脂质体化r-HBsAg的研究

用逆相蒸发技术制备带不同表面电荷的脂质体及脂质体化的重组乙肝基因工程疫苗（ｒ－ＨＢｓＡｇ）。制备的脂质体平均粒径为１５０－４５０ｎｍ,不同电荷脂质对粒径无明显影响,加入ｒ－ＨＢｓＡｇ使粒径略有增大。ｒ－ＨＢｓＡｇ包裹率为４４－５７％,不同电荷脂质体间无明显差异。荧光染料Ｃａｌｃｅｉｎ包裹率为３－７％,明显低于ｒ－ＨＢｓＡｇ的包裹率。用准弹性光散射（ｑｕａｓｉ－ｅｌａｓｔｉｃｌｉｇｈｔｓｃａｔｔｅｒｉｎｇ,ＱＥＬＳ）技术测定脂质体的泳动速率,加入ｒ－ＨＢｓＡｇ及新型免疫佐剂ＡＳＤ系列后,对脂质体的泳动速率有明显影响。     

30L生物反应器连续灌注培养重组CHO—C28细胞表达HBsAg的研究

应用３０ Ｌ生物反应器和微载体悬浮 培养技术,通过电脑全自动控制,连续灌注培养分泌ＨＢｓＡｇ 的重组ＣＨＯ－Ｃ２８细胞。试验了培养方式、连续灌流速度,反应器转速和细胞对葡萄糖消耗等工艺条件。观察培养６０ 天,细胞的生长形态、ＨＢｓＡｇ 分泌动态和染色体数。研究结果表明,连续培养６０ 天,细胞密度可达７．０×１０６ｃｅｌｌｓ／ｍ ｌ,平均维持在（５．０～６．０）×１０６ｃｅｌｌｓ／ｍ ｌ,收液的ＲＰＨＡ 滴度可达１∶５１２,ＨＢｓＡｇ 每天平均产量为３０ ｍ ｇ。     

金缕梅科一新组合

金缕梅科一新组合郝日明魏宏图（江苏省·中国科学院植物研究所南京２１００１４）ＡＮＥＷＣＯＭＢＩＮＡＴＩＯＮＯＦＨＡＭＡＭＥＬＩＤＡＣＥＡＥＨＡＯＲｉＭｉｎｇＷＥＩＨｏｎｇＴｕ（ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＢｏｔａｎｙ,ＪｉａｎｇｓｕＰｒｏｖｉｎｃｅａｎ...     

小麦根质膜H^＋—ATPase的部分纯化

以小麦（ＴｒｉｔｉｃｕｍａｅｓｔｉｖｕｍＬ．）根为材料,采用不连续蔗糖密度梯度离心法制备高纯度质膜微囊。质膜经ＴｒｉｔｏｎＸ１００和ＫＣｌ处理后,再用Ｚｗｉｔｅｒｇｅｎｔ３１４增溶Ｈ＋ＡＴＰａｓｅ,最后用硫酸铵沉淀得到部分纯化的质膜Ｈ＋ＡＴＰａｓｅ。ＳＤＳＰＡＧＥ结果表明,经过上述步骤纯化,分子量为９４ｋＤ的膜蛋白组分得到富集;与质膜相比,其含量提高１５．７倍。部分纯化的质膜Ｈ＋ＡＴＰａｓｅ可以水解ＡＴＰ,受Ｋ＋刺激,并被Ｎ,Ｎ′ｄｉｃｙｃｌｏｈｅｘｙｌｃａｒｂｏｄｉｍｉｄｅ（ＤＣＣＤ）抑制;ＡＴＰ水解活力被Ｎａ３ＶＯ４抑制９５％,但不被ＮａＮ３、ＮａＮＯ３和Ｎａ２ＭｏＯ４抑制。     

两种转瓶培养CHO-C_(28)细胞HBsAg收率的比较

由于基因工程乙肝疫苗能克服血源乙肝疫苗生产中存在的原料来源困难,且原料中可能含有未知的病毒因子的问题,故基因乙肝疫苗替代血源乙肝疫苗是势在必行。目前基因乙肝疫苗有酵母菌表达和ＣＨＯ细胞表达两种,我们采用ＣＨＯ细胞表达ＨＢｓＡｇ进行基因乙肝疫苗研制,为...     

相思子根化学成分研究——相思子醌A,B,D,E,F,G

从民间药用抗肝炎药相思子（ＡｂｒｕｓｐｒｅｃａｔｏｒｉｕｓＬ．）根中分得８个异黄烷醌类化合物,即相思子醌Ａ、Ｂ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ以及已知化合物３,７二羟基６甲氧基双氢黄酮和２,８二羟基３,４,９,１０四甲氧基紫檀素。用化学转化和光谱学方法包括１Ｈ１ＨＣＯＳＹ、１Ｈ１３ＣＣＯＳＹ、ＣＤ等方法鉴定它们的结构。     

应用重定向超速区带离心法纯化HBsAg的研究

采用重定向超速区带离心法进行了从乙肝阳性血清中提纯ＨＢｓＡｇ的研究，获得了一套最佳离心条件，可清除阳性血清中的各种杂蛋白，获得不含乙肝病毒（Ｄａｎｅ颗粒）的纯ＨＢｓＡｇ。此方法具有离心时间短、不漏液、故障少及成本低等优点。本试验结果为采用重定向超速区带离心法大规模纯化ＨＢｓＡｇ、基因工程表达产物及其它生物大分子蛋白提供了实验依据     

苹果果实组织脱落酸结合位点的亚细胞定位

在苹果（ＭａｌｕｓｐｕｍｉｌａＭｉｌ）果实细胞的可溶性组分中存在ＡＢＡ特异结合位点,这些位点能与ＡＢＡ形成稳定的３ＨＡＢＡ蛋白结合复合物,而微粒体部分未表现出３ＨＡＢＡ结合活性。可溶性组分对３ＨＡＢＡ的结合效率与结合稳定性需要活体组织完整细胞的存在。ＡＢＡ共价交联物ＡＢＡＬＹＣＨ,具有与ＡＢＡ相同的抑制红苋菜（ＡｍａｒａｎｔｈｕｓｔｒｉｃｏｌｏｒＬ．）种子萌发的生物活性,能有效地竞争抑制果实组织圆片对３ＨＡＢＡ的结合。通过ＡＢＡＬＹＣＨ对苹果果实组织圆片及果实组织游离细胞的荧光染色表明,未成熟果实的细胞外周被特异性地染色。在ＢＳＡ存在的情况下,ＡＢＡＬＹＣＨ复合物被转运进细胞,形成密集的强烈荧光团。结果表明,ＡＢＡＬＹＣＨ与３ＨＡＢＡ的竞争性结合发生在细胞质膜水平。     

HBsAg携带者重叠感染HCV、HDV的血清学调查

对３６２名无症状高滴度ＨＢｓＡｇ携带者用ＲＩＡ法检测ＨＢｅＡｇ、Ａｎｔｉ－ＨＢｅ、Ａｎｔｉ－ＨＣＶ、Ａｎｔｉ－ＨＤＶ。结果表明,ＨＢｅＡｇ阳性率随ＨＢｓＡｇ滴度的增高而增加,且有显著性差异（Ｐ＜０．０５）。重叠感染以ＨＢＶ＋ＨＣＶ最高,占２７．６％;其次是ＨＢＶ＋ＨＤＶ,占９．１％;ＨＢＶ＋ＨＣＶ＋ＨＤＶ最少,占６．４％。但是,以上重叠感染率均与ＨＢｓＡｇ滴度及／或ＨＢｅＡｇ阳性率高低无关（Ｐ＞０．０５）。调查显示,无症状ＨＢｓＡｇ携带者中ＨＢＶ＋ＨＣＶ,或ＨＢＶ＋ＨＤＶ,或ＨＢＶ＋ＨＣＶ＋ＨＤＶ的重叠感染均可发生。     

社鼠核型的研究

社鼠核型的研究ＫＡＲＹＯＴＹＰＥＳＯＦＮＩＶＩＶＥＮＴＥＲＣＯＮＦＵＣＩＡＮＵＳ（ＲＯＤＥＮＴＩＡ：ＭＵＲＩＤＡＥ）关键词核型Ｃ带Ｇ带ＡｇＮＯＲｓ社鼠ＫｅｙｗｏｒｄｓＫａｒｙｏｔｙｐｅ,Ｃｂａｎｄｉｎｇ,Ｇｂａｎｄｉｎｇ,ＡｇＮＯＲＳ,Ｎ...     

基因乙肝表面抗原纯化工艺的初步改进

本文研究了新的层析介质（Ｃｅｌｌｕｆｉｎｅ）对原纯化工艺中ＳｅｐｈａｒｓｅＣＬ－４Ｂ柱层析纯化后的乙肝表面抗原（ＨＢｓＡｇ）组分及ＤＮＡ组分的进一步纯化效果。结果表明：该层析介质可以提高ＨＢｓＡｇ的纯度和收量,并对初步提纯ＤＮＡ组分中的乙肝表面抗原有一定意义。并首次发现ＤＮＡ组分中乙肝表面抗原的ＳＤＳ－ＰＡＧＢ图谱较正常基因乙肝表面抗原的图谱缺少３０ＫＤ的条带。     

乙型肝炎表面抗原S-蛋白糖化位点序列的人工变异及其哺乳动物细胞表达产物的性状研究

利用末端重叠ＰＣＲ法和定点突变技术,获得了去除Ｎ－连接多糖结构的乙肝表面抗原Ｓ突变基因,将乙肝表面抗原Ｓ－蛋白中结合Ｎ－连多糖结构序列Ａｓｎ－Ｘ－Ｔｈｒ中的第１４８苏氨酸的密码子ＡＣＴ,改变为编码甘氨酸的密码子ＧＧＴ。构建了该突变基因的表达载体并在ＣＨＯ细胞中表达,筛选到两株表达水平较高的细胞系。对其中的一株细胞系Ｃ４１的表达产物做了初步纯化和鉴定。纯化样品经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳分析,只含有２３ｋＤ一条蛋白带,而对照原基因ＣＨＯ细胞的表达产物则含有２３ｋＤ、２７ｋＤ和３０ｋＤ三条蛋白带,证实经人工修饰后其哺乳动物细胞表达产物不再含有糖基,纯化样品在电镜下可清楚地显示２２ｎｍ的球形颗粒。单克隆抗体反应谱分析发现,ＣＨＯ细胞表达的无糖ＨＢｓＡｇ与含糖ＨＢｓＡｇ的抗原表位存在明显差别。     

国产多榔菊属两新种

国产多榔菊属两新种陈艺林（中国科学院植物研究所北京１０００９３）ＴＷＯＮＥＷＳＰＥＣＩＥＳＯＦＤＯＲＯＮＩＣＵＭＬＩＮＮ．（ＣＯＭＰＯＳＩＴＡＥ）ＦＲＯＭＣＨＩＮＡＣＨＥＮＹｉＬｉｎｇ（ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＢｏｔａｎｙ,ｔｈｅＣｈｉｎｅｓｅＡｃ...     

用杆状病毒载体在家蚕细胞中表达HBeAg基因

以ＰＣＲ技术扩增含有ＰｒｅＣ信号肽序列及完整的ＨＢｅＡｇ基因的序列（即ＨＢｃＡｇ基因５′端４４７ｂｐ）,在５′端加上合适的酶切位点,克隆到家蚕核多角体病毒转移载体ｐＢｍ０３０上,与野生型ＢｍＮＰＶＤＮＡ共转染家蚕ＢｍＮ细胞,空斑纯化后得到多角体基因失活的重组病毒。ＥＬＩＳＡ法测定表明培养液上清中ＨＢｅＡｇ效价达１∶３２０００,细胞内ＨＢｅＡｇ效价为１∶２０００,培养液及细胞内的ＨＢｃＡｇ含量极低（＜１∶１６０）。研究结果表明,ＢｍＮ细胞能正确识别与切割ＨＢｅＡｇ信号肽序列,所表达的ＨＢｅＡｇ效价高,纯度好,明显优于大肠杆菌表达系统     

乙型肝炎表面抗原凝难判定血清的研究

用中国药品生物品检定所检定合格的国内外ＨＢｓＡｇＥＩＡ试剂及ＡＢＢＯＴＴ抗－ＨＢｓ、抗－ＨＢｃＥＩＡ试剂,对所收集的１３份ＨＢｓＡｇ疑难判定血清进行检测,并用ＰＣＲ方法检测血清中ＨＢＶＤＮＡ,结果显示国内外ＨＢｓＡｇ试剂对部分ＨＢＶＤＮＡ阳性样品的检出率差异较大,提示这些样品可能为Ｓ基因突变株或ＨＢｓＡｇ含量较低,因此,ＨＢｓＡｇＥＩＡ试剂的敏感度仍有待进一步提高,并应进一步研制检测Ｓ基因突变株的     

小鼠孤雌胚胎干细胞集落的建立

ＥＳＴＡＢＬＩＳＨＭＥＮＴＯＦＳＴＥＭＣＥＬＬＣＯＬＯＮＩＥＳＦＲＯＭＰＡＲＴＨＥＮＯＧＥＮＥＴＩＣＡＬＬＹＤＥＲＩＶＥＤＢＬＡＳＴＯＣＹＳＴＳＯＦＭＯＵＳＥ小鼠孤雌胚胎干细胞集落的建立ＫｅｙｗｏｒｄｓＭｏｕｓｅ,Ｐａｒｔｈｅｎｏｇｅｎｅｔｉｃｅｍ...     

多孔微球固定化CHO工程细胞生产rt-PA的研究

以 Ｃｙｔｏｐｏｒｅ 多孔微球固定产重组组织型纤溶酶原激活剂（ｒｔ Ｐ Ａ） Ｃ Ｈ Ｏ 工程细胞株４ Ｂ３ ,在２ Ｌ 搅拌式生物反应器用无血清培养基 Ｄ Ｆ５ Ｓ 连续灌流培养。４ Ｂ３ 细胞的最大活细胞密度和ｒｔ Ｐ Ａ 生产水平分别达到８８３ ×１０６／ ｍ Ｌ 和１２４７３ Ｉ Ｕ／ ｍ Ｌ。含ｒｔ Ｐ Ａ 的４ Ｂ３ 细胞培养上清经 Ｍ Ｐ Ｇ 吸附层析和 Ｌｙｓｉｎｅｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４ Ｂ 亲和层析两步纯化,ｒｔ Ｐ Ａ 的纯度达到９８ ％ 。     

糖基化对乙型肝炎表面抗原疫苗的影响

哺乳动物（ＣＨＯ）细胞表达的三种糖基化程度不同的乙肝表面抗原（ＨＢｓＡｇ）Ａ（含ＧＰ３０,ＧＰ２７,Ｐ２３）,Ｂ（含ＧＰ２７及Ｐ２３）,Ｃ（只有Ｐ２３）,在免疫原性、放置后抗原的稳定性以及对不同单克隆抗体亲和力等方面都有明显的差异;（１）免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠后血清中抗体工（ＥＤ５０）。平均结果为Ａ＝１：８０,Ｂ＝１：１１７,Ｃ＝１：１４,表明有糖基的ＨＢｓＡｇ疫苗对小鼠的免疫力明显高于无糖基的ＨＢ     

选择适合表达 HBsAg 的哺乳动物细胞系

将含有重组ＨＢｓＡｇ的ｐＭＥＰ４表达性质粒转染ＨｅｐＧ２,ＣＨＯ,Ｃ１２７和ＣＶ１细胞,并用ＥＬＩＳＡ检测表达量,结果在ＨｅｐＧ２细胞中的表达量较高,在Ｃ１２７和ＣＶ１细胞中的表达量偏低,而在ＣＨＯ细胞中没有表达。     

蛛网膜下腔出血对大鼠脑血流量和体感诱发电位的影响

目的：探讨蛛网膜下腔出血（ＳＡＨ）后脑血流量、体感诱发电位（ＳＥＰ）潜伏期的改变及其与一氧化氮（ＮＯ）的关系。方法：对假手术对照组和ＳＡＨ模型组大鼠检测２４ｈ局部脑血流量（ｒＣＢＦ）、ＳＥＰ潜伏期和血清及脑组织ＮＯ含量动态变化。结果：非开颅刺破Ｗｉｌｌｉｓ环的方法可成功地诱发ＳＡＨ。ＳＡＨ后ｒＣＢＦ立即降低,在２４ｈ内无恢复趋势。ＳＥＰ潜伏期于ＳＡＨ后１ｈ开始至２４ｈ明显延长。血清和脑组织ＮＯ含量