酶解法制备草鱼抗氧化多肽工艺的建立

目的:筛选优化合适的可用于水解草鱼蛋白制备活性多肽的蛋白酶制剂及其工艺.方法:选取不同特性来源的商品化蛋白酶制剂与实验室分离的枯草蛋白酶BPN,对比分析它们在水解草鱼蛋白过程中的水解度变化,及其酶解产物的抗氧化活性.结果:大多数蛋白酶在水解反应最初的60min内,水解度迅速增加,之后2h内曲线变化不大.其中细菌来源的水解蛋白酶水解能力最强,其2h水解产物水解度可达15.17％;木瓜蛋白酶水解产物的抗氧化活性较强,经测定其DPPH清除能力为96.24％.结论:不同特性的蛋白酶水解草鱼蛋白的水解速度和产物的活性成分具有明显差异,总的来说,木瓜蛋白酶在草鱼蛋白加工中制备活性多肽是一个比较理想的选择.     

酶解天山马鹿血分离制备抗疲劳肽的研究

本文选用木瓜蛋白酶水解天山马鹿血,制备具有抗疲劳活性的多肽,并测定其抗疲劳活性,并对具有活性的多肽进行进一步的分离制备.结果:确定最佳的酶解工艺条件为温度52℃;pH值为7.4;酶与底物浓度比(E/S)为9;底物浓度([S])为8%.选取3种水解产物(1组、2组、3组)进行小鼠负重游泳实验.结果表明:含水解产物的1组能使小鼠游泳力竭最长时间达到250 min(P＜0.001),第2组、第3组和空白对照组为114、82和77 min;在相同游泳时间40 min内,第1组肌乳酸含量比对照组减少44.9%;体内肝糖元消耗量减少38.4%,表明:第1组木瓜蛋白酶水解产物(水解度19.8%)能够明显延长小鼠游泳时间,增强运动耐力,具有显著的抗疲劳作用.     

胶原蛋白肽金属螯合物及其生产制备工艺的研究进展

胶原蛋白肽金属螯合物是胶原蛋白肽与金属离子通过配位共价结合或吸附结合方式形成的螯合物。该螯合物作为金属矿物元素补充剂,具有生物利用率高、安全性高、生物活性高等优点。综述了胶原蛋白肽金属螯合物的螯合机理、稳定性、吸收利用、功能活性和生产制备工艺并展望了其开发应用前景,以期为相关研究提供参考。     

蜂毒肽片段的合成及其与钙调蛋白的相互作用

采用固相法设计合成了４个蜂毒肽片段：Ｍｅｌ１２、Ｍｅ１１３、Ｍｅｌ１４、Ｍｅｌ１５。应用电泳技术,抑制钙依赖性的磷酸二酯酶酶活方法和荧光技术研究了这些多肽与钙调蛋白的相互作用。结果表明这些多肽与钙调蛋白均形成１：１复合物,抑制钙依赖性的磷酸二酯酶的活性,其中Ｍｅｌ１４和Ｍｅｌ１５对钙调蛋白的结合活性与完整的蜂毒肽比较接近。     

海枣曲霉地衣多糖酶和木聚糖酶的底物特异性

海枣曲霉木聚糖酶x—I、x—u和x一III作用于不同底物对,x_I对地衣多糖的水解活性最强,对麦麸半纤维素H和B也有一定的水解活性,因而该酶为具有木聚糖酶活性的地衣多糖酶(LichⅢe,l,3一l,4一卢一D—Glucan 4一glucnohydrolasc,Ec 3．2．1．73)。 X—II对燕麦木聚糖、麦麸半纤维素B和H均有很高的水解活性,对其他木聚糖及地衣多糖的水解活性也较高,因而为具有地衣多糖酶话性的木聚糖酶o x—Iil对落叶松木聚糖的水解活性最高,对其他木聚糖也有较高的水解话性,但不能水解地衣多糖等β一葡聚糖,故为一种专一的木聚糖酶。X一1水解麦麸半纤维素B、x一Ⅱ水解燕麦术聚糖及x—Iu承解落叶松木聚糖的Km值分别为9·9、2．1和1．8mg／ml。酶水解产物的纸层析分析结果表明,x—I水解不同木聚糖后的产物主要为分子量较大的寡聚木糖,未发现木二糖、木糖及阿拉伯糖。X_Il的水解产物主要为木二糖 及木二糖以上的寡糖,并有少量木糖和阿拉伯糖,且阿拉伯糖远多于木糖。X-III的水解产物中以木二糖为最多,也有较多的木二糖以上的寡聚木糖,木糖和阿拉伯糖的量较少,且阿拉伯糖远少于木糖。     

复合氨基酸铜螯合物的研究

以废弃鸡毛的硫酸水解液作为复合氨基酸的来源 ,将其与CuSO4 ·5H2 O螯合 ,采用有机溶剂沉淀法制取了高纯度的氨基酸铜螯合物 ,并用化学分析和红外光谱分析对其进行了研究 ;同时 ,提出了一种根据直接测定螯合态微量元素的含量来测定螯合率的新方法 ,为螯合率的测定提供了一条新的途径     

噬菌体展示技术筛选抗轮状病毒多肽的试验研究

从噬菌体随机展示十五肽文库筛选出4个与轮状病毒粒子特异性结合多肽。经空斑减少抑制实验和MTT法分析表明其中3个多肽对病毒感染培养细胞具有抑制作用,其中序列为QSNPIHIITNTRNHP的C肽具有显著抑制作用,抑制效果达93%,另外2个多肽A和B抑制效果分别为40%与50%。经过多肽序列分析发现这3个十五肽具有2个保守序列,分别是第2至8个氨基酸残基SNPIHII和第12~15个氨基酸残基NIP。胰蛋白酶水解位点分析表明C肽无裂解位点,而A肽和B肽则分别具有3个和4个潜在水解位点。抑制病毒感染液中胰蛋白酶活性,发现A,B两肽也能显著地抑制病毒离体感染。说明所筛选的多肽2个保守序列的完整对抗病毒感染起着重要作用。C肽有望成为一种治疗轮状病毒感染的口服药物。     

噬菌体展示技术筛选抗轮状病毒多肽的试验研究

从噬菌体随机展示十五肽文库筛选出4个与轮状病毒粒子特异性结合多肽。经空斑减少抑制实验和MTT法分析表明其中3个多肽对病毒感染培养细胞具有抑制作用,其中序列为QSNPIHIITNTRNHP的C肽具有显著抑制作用,抑制效果达93%,另外2个多肽A和B抑制效果分别为40%与50%。经过多肽序列分析发现这3个十五肽具有2个保守序列,分别是第2至8个氨基酸残基SNPIHII和第12～15个氨基酸残基NIP。胰蛋白酶水解位点分析表明C肽无裂解位点,而A肽和B肽则分别具有3个和4个潜在水解位点。抑制病毒感染液中胰蛋白酶活性,发现A,B两肽也能显著地抑制病毒离体感染。说明所筛选的多肽2个保守序列的完整对抗病毒感染起着重要作用。C肽有望成为一种治疗轮状病毒感染的口服药物。     

蜂毒肽片段的合成及其与钙调蛋白的相互作用

采用固相法设计合成了４个蜂毒肽片段，Ｍｅｌ １２，Ｍｅｌ １３，Ｍｅｌ １４，Ｍｅｌ １５。应用电泳技术，抑制钙依赖性的磷赖性的磷酸二酯酶酶活方法和荧光技术研究了这些多肽与钙蛋白的相互作用，结果表明这些多肽与钙调蛋白均形成１：１复合物，抑制钙依赖性的磷酸二酯酶的活性，其中Ｍｅｌ １４和Ｍｅｌ １５对钙调蛋白的结合活性与完整的蜂毒肽比较接近。     

多肽铬螯合物对糖尿病小鼠肝脏蛋白质表达影响的研究

目的：研究多肽铬螯合物对糖尿病小鼠肝脏蛋白质表达的影响,探讨其治疗糖尿病的机理。方法：通过腹腔注射四氧嘧啶建立糖尿病小鼠模型。将小鼠分为正常组模型组和胶铬组,胶铬组以灌胃方式加入多肽铬螯合物;以光镜及HE染色观察三组小鼠肝脏形态及组织学的变化,采用SDS-PAGE实验和非SDS-PAGE检测三组小鼠肝脏蛋白质表达。结果：光镜及组织学观察结果显示多肽铬螯合物可以有效地减轻四氧嘧啶对肝细胞造成的损伤。模型组肝脏25kDa-35kDa之间的某种蛋白表达升高而多肽铬螯合物可以降低此种蛋白的表达,初步推断这种蛋白质为SOD。结论：多肽铬螯合物能够通过降低四氧嘧啶造成的肝脏中抗氧化有美的蛋白盾代偿性升高而起到保护肝脏的作用．是一种新型的治疗糖尿痛所致的肝损伤的活性物盾。     

指形龙隙蛛毒腺中抗凝活性多肽挖掘

目的：有毒动物毒腺分泌大量结构多样和功能丰富的活性多肽,是多肽药物开发的天然宝库。目前仅有一小部分有毒动物活性多肽被研究,因此有必要建立一种更加高效的活性多肽挖掘方法。方法：以指形龙隙蛛为研究对象,通过对毒腺样本进行转录组测序、数据分析与多肽挑选,多肽重组表达制备,体外活性筛选和动物模型体内活性评价等方法,进行抗凝活性多肽的开发。结果：筛选到一种凝血因子Xa抑制剂PDBPE-001,多肽分子量为9 889.82 Da,由92个氨基酸残基组成,有4对二硫键。该多肽可通过重组表达的方式高效制备,对凝血因子Xa的抑制活性呈浓度依赖性,其半抑制浓度约为0.807μmol/L。在体内血栓模型中,30 mg/kg PDBPE-001能起到良好的抗血栓效果。结论：首次从指形龙隙蛛中获得了一个新型Factor Xa抑制剂,为新型抗凝血药物开发提供了一个全新的先导多肽分子。     

酶解鹿茸血ACE抑制活性及其与抗氧化活性关系的研究

实验采用木瓜蛋白酶和Alcalase碱性蛋白酶水解鹿茸血,在不同的时间取样,分别测定血管紧张素转化酶(ACE)抑制率、二苯代苦味肼基自由基(DPPH.)清除率和羟自由基(.OH)清除率。结果表明Alcalase蛋白酶水解产物ACE抑制活性和DPPH.清除活性较强,其水解3h的产物ACE抑制率为90.63%,DPPH.清除率为14.40%;木瓜蛋白酶水解5h的产物.OH清除率最高,为96.7%。用SPSS10.0软件分析结果,发现ACE抑制率与DPPH.清除率具有显著相关性。     

重组人肿瘤坏死因子α抑制肽-抗炎酸性尾巴融合蛋白的生物学活性检测

目的：评价原核表达、纯化的6×His-硫氧还蛋白（TRX）一人肿瘤坏死因子α（TNFα）抑制肽-C端抗炎酸性尾巴融合蛋白的生物学功能。方法：在大肠杆菌中分别表达带His标签的TRX对照蛋白及TRX蛋白融合的人TNFα抑制肽-抗炎酸性尾巴融合蛋白,并对2种蛋白进行N^2＋金属螯合层析纯化,采用MTT法检测纯化后的蛋白及化学合成多肽抑制TNFα标准品对L929细胞的细胞毒活性。结果：与对照蛋白相比,融合蛋白人TNFα抑制肽-C端抗炎酸性尾巴及合成多肽均能拮抗TNFα标准品对L929细胞的细胞毒作用。结论：融合蛋白人TNFα抑制肽-C端抗炎酸性尾巴及合成肽均能有效拮抗TNFα的生物学作用,为今后发展抑制TNFα为主的抗炎生物药物奠定了基础。     

多肽铬螯合物对糖尿病小鼠肝脏蛋白质表达的影响

目的:研究多肽铬螯合的对糖尿病小鼠肝脏蛋白质表达的影响,探讨其治疗糖尿病的机理.方法:通过腹腔注射四氧嘧啶建立糖尿病小鼠模型.将小鼠分为正常组、模型组和胶铬组,胶铬组以灌胃方式加入多肽铬螯合物;以光镜及HE染色观察三组小鼠肝脏形态及组织学的变化,采用SDS-PAGE实验和非SDS-PAGE检测三组小鼠肝脏蛋白质表达.结果:光镜及组织学观察结果显示多肽铬螫合物可以有效地减轻四氧嘧啶对肝细胞造成的损伤.模型组肝脏25kDa-35kDa之间的某种蛋白表达升高而多肽铬螯舍物可以降低此种蛋白的表达,初步推断这种蛋白质为SOD.结论:多肽铬螯合物能够通过降低四氧嘧啶造成的肝脏中抗氧化有关的蛋白质代偿性升高而祈祷保护肝脏的作用,是一种新型的治疗糖尿病所致的肝损伤的活性物质.     

磷酸肌醇代谢与血小板活化

血小板受刺激剂作用后的最初变化之一是膜磷脂酰肌醇-4′,5′-二磷酸的水解,水解产物三磷酸肌醇和二酰甘油酯分别通过钙流与蛋白激酶 C 进一步引起血小板释放等活化反应。这两个水解产物可能在细胞活化中起着第二信使的作用。     

人基质金属蛋白酶2催化区的克隆与表达

为从随机肽库中寻找具有基质金属蛋白酶 2 (MMP 2 )抑制活性的新型小肽抑制剂 ,应用PCR法从含有人MMP 2基因的质粒中扩增了人MMP 2的催化区 .序列分析结果表明无氨基酸突变 .然后构建人MMP 2催化区的表达载体pET MCD ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3 ) ,经IPTG诱导表达人MMP 2催化区 .经包涵体分离、变性、金属螯合层析纯化和复性等过程 ,复性后的人MMP 2催化区具有较好的明胶水解活性 .     

黄酒中抑制同型半胱氨酸诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖和迁移成分探讨

目的:探索黄酒中具有抑制同型半胱氨酸(Hcy)诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖和迁移作用的活性成分。方法:SD大鼠主动脉VSMCs原代细胞培养鉴定,取4~7代细胞用于实验。VSMCs分为control组、Hcy(浓度为1 mmol/L)组、低聚糖组(Hcy+黄酒低聚糖)、多肽组(Hcy+黄酒多肽)、多酚组(Hcy+黄酒多酚)、酒精组(Hcy+酒精)、黄酒组(Hcy+黄酒)共7组。MTT法检测各组VSMCs的增殖情况;划痕法和Transwell法检测各组VSMCs的迁移情况;Western blot法检测各组VSMCs中基质金属蛋白酶-2/9(MMP-2/9)、基质金属蛋白酶的组织抑制剂-2(TIMP-2)的表达情况;明胶酶谱检测各组VSMCs中MMP-2/9的活性。结果:与control组相比,Hcy组VSMCs增殖迁移增加、MMP-2/9表达和活性增加(P0.01)。与Hcy组相比,多肽组、多酚组、黄酒组VSMCs增殖迁移减少、MMP-2/9表达和活性减少(P0.05)。各组之间TIMP-2的表达没有显著差异。结论:黄酒中的多肽类和多酚类成分具有抑制Hcy诱导的VSMCs增殖和迁移的作用。     

噬菌体肽库筛选抗人B7-H4中和抗体的模拟抗原表位及其免疫原性鉴定

目的:用噬菌体呈现随机12肽库筛选能与抗人B7-H4(h B7-H4)中和抗体特异性结合的模拟抗原表位肽,并用其免疫小鼠检测其免疫原性。方法:以抗h B7-H4中和抗体为靶分子,用体外生物淘洗法从噬菌体呈现随机12肽库中筛选与之结合的噬菌体克隆,用竞争性细胞ELISA鉴定阳性噬菌体克隆;化学合成候选多肽,并与钥孔血蓝蛋白或破伤风毒素偶联鉴定多肽的特异性;进一步用融合蛋白免疫小鼠检测其免疫原性和抗血清的补体依赖的细胞杀伤活性(CDC)。结果:经过3轮体外筛选后随机挑取50个阳性噬菌体克隆,其中20个克隆与抗h B7-H4抗体有较强的结合能力,DNA测序得到6组结构相似的肽序列;竞争性ELISA结果显示1号肽噬菌体能与细胞表面的h B7-H4竞争性地结合抗h B7-H4单抗;点杂交结果显示1号肽能特异性结合抗h B7-H4单抗;小鼠免疫实验结果显示1号肽融合蛋白能诱导高滴度的抗h B7-H4抗血清,并且抗血清具有补体依赖的细胞杀伤活性。结论:筛选得到能与抗h B7-H4中和抗体特异性结合的12肽模拟抗原表位序列并且具有免疫原性,为进一步开发h B7-H4相关的多肽疫苗提供了实验依据。     

铜金属螯合载体固定糖化酶

[目的]制备出含Cu2+的琼脂糖-IDA螯合载体及对其固定糖化酶工艺条件进行优化.[方法]利用金属螯合配体(IDA-Cu2+)与蛋白质表面供电子氨基酸相互作用的原理制备载体,采用紫外分光光度法测定不同影响因素下固定化糖化酶的酶活.[结果]Cu2+的加入量和固定化过程的酸度比给酶量对固定化糖化酶的活性影响还要大,在给酶量80 mg/g载体、1.0× 10-2 mol Cu2+/g载体、pH 4.6和固定化4h的固定化条件下,固定化酶活为252.1 U/g,重复使用5次后酶活为首次固定化酶活的65.1％.[结论]该Cu2+-IDA-金属螯合琼脂糖可用于淀粉水解糖化酶的优良固定化载体材料.     

钙螯合胶原多肽与雌激素对去卵巢大鼠骨质改善作用的比较

目的将钙螯合胶原多肽(CPCC)的骨质改善效果与雌激素进行比较,为安全的骨质疏松(osteoporosis,OP)防治药物的研发奠定基础。方法切除大鼠双侧卵巢,设置切卵巢组(OVX)、假手术组(sham)、17β-雌二醇(OVX+E_2)注射组与CPCC灌胃组(OVX+CPCC),9周后比较各组的骨骼指标和血液生化指标。结果 OVX组股骨密度显著低于sham组(P0.01),说明OP发生。和激素一样,CPCC可有效抑制所测指标的异常变化,并使其维持在sham组水平(P0.05)。然而在抑制体重增加方面,E_2组在第8、9周体重显著低于sham组(P0.01);在阻止骨矿和骨有机质流失方面,E_2组的Mg、Ca水平显著低于CPCC的中、高剂量组,Cu水平与sham组无差异,而CPCC(中、低剂量)则显著高于sham组。E_2组的Mn、Zn、及羟脯氨酸水平显著低于sham组,而CPCC则可维持在sham组水平。对血液中BGP和Str ACP水平升高的抑制作用,E_2组与OVX组相比差异无显著性,CPCC组则可显著低于OVX组。抑制血钙水平下降时,E_2组与OVX组相比差异无显著性,而CPCC组显著高于OVX组。结论在改善去卵巢大鼠骨质方面,钙螯合胶原多肽比雌激素更为有效。