999,15(3):249-251
反转录聚合酶链反应扩增鸡传染性支气管炎病毒中国流行株的主要免疫原纤突蛋白S1基因,将其插入载体pUC18的BamHⅠ/HindⅢ位点,在大肠杆菌中实现目的的基因的分子克隆。经克隆化S1基因的限制性酶切片多段多态性分析和Southern杂交之后,双脱氧链终止法测定其5‘端高变区核苷酸序列,并以此与GeneBank中的参考毒株Massachussetts41相应序列作比较,分析其同源性。  相似文献   

14.
对1992~1994年间16个云南HIV1株膜蛋白基因V3区进行了DNA序列测定,经计算机DNASIS及PROSIS软件进行同源性分析,得出其相应的氨基酸共有序列YNV3和两组共有序列YNV3A和YNV3B,计算了YNV3中每个氨基酸的保守性。分别将YNV3A和YNV3B与世界各地的HIV1代表株的相应序列进行了同源性比较。结果表明,HIV1云南株膜蛋白V3区氨基酸共有序列YNV3中每个氨基酸的平均变异度为7.66%。两组共有序列YNV3A和YNV3B,分别与HIV1美欧株及泰国流行株B亚群相应序列有较高同源性。这一结果提示,在进化上云南瑞丽HIV1流行毒株间有非常密切的关系,在这一时期该地区的流行毒株以HIV1美欧株、泰国株B亚群及其衍生株为主。  相似文献   

15.
汉坦病毒陈株S基因编码区的克隆,序列分析及表达   总被引:1,自引:0,他引:1  
从汉坦病毒陈株感染的VeroE6细胞裂解液中提取病毒RNA,经逆转录PCR获得病毒S基因编码区约1.3kbcDNA片段,克隆该片段后进行核苷酸序列测定,并与汉坦病毒76118株进行同源性比较,结果二者核苷酸序列同源性为86%,推导的氨基酸序列同源性为97%。将该基因片段插入原核表达载体pGEX4T1,在大肠杆菌中获得高效表达。表达产物为GSTNP融合蛋白。SDSPAGE检测表达蛋白分子约72kD左右。Westernbloting和ELISA试验结果表明,表达产物可与多株抗汉坦病毒核蛋白的McAb发生反应,其抗原表位及McAb反应谱与76118株相比存在某些差异。  相似文献   

16.
在 B. Braun E S10 型15 L 和 N B S Bio Flo 3000 型5 L 发酵罐中,利用补料分批培养技术高密度表达培养含重组质粒p S B H L11 的大肠杆菌 Y K537 ,生产重组人白细胞介素3( I L3) ,发现在发酵过程中,限制性流加甘油,控制溶解氧在30 % ~40 % 左右、30 ℃生长11h ,42 ℃诱导培养4h ,能将发酵液中最终菌体密度从 O D16600 提高到 O D53600( 相当于每升发酵液含106 克湿菌体) ,并且保持了白细胞介素3 的表达量,占菌体总蛋白的30 % 左右,含量超过33 % g/ L,使 I L3 包涵体产量从湿重22g/ L 提高到85 g/ L,纯化步骤比较简单,超声破菌后经两次洗涤纯度就达到70 % 以上。  相似文献   

17.
大豆Kunitz型胰蛋白酶抑制剂属于丝氨酸蛋白酶抑制剂,具有抗虫特性。从未成熟的大豆(GlycinemaxL.)子叶中提取总RNA,然后反转录成单链cDNA,以此为模板,用PCR方法扩增出大豆Kunitz型胰蛋白酶抑制剂基因,并克隆到pBluescriptKS(+)的SmaⅠ位点上。序列分析表明:克隆片段大小为663bp,包含了基因完整的编码序列。编码多肽由217个氨基酸组成,其中包括N端25个氨基酸组成的信号肽序列,181个氨基酸组成的成熟蛋白序列和C端11个氨基酸组成的液泡定位信号序列。构建了此基因的一系列植物表达载体,用于烟草(NicotianatabacumL.)、水稻(OryzasativaL.)、棉花(GosypiumhirsutumL.)等作物的转化。利用棉铃虫(HeliothisarmigeraHubner)对经PCRSouthern杂交验证获得的转基因烟草进行了抗虫测试,结果表明,转基因烟草和对照烟草相比,具有明显的抗虫能力。  相似文献   

18.
本文通过逆转录(RT)-聚合酶链式反应(PCR),从两份分别来自湖南省娄底地区丙型肝炎病人和河北省秦皇岛市职业献血员丙型肝炎病毒(HCV)RNA打点杂交阳性的血清中,扩增并克隆到1段563bp的HCV基因组C区抗原基因C269/831,并通过PCR得到了3个表达片段C831、C801和C587。测定C269/831基因的全序列后发现,中国人HCV湖南分离株与HCV-Ⅰ型株HCV-US和Ⅱ型株HCV-BK在该基因区段的核苷酸/氨基酸序列的同源性,分别为90.3%/94.6%和95.2%/94.6%。利用原核高效表达载体pBV220在大肠杆菌中有效地表达了非融合的C区抗原基因重组蛋白CL、CM和CS。通过免疫筛选法及Westem印迹法对约占菌体可溶性蛋白11%的表达产物进行了鉴定。采用TritonX-100和盐析处理表达产物,再进行离子交换层析纯化,得到可用于检测HCV血清抗体的核壳蛋白(C)抗原。通过不同分子量抗原的表达,发现由C区N端89个氨基酸组成的多肽CS其抗原性与由158或168个氨基酸组成的多肽CM或CL相同,但抗原的稳定性和表达量显著优于后两种抗原。本研究为研制HCV抗体诊断试剂盒奠定了重要基础。  相似文献   

19.
以甜菜坏死黄脉病毒(BNYVV)内蒙分离物的总RNA为模板,通过反转录-PCR扩增获得BNYVVRNA3全长cDNA。将其克隆到pGEM-7Zf(+)上,得到重组质粒pGBY56。序列分析结果表明,内蒙分离物RNA3基因组全长为1775nt,其中包含3个开放阅读框架,分别编码25kD蛋白、4.6kD蛋白和一种由59个氨基酸组成的N蛋白。与法国F2分离物、德国G1分离物和日本S分离物相比,其核苷酸序列的同源性分别为96.4%、96.8%和97.3%。将25kD蛋白编码基因克隆到pJW2上,构建了该基因的原核表达载体。SDS-PAGE和Westernbloting分析结果表明,25kD蛋白基因在E.coliBL21(DE3)中经温度(42℃)诱导后,可特异地表达25kD蛋白  相似文献   

20.
分别利用5’RACE和3’RACE确定了CMVSDRNA2的5’和3’末端序列,在此基础上,利用RTPCR得到了RNA2的5’端一半的cDNA克隆pC25和3’端一半的cDNA克隆pC23,并通过拼接构建了RNA2全长cDNA克隆pC2F。通过对pC25和pC23进行序列测定,得到了RNA2的全序列。序列分析结果表明CMVSDRNA2由3048nt组成,其中存在2个部分重叠的阅读框ORF1(79~2652nt)和ORF2(2414~2746nt),分别编码858aa的2a蛋白和111aa的2b蛋白,并在2a蛋白的序列中发现了动植物病毒复制酶所特有的两个保守序列。该株系RNA2核苷酸序列与分属CMVI亚组的Fny株系和II亚组的Q株系RNA2的核苷酸序列同源性分别为917%和756%;2a蛋白的氨基酸序列同源性分别为938%和677%,2b蛋白的氨基酸序列同源性分别为830%和513%。同源性比较的结果表明SD株系属于CMVI亚组。  相似文献   

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