干扰素产品现状及市场前景

干扰素产品现状及市场前景吴美英程永庆（北京三元基因工程有限公司）干扰素系统是一种重要的细胞功能调节系统。干扰素具有广谱的抗病毒,抗细胞分裂,免疫调节等多种生物活性。它是一种重要的抗病毒、抗肿瘤治疗药物［１］。干扰素的种类很多,有人体干扰素,动物干扰素...     

重组人干扰素α2a发酵工艺的研究

对干扰素工程菌ＰＢＶ３２０／７１１８－α２ａ型发酵工艺,由批式培养改为反馈式流加培养［１］可显著提高工程菌ＰＢＶ３２０／７１１８－α２ａ在４０Ｌ发酵罐中的菌体产量及干扰素的表达水平。     

RT-PCR检测庚型肝炎病毒的研究

ＲＴ－ＰＣＲ检测庚型肝炎病毒的研究王孝华王健梅［１］林玉兵［２］陈禹保［２］孙钦喜［３］［１］湖南师大生物系［２］北京科海医疗生物工程公司［３］山东潍坊人民医院（湖南省临床检验中心,长沙４１０００６庚型肝炎病毒是Ｓｉｍｍｏｎｓ等于１９９５年证实的一种非Ａ－Ｅ型肝炎病毒［１］。随后在我国也证实有庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）存在［２］。有资料表明,ＨＧＶ在美国供血员中的流行情况较ＨＣＶ严重,并且与供血...     

新型表达载体 pEC34 试用于人 γ 干扰素基因的高表达

构建了一个新的双顺反子表达载体ｐＥＣ３４,它的第一个顺反子是已高表达的ｅｒａ基因的部分序列,并带有原核翻译增强子。当检测ｐＥＣ３４的可用性时,获得了人γ干扰素的极高表达。目的蛋白占菌体总蛋白的８５.５％,诱导后经ＳＤＳ-ＰＡＧＥ分析,出现分子量为１５.５ｋＤａ左右的蛋白表达带,Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ结果证实为人γ干扰素。无压力传代３０次表达质粒仍然稳定,表明ｐＥＣ３４可能用作真核蛋白质高表达工程菌株的载体。     

陆地棉珠孔的结构及花粉管在其中的生长途径

在大多数被子植物中,花粉管经珠孔进入胚珠进而实现受精,但珠孔结构及花粉管在其中的生长途径是植物受精生物学研究中较薄弱的一个环节。迄今仅在向日葵中从超微结构水平上作了详细的研究［１］,因而需要扩大研究的对象。陆地棉花粉管生长所经雌蕊组织中,关于柱头、花柱［２,３］、珠心［４,５］和助细胞［６］的超微结构已有较详细的研究,但涉及珠孔这一环节,只有简单的描述［７］。本文报道我们在这方面的研究结果。材料和方法取陆地棉（ＧｏｓｓｙｐｉｕｍｈｉｒｓｕｔｕｍＬ．）授粉前和授粉后２２小时的胚珠,切除其合点端部分…     

有序差异显示:一种基因表达谱系统比较法

系统研究具有同一基因组的各种细胞群之间基因的差异表达谱十分重要。目前,研究基因差异表达的技术大致有ｍＲＮＡ差异显示［１］、ＲＤＡ［３］、ＳＳＨ［４、５］和ｃＤＮＡ阵列［６］等。近几年,还发展了一些研究基因差异表达谱系统的技术,如ＲＬＣＳ（ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎｌａｎｄ－ｍａｒｋｃＤＮＡｓｃａｎｎｉｎｇ）［８］、ＧＥＦ（ｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓ－ｓｉｏｎｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｉｎｇ）［２］和ＲＮＡ指纹法［９］等。然而,这些技术或较为复杂,或灵敏度偏低。本文拟介绍一种有效的基因表达谱系统比较法——有序差…     

表达多聚半乳糖醛酸酶反义RNA的转基因番茄分析

果实成熟是一系列基因在时空上有序表达的结果［１］,成熟阶段出现的多聚半乳糖醛酸酶（ＰＧ,Ｅ,Ｃ,３,２,１,１５）在果实软化过程中起作用［２,３］。番茄果实的软化与ＰＧｍＲＮＡ及ＰＧ活性增加呈平行关系［４］。ＰＧ的表达有发育阶段性［１,５］与组织特异性［６,７］,其调控主要是在转录水平［８,９］。本工作将ＰＧ反义基因转入番茄,对Ｔ０～Ｔ２代转基因果实的ＰＧ活性、生理后熟行为及品质进行了研究。１　材料和方法１．１　ＰＧ反义基因植物表达载体构建及Ｎｏｒｔｈｅｒｎ检测方法见前文［１０］。１．２　转化与…     

PEG和盐对棕色固氮菌细菌铁蛋白和钼铁蛋白晶体生长的影响

棕色固氮菌（ＯＰ）体内的固氮酶钼铁（ＭｏＦｅ）蛋白和细菌铁蛋白均为重要的生物功能蛋白。前者为生物固氮的关键酶［１］,后者则可为生物代谢贮存丰富而又可溶的铁原子［２］。因而都得到了广泛而深入的研究。Ｋｉｍ［３］报道了ＭｏＦｅ蛋白衍射结果。赵宝光等［２］...     

1,6-二磷酸果糖的研究进展

１,６—二磷酸果糖（ＦＤＰ）是糖酵解过程中的代谢产物,具有调节糖代谢中若干酶活性之功效,为恢复、改善细胞代谢的分子水平药物。由Ｈａｒｄｅｎ和Ｙｏｕｎｇ［１］于１９０８年首先发现并阐明了一般特性。其后,美国、德国、意大利、日本、芬兰等国的学者分别对ＦＤＰ的制备和应用作了深入而富有成效的研究。［２］［３］［４］［５］１制备方法本世纪初,各国生化学家将注意力集中在糖发酵的机制上。自Ｈａｒｄｅｎ和Ｙ...     

一种高效的功能基因分离解析法

人类基因组计划（Human Genome Project）的实施揭开了各种生物基因组解析的序幕［1~3］。随着各种生物的基因组解析的顺利进行,遗传基因的功能研究以及寻找新的功能基因变得越来越重要。本文介绍的MegacloneTM技术、MegasortTM技术［4］以及MPSS技术［5］可以高效地分离解析各种功能基因。 Abstract:The implementation of the Human Genome Project preludes the analyzing of biologic genomes［1~3］.Following the successful analysis of diverse biologic genomes,it becomes more and more important to research the functions of genes and to find new functional genes.In this article,we use the techniques of MegacloneTM,MegasortTM［4］ and MPSS［5］ to sort and sequence effectively different functional genes.     

缺氧时大鼠红细胞变形性损伤的机制研究

本实验通过测定平原和模拟高原减压缺氧３０天大鼠红细胞滤过指数（ＩＦ）、红细胞内［ｐＨ］ｉ、［Ｋ＋］ｉ／［Ｎａ＋］ｉ比值、［Ｃａ２＋］ｉ、［Ｍｇ２＋］ｉ、平均红细胞体积（ＭＣＶ）及平均红细胞血红蛋白浓度（ＭＣＨＣ）,从而探讨缺氧条件下大鼠红细胞变形性损害的机制。结果发现：１．缺氧组大鼠红细胞［Ｃａ２＋］ｉ明显升高,且与ＩＦ呈显著正相关,但［Ｍｇ２＋］ｉ无明显差异;２．缺氧组［Ｋ＋］ｉ／［Ｎａ＋］ｉ值较平原组明显降低,且与ＩＦ呈显著负相关;３．缺氧组ＭＣＨＣ与平原组无明显差异,但ＭＣＶ显著升高;４．缺氧组红细胞内［ｐＨ］ｉ较平原组明显升高。提示：缺氧时红细胞［Ｃａ２＋］ｉ升高,［Ｋ＋］ｉ／［Ｎａ＋］ｉ值降低,ＭＣＶ增大以及红细胞［ｐＨ］ｉ值的改变在其变形性损伤中起重要作用。     

巯基修饰对中华仓鼠二氢叶酸还原酶的激活

脊椎动物二氢叶酸还原酶（ＤＨＦＲ,Ｅ．Ｃ．１．５．１．３）可被多种因素激活,如中性无机盐［１］、蛋白质变性剂［１～４］、巯基修饰剂［１,４～７］等．来源于鸡肝［５］、猪肝［６］、鼠肝［７］及鼠Ｌ１２１０细胞［４］二氢叶酸还原酶的巯基修饰激活已有报道．...     

牙龈紫质单胞菌研究的进展

牙龈紫质单胞菌研究的进展华西医大口腔医院成都６１００４１刘豫蓉,肖晓蓉牙龈紫质单胞菌（Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓｇｉｎｇｉｖａｌｓ,简称Ｐｇ）原称牙龈类杆菌,１９２８年由Ｂｕｒｄｏｎ等［１］自牙周袋中分离。Ｓｌｏｔｓ［２］、Ｔａｎｎｅｒ［３］等相继发...     

毕赤酵母表达猪干扰素-γ基因及其抑制蓝耳病病毒效果

为了研究和应用猪重组干扰素-γ（rPoIFN-γ）预防和治疗病毒性疫病,将大白猪PoIFN-γ基因插入到酵母整合载体pHIL-S1、构建了重组GS115工程菌（pHIL-S1/rPoIFN-γ）。经过SDSPAGE、Western blot分析和抗滤泡性口炎病毒（VSV）活性测定,证实rPoIFN-γ分子量为18 kD,在GS115中的表达量为18%;其抗VSV活性为450～540 u/mL。用rPoIFNγ处理猪肺巨噬细胞系Marc145后,经细胞病变抑制法（CPE50）测定,rPoIFNγ可以抵抗蓝耳病病毒（PRRSV）感染。结果显示酵母表达的rPoIFN-γ是有应用价值的抗病毒生物工程制剂。     

人γ－干扰素生产工艺的研究

采用高密度发酵法发酵重组人γ干扰素产生菌ＳＷＩＮＦ／ＤＨ５α并成功地获得高表达、高产量的菌体,表达的γ干扰素蛋白占菌体总蛋白的６０％以上,２０Ｌ发酵液可收获２ｋｇ（湿重）菌体。纯化过程中采用尿素抽提、稀释、复性、浓缩后通过ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ２００柱的纯化方法,简化了纯化步骤,缩短周期,提高了蛋白回收率。纯化中未采用单抗亲和层析技术,使产品更为安全可靠。最终产品经ＳＤＳＰＡＧＥ检测纯度达１００％,核酸含量和热原均合格,Ａ２８０／Ａ２６０＞１５,比活性达１×１０７ＩＵ／ｍｇ,总回收率达４０％。这说明整个工艺适宜大规模生产的需要,具有实际应用价值。     

高必需氨基酸转基因马铃薯的研究

８０年代以来,马铃薯遗传转化系统日趋成熟,转基因工程植株已被广泛应用于基础科学研究［１］。作为食物蛋白和能量主要来源的马铃薯,提高其蛋白质含量及质量的遗传工程研究正受到人们的普遍关注［２］。Ｙａｎｇ等［２］将旨在改善氨基酸平衡的ＣＡＴ－ＨＥＡＡＥ（氯酶素乙酰转移酶－高含量人体必需氨基酸）融合基因导入马铃薯,获得了Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ、Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ、Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ的证据,但尚缺少氨基酸分析的资料。玉米醇溶蛋白（ｚｅｉｎ）［３］是一个富含甲硫氨酸的贮存蛋白,它和人工合成的ＨＥ…     

烟草多酚氧化酶的分离与固定化技术研究

多酚氧化酶属于氧化还原酶类,国际酶学委员会推荐名为儿茶酚氧化酶（ＥＣ１．１０．３．１ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｏｘｉｄａｓｅ,ＰＰＯ）．该酶与食品工业、三废处理、医药卫生关系较为密切,因而研究较多．如近年来鸭梨［１］、蘑菇［２］、香蕉果肉组织［３］、荔枝果皮［４］等等中的多酚氧化酶均有研究报道．目前研究用固定化多酚氧化酶检测废水中酚类物质含量,进行环境检测;及其从工业废水中除去酚类,达到治理三废的目的．Ｍｏｓｂａｃｎ［５］（１９７６）研制成多酚氧化酶固定化酶柱,与氧电极检测器组合联用,可检测水中２０…     

光系统Ⅱ反应中心D1/D2/Cytb559复合物中去镁叶绿素a的光照破坏

高等植物在强光照射下,光合作用受到抑制。光抑制的分子机理已成为目前光合作用研究中最活跃的研究领域之一［１］。由于叶绿体内色素和蛋白分子很多,其中包含有许多与光破坏不直接相关的组分,因此很难确定具体哪个分子受到破坏。用只含少数色素和多肽分子的光系统Ⅱ（ＰＳⅡ）反应中心Ｄ１／Ｄ２／Ｃｙｔｂ５５９复合物［２］可以解决这个问题,现已证明用光照射该复合物能引起原初电子供体Ｐ６８０的破坏［３,４］,并且是一个多步反应［５］,同时还发现有组氨酸残基的光照破坏［６,７］,当存在电子受体的情况下反应中心内部β－ｃ…     

甜菜碱合成代谢基因工程的研究进展

甜菜碱（Betaine）是生物体内氨基酸代谢的中间产物［1］,可作为甲基供体,参与“一碳单位”的活化的甲基循环［2］。许多生物,特别是依赖环境条件而代谢类型多样化的植物、细菌和水生低等生物,在干旱、盐渍、深冻等低水势的逆境中,为了维持细胞的渗透势,合成和积累有机小分子,如脯氨酸［3］、甜菜碱［4］等氨基酸类,岩藻糖［5］、甘露醇［6］等单糖、双糖、三糖及糖醇类物质。LeRudalier［1］等（1984）法国和美国科学家合作,用150种代谢中间产物作体外渗透胁迫实验,发现只有甘氨酸甜菜碱和脯氨酸甜菜碱能有效地促进细胞生长,…     

不同倍性小麦和玉米不同群体杂交诱导小麦单倍体的研究

自从Ｚｅｎｋｔｅｌｅｒ等［１］首先报道了小麦×玉米受精现象以来,许多学者对六倍体普通小麦与玉米杂交进行了广泛的研究,获得单倍体的普通小麦,并筛选到一些杂交亲和性较高的亲本材料［２］。但四倍体小麦与玉米杂交研究报道较少。ＯＤｏｎｏｕｇｈｕｅ等用四倍体小麦与玉米杂交获得单倍体胚［３］。随后,Ａｍｒａｎｉ等［４］和孙敬三等［５］利用这一方法相继获得四倍体小麦的单倍体苗。本文报道了不同倍性的小麦基因型与玉米不同群体杂交对诱导小麦单倍体的影响１　材料和方法１．１　亲本材料用作母本的二倍体小麦有一粒小麦（…