高产红曲黄色素菌株的选育

利用紫外、硫酸二乙酯、氯化锂和亚硝基胍复合诱变的方法,选育到一株高产黄色素的红曲霉突变株MYM2.经过稳定性实验证明,诱变得到的菌株稳定性较好,液态发酵试验黄色素色价达到100U/mL以上,黄色素色调达到3.5左右.此黄色素在300nm～600nm波长之间只有一个在410 nm附近的最大吸收峰,在pH 3～8之间稳定性较好.当pH小于3时,红曲黄色素不稳定,黄色素溶液变混浊,放置后有沉淀产生.     

一株产黄色素红曲霉Monascus HB-5的生物学特性及发酵条件研究

研究了一株产黄色素的红曲霉菌株Monascus HB-5的生物学特性,并对其接种量、pH、碳源、氮源等主要发酵因素进行优化。结果表明该菌产出高浓度单一黄色素,色调为棕黄色,仅在370nm具有吸收峰。产黄色素最适发酵条件为接种量10%,pH4.6～5.7,温度30～32℃,适合的碳源为玉米粉,氮源为硝酸铵,摇瓶黄色素色价达200 U/ml。并对色素的稳定性及安全性进行了初步研究,橘霉素含量低于0.1mg/l。     

TAIL-PCR法快速分离红曲霉色素突变株T-DNA插入位点侧翼序列

采用热不对称交错PCR(thermal asymmetric interlaced PCR,TAIL-PCR)法分离红曲霉色素突变株T-DNA插入位点的侧翼序列,扩增到了长度介于500bp～1300bp之间的7个DNA片段,对这些DNA片段测序,并采用生物信息学方法对测序结果进行了分析,表明其中有1个片段与烟曲霉Af293发育调控子flbA的相似性较高。TAIL-PCR法成功应用于分离红曲霉突变株T-DNA插入位点的侧翼序列,为大规模获取插入位点侧翼序列建立了可行的方法,也为进一步研究红曲霉功能基因奠定了基础。     

色素生物合成相关PigE基因的缺失对紫色红曲霉Mp-21黄色素种类和产量的影响

红曲色素（MPs）是红曲霉次生代谢过程中产生的具有多种生物活性的天然色素,广泛应用于食品、化妆品和保健品行业。[目的]本研究从紫色红曲霉Mp-21中克隆了一个红曲色素产生相关PigE基因,并对其功能进行了鉴定。[方法]利用同源重组原理对PigE基因进行敲除,从表型、显微结构、生长速率、红曲色素、桔霉素等方面分析基因缺失前后的生物学特征变化。[结果]PigE基因的缺失主要导致黄色素产量的提高和种类的增多。与野生型Mp-21菌株以产生红色素为主的色素混合物相比,△PigE丧失了产生红色素的能力,并且新产生了至少5种新的黄色素。△PigE液体发酵13 d后,红曲色素的总色价达到了3548.2 U/g,约为野生型Mp-21菌株的4.82倍;而△PigE桔霉素的产量没有显著变化,但产生的时间延迟。[结论]PigE基因的缺失可能阻断了黄色素向橙色素的转化途径,使△PigE更趋向于黄色素的形成。由于红色素的形成需要较复杂的条件,如培养基中的氨基酸和适宜的pH值等,△PigE更倾向于先合成黄色素,丧失了产生红色素的能力。本研究为高产黄色素基因工程红曲霉菌株的构建提供了一种可能的途径。     

陆地棉亚红株突变性状的连锁遗传规律分析

以具有绿叶、花瓣红心的陆地棉、海岛棉与具有亚红株、无红心的陆地棉种质为试验材料, 通过经典遗传学的二点测验分析了亚红株突变的连锁遗传规律; 结果显示, 测交群体(E083×B026)×苏9701、(B026×E083)×苏9701的平均交换值为1.35%; 测交群体(E083×海7124)×苏9701、(海7124×E083)×苏9701的平均交换值为2.94%。同时, 用亚红株、无红心、棕絮与绿叶、红心、白絮种质杂交, 进行三点测验, 结果表明: 基因Rs在Lc1、R₂之间; 基因Rs和Lc1的遗传距离为42.21 cM, Rs 和R₂的遗传距离为 1.68 cM。当两对基因同时发生双交换时, 相互干扰小, 符合系数达0.79。根据已知的基因遗传距离, 整合后绘制了遗传连锁图: Rs 基因位于基因R2、Lc1以及分子标记NAU2863、NAU3735和NAU1048、BNL2634之间; 其中Rs基因两侧的分子标记NAU3735和NAU1048与它的遗传距离分别为0.1 cM和0.2 cM。     

红曲霉变异株A6产色素发酵条件研究

本文对红曲霉变异株Ａ６进行了产红曲色素发酵条件试验,发现在以６％饴糖为碳源,以０３％ＮａＮＯ３为氮源的培养基,初始ｐＨ４０～４５,接种量为１５％时产色素浓度最高。同时,考察了整个发酵过程中ｐＨ,残糖量与色素生成浓度的关系,认为发酵周期拟控制在８０～８５ｈｒ为宜。本试验还发现在发酵过程中补加适量饴糖有利于产红曲色素     

选育抗抗生素突变株提高碱性淀粉酶生产能力

本文报道在已获得的碱性淀粉酶生产菌Ｌ－４９的基础上,通过硫酸二乙酯再诱变,经过利福和氨苄青霉素抗性筛选,获得相应的抗性菌株。初始ＰＤ１０条件下,发酵同期４８ｈ,碱性ａ－淀粉酶活力比出发株提高２０％以上。     

高产降胆固醇活性物质的红曲霉菌种选育研究

红曲霉出发菌株经紫外线 (UV)、硫酸二乙酯 (DES)、氯化锂 (LiCl)等诱变剂反复诱变处理 ,获得供试红曲霉菌株 10株。用薄层层析法初筛得到可能产MonacolinK的菌株 4株 ,再经高效液相色谱法对初筛菌株进一步进行检测 ,证实其中 3株具有较强的产MonacolinK能力 ,特别是诱变株M7的含量与出发菌株相比提高了 4 1倍     

红曲色素提取条件及结构表证

以乙醇为溶剂,从红曲中提取红曲色素。探讨了提取条件对提取率的影响,并用FTIR和UV对色素结构进行了表征。结果表明,最佳乙醇浓度为70％～80％,在此条件下提取5次,提取率可达到90％。在提取的头一小时内,浸出速率较高,提高温度有利于提高提取液浓度和降低乙醇用量。增大乙醇对红曲的用量比例,虽然有利于提高浸出率,但是会明显增加乙醇耗量。     

红曲色素的两种新结构

从中国科学院微生物研究所保藏红曲菌中,筛选得到一株高产红色素的红曲菌菌株(AS.3.4617)。经鉴定属于红色红曲菌(Monascus anka Sato).通过有机溶剂的萃取和两次硅胶柱层析,从该菌株中分离得到两种色素样品,高压液相色谱测定为纯色素样品。通过元素组成分析,核磁共振谱,快离子轰击,质谱和高分辨质谱分析确定,这两种色素与已知的六种红曲菌色素不同,为新发现的红曲菌色素,它们可能的分子式为:C_(25)H_(31)O_5N和C_(23)H_(27)O_5N。     

水溶性红曲黄色素的表征及其稳定性

以含硫化合物还原红曲色素,红斑素和红曲红素分子中的环羰基还原成羟基,得到水溶性红白曲黄色素.以 UV-Vis、IR和(?)H-~(13)CNMR对其结构进行了表征.该色素的吸光度随pH增大而略呈上升趋势,避光可明显提高其稳定性.除Mg~(2 )在pH9下使其溶液产生沉淀外,Sn~(2 )、Ca~(2 )、Fe~(3 )和AI~(3 )均不影响其稳定性.不同pH和温度下加热实验结果表明,酸性条件对其热稳定性影响较大.     

红曲菌产生的DPPH自由基捕捉物质的筛选

从浙江长兴县农村传统家酿红酒的小曲中分离出一 红曲菌菌株(Monascus sp.),对它产生的DPPH自由基捕捉物质进行了筛选。结果表明：自由基捕捉活性和得率以醋酸乙酯的中性提取物较高;培养时间以30℃,100r/min摇床5d为好;对醋酸乙酯的中性提取物进一步进行了硅胶柱层析、LH20柱层析、MPLC、HPLC分部收 集,并用HPLC检验其纯度,获得收量在2mg以上,纯度在85%以上的自由基捕捉物质15个,对其中有代表性的B13、C317进行了1HNMR和13CNMR分析,确定它们的大致结构为苯的三取代衍生物,C317很可能是3羟基,4甲氧基苯甲酸;并对B13、C317的自由基捕捉活性进行了测定,40μmol/L的B13其自由基捕捉活性约为65%,40μmol/L的C317其自由基捕捉活性小于56%,均略低于Vc和Ve。     

超声波对红曲菌的诱变筛选及发酵过程在线处理

以红曲菌为出发株 ,经超声波诱变 ,获得一株高产菌株 ,并对该菌株在液态深层发酵过程中 ,进行超声波在线处理 ,结果表明 :红曲色素和MonacolinK的产量都有明显提高 ,分别达 29.74%和 39.96%。     

紫红曲有性阶段的研讨

紫红曲因在其菌丝体及孢子生长过程中,具有合成某些药用及色素物质功能而被重视。这些物质在东方国家中早被用于医疗及食物染色方面。本文在阐明该菌闭襄壳内数目众多的子囊孢子系来自多数子囊,其子囊壁在发育早期即已消失。具8个子囊孢子的单一子囊的确时有发生,所以红曲属名拉丁文原意“单一子囊”,虽然有时极易被置凝,但基本是正确的。此菌之另一显著特性为一次性结合可产生多数产囊丝钩及发育后的闭囊壳。此现象导致孢子形成以子囊孢子数目远超过分生孢子。     

固定化红曲生物反应器发酵红曲色素的研究

对采用气升式生物反应器,以海藻酸钠为载体包理固定红曲（MonascusPurpureus）发酵生产红曲色素进行了研究。结果表明,最佳发酵条件为：发酵培养基pH值5～6;发酵温度30℃;通气量0．35vvm;固定化细胞粒子接入量20％;发酵周期为50h左右。     

水溶性红曲红色素的制备与表征

以碱解法制备水溶性红曲红色素,碱解过程可使红斑素和红曲红素分子中的内酯键找开,生成闳酸盐,提高其亲水性。当反应体系ＮａＯＨ与红曲色素用量比例为１：１３时,碱解过程可在１５ｍｉｎ内完成。在ＰＨ５～６范围同,生成的水溶性红色素扣及光值随ＰＨ增大面临略有提高。加热和光照都将影响其稳定性,绝氧则对提高其稳定性无明显影响。在中性条件下,Ｃａ＾２＋、Ｍｇ＾２＋导致色素溶液沉淀,Ｓｎ＾２＋、Ａｌ＾２＋、Ｆ３＾３     

红曲AS 3．3491葡萄糖淀粉酶生物合成的调节

红曲 Monascus AS 3.978的变异株 AS 3.3491曾是葡萄糖淀粉酶的工业生产菌株。本文报告的实验结果表明该菌株的葡萄糖淀粉酶是构成酶,它的形成受降解物阻遏的调控。AS 3.3491葡萄糖淀粉酶形成的时间过程属典型的产物形成与生长呈负相关的类型,即菌丝体生长停止后酶才开始大量形成。从培养基中除去过量易利用碳源可使葡萄糖淀粉酶形成消阻遏。各种可利用碳源以低浓度分别加到洗涤的菌丝体悬浮液中都能促进葡萄糖淀粉酶的形成,其中蜜二糖和半乳糖的促进作用最甚。在限制生长的条件下,即向洗涤菌丝悬浮液连续缓慢供给低浓度葡萄糖,则在整个培养过程中,葡萄糖淀粉酶的活力稳步上升,不需要任何诱导物,并且比酶形成值达到蜜二糖培养基的水平。因此,高浓度葡萄糖阻遏葡萄糖淀粉酶形成,但低浓度葡萄糖却促进酶的形成。     

烟色红曲霉耐热解脂酶的形成及特性

烟色红曲霉(Monacus fulginosus)M-101菌株经麦麸固态培养生成耐热脂肪酶和酯酶。产酶的适宜条件为:培养温度30℃,初始pH 3.0—3.5,麸曲初始含水量75％。培养4—5天后,脂肪酶活力可达207u/g,酯酶活力达14.6u/g。粗酶试验表明,脂肪酶和酯酶的最适反应温度为50℃,脂肪酶最适反应pH为6.0。酯酶最适反应pH为6.8。酯酶耐热性略高于脂肪酶,在55℃处理1小时和45℃处理24小时,两种酶活力基本不变。