大鼠垂体细胞液泡内存在黄体生成激素（LH）

研究者普遍认为糖蛋白激素存在于促性腺激素（gonadotrophin,GTH)细胞的颗粒内,目前在生殖内分泌领域内对糖蛋白激素形成与释放的研究也主要集中在细胞内颗粒的变化上,我们近年的研究发现,大鼠垂体GTH细胞内黄体生成激素（luteinizing hormone,LH)的分泌与细胞内液泡的形态变化有密切的关系。铁形态也随液泡的形态变化而变化,因而推测“LH的储存与释放可能与液泡有极大的关系”,为进一步揭示垂体细胞的液泡内是否存在LH和探讨哺乳动物垂体细胞的液泡是否具有储存与释放LH的功能,本研究对大鼠垂体细胞的液泡进行了分离和纯化。用SDS－PAGE,Western immunobloting及Con A/HRP等方法分别对纯化的垂体,大脑皮层及肝脏组织的液泡进行了蛋白质,LH及糖蛋白的分析。结果显示：（1）垂体,皮层及肝脏细胞的液泡内均含有丰富的,分子量大小不等的蛋白质成分,不同组织的细胞液泡内蛋白质成分有许多是相似的;（2）垂体组织及其液泡内均含有LH,而且在相同浓度的蛋白量中,两者LH的水平并无明显差异;（3）垂体,皮层和肝脏组织液泡内均有分子量不同的糖蛋白,但只有垂体细胞的液泡内才有与LH位置相同的糖蛋白染色谱带。上述结果表明：虽然哺乳动物不同组织的细胞液泡内含有许多相似的蛋白质成分,但LH是特异性地存在于垂体细胞液泡内。在这些LH分子中,至少有一部分是已经装配了糖基的完整LH分子。因此,垂体细胞的液泡有可能具有储存与释放LH的功能。     

米非司酮对离体大鼠垂体细胞促黄体激素分泌的影响及其机制

本实验应用垂体细胞体外培养模型,观察了米非司酮（MP）对GnRH,高浓度细胞外K^ ([K^]e)和蛋白激素C激活剂PMA诱导的LH分泌的影响,结果证实MP可以剂理和时间依赖方式抑制GRH诱导的LH分泌,并可拮抗P 调节GnRH诱导的LH分泌效应,同时发现10^-7mol/L MP短时间处理4h能抑mmol/LKCl和10^-8mol/LMA诱导的LH分泌,而10^-7mol/LP短时间处理则起促进作用,当处理时间延长为52h时,P对60mmol/LCl和10^-8mol/LPMA诱导的LH分泌无明显作用,P也仅对60mmol/LKCl刺激的LH分泌起抑制作用,但不影响10^-8mol/L PMA诱导的LH分泌,当P和MP同时处理时,则MP可逆转P对高[K^ ]e和PMA诱导的LH分泌的调节作用,表明MP影响GnRH诱导的LH分泌的机制可能与MP影响电压依赖性钙离子通道和PKC的活性有关。     

抗孕53影响大鼠垂体前叶对GnRH的敏感性反应

本实验应用动情前期大鼠垂体前叶组织块离体培养方法,观察了 A 环失碳类甾体化合物—抗孕53对 LH 基础分泌和动员性分泌的影响。实验分为对照组、GnRH 组、抗孕53组、GnRH-抗孕53组。结果表明,GnRH 可显著促进 LH 分泌并产生自激作用。GnRH 的第一次作用后,LH 分泌增加量由对照组的0.7ng/ml 增加到4.3ng/ml,而当 GnRH 第二次作用后,这一效应显著增强,由对照组的0.5ng/ml 增加到6.8ng/ml,GnRH 的两次作用效应相比,差异极显著。抗孕53可部分抑制垂体对 GnRH 的敏感性反应。抗孕53作用后,LH 分泌增加量由 GnRH 第一次作用后的4.3减至2.5ng/ml,由 GnRH 第二次作用后的6.8降至4.1ng/ml。抗孕53不影响 LH 的基础分泌,与对照组相比,两组的 LH 分泌增加量无显著差异。抗孕53对垂体的这一作用可能是通过直接影响促性腺激素细胞的代谢及调节而实现。     

荷包牡丹碱对垂体前叶组织块释放促肾上腺皮质激素的刺激效应

本实验利用垂体组织块离体灌流技术,观察到－氨基丁酸Ａ受体拮抗剂荷包牡丹碱对切除双侧肾上腺９６ｈ后的大鼠垂体前叶ＡＣＴＨ的分泌具有强烈的刺激作用。但同样浓度的荷包牡丹碱对分离的垂体前叶细胞的ＡＣＴＨ分泌无影响。提示肾上腺切除后,－氨基丁酸在垂体前叶直接或通过间接途径抑制ＡＣＴＨ分泌。     

电场刺激对离体温育垂体前叶促肾上腺皮质激素分泌的影响

本实验应用离体温育大鼠垂体前叶组织块结合电场刺激及放射免疫测定方法,观察了垂体前叶内的神经纤维兴奋对促肾上腺皮质激素（ＡＣＴＨ）分泌的影响以及其它因素的作用。结果表明,一定参数的电场刺激使温育的大鼠四分之一垂体前叶组织块ＡＣＴＨ分泌增加,能被河豚毒素（ＴＴＸ）和藜芦碱部分阻断,此效应也可被地塞米松显著抑制,而同一参数的电场刺激与促肾上腺皮质激素释放激素（ＣＲＨ）诱发的ＡＣＴＨ分泌没有相互作用。经典神经递质受体阻断剂阿托品、心得安、酚妥拉明对电场刺激诱发的ＡＣＴＨ分泌没有显著影响;ＧＡＥＡ＿Ａ受体拮抗剂荷包牡丹碱明显促进此效应。该作用不受Ｐ物质拮抗剂ｓｐａｎｔｉｄｅ的影响,而降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）受体拮抗剂ＣＧＲＰ片段８－３７能部分阻断这一作用。上述结果提示电场刺激所诱发的ＡＣＴＨ分泌可能部分由垂体前叶内ＣＧＲＰ能神经纤维介导。     

大鼠排卵前促性腺激素释放激素释放过程中下丘脑前阿黑皮素基因表达和雌激素受体的水平

在大鼠动情前期促黄体生成激素峰形成前后测定了血清雌、孕激素水平变化、下丘脑正中隆起促黄体生成激素释放激素含量及弓状核区雌、孕激素受体密度改变和弓状核前阿黑皮素ｍＲＮＡ水平变化。结果表明：动情前期１４小时时血清雌激素水平开始升高（Ｐ＜００５）,于１６小时时达高峰。此时弓状核雌激素受体密度降低（Ｐ＜００５）,孕激素受体密度增加（Ｐ＜００５）,前阿黑皮素ｍＲＮＡ水平减少（Ｐ＜００５）。前阿黑皮素ｍＲＮＡ水平与血清雌激素及正中隆起的促性腺激素释放激素水平呈负相关（Ｐ值分别小于００１及００５）,与弓状核雌激素受体密度变化呈正相关（Ｐ＜００１）。提示弓状核的前阿黑皮素ｍＲＮＡ水平在此过程中可能受雌激素及其受体调控,下丘脑β内啡肽合成减少可能参与了排卵前促性腺激素释放激素／促黄体生成激素峰的形成。     

白细胞介素—2对大鼠离体垂体前叶细胞增殖的影响

本工作采用大鼠垂体前叶（ＡＰ）细胞原代培养方法,以＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入率反映细胞增殖水平,研究了ＩＬ－２对ＡＰ细胞增殖的影响。结果表明：（１）ＩＬ－２（１０￣５００Ｕ／ｍｌ）明显促进性大鼠包括妊娠大鼠的ＡＰ细胞的增殖,而抑制雄性大鼠ＡＰ细胞的增殖。（２）雄性大鼠行卵巢切除（ＯＶＸ）二周后,ＩＬ－２对其ＡＰ细胞增殖的影响反转为抑制效应;若在卵巢切除二周内,每日给予ＯＶＸ大鼠皮下注射５μｇ苯甲酸雌二醇,     

GnRH相关肽在大鼠垂体前叶的细胞学定位

本研究应用特异性抗GnRH相关肽(GAP)N端11个氨基酸的抗血清和六种垂体前叶激素的抗血清,通过免疫组织化学双重染色技术观察GAP在大鼠垂体前叶细胞的定位。结果发现,GAP样免疫反应性物质存在于LH细胞和FSH细胞,而未见于GH、PRL、TSH和ACTH细胞。本文首次证明GAP存在于正常大鼠垂体促性腺激素细胞,为GAP调节LH和FSH的分泌提供了形态学证据;也支持GAP的功能序列在其分子的N端,或GAP进一步裂解出N端片段而发挥作用。     

葆包牡丹碱对垂体前叶组织块释放促肾上腺皮质激素的刺激效应

本实验利用垂体组织块离体灌流技术,观察到γ－氨基丁酸Ａ受体拮抗剂荷包牡丹笃切除双侧肾上腺９６ｈ后的大鼠垂体前叶ＡＣＴＨ的分泌具有强烈的刺激作用。但同样浓度的荷包牡丹笃分离的垂体前叶细胞的ＡＣＴＨ分泌无影响,提示肾上腺切除后,γ－氨基丁酸在垂体前叶直接或通过间接途径抑制ＡＣＴＨ分泌。