从小白鼠血液制备染色体的快速方法

每只小白鼠注射(I.P)0.1毫升秋水仙素(0.6毫升/毫升),四小时后杀死。从心脏取血,用肝素抗凝。取10滴左右血液置于一刻度离心管中,管内预先装好3—5毫升0.7％柠檬酸钠,放在37℃下温浴,摇匀后加一滴稳定的玻璃酸酶(150N.F.单位/毫升)。在37℃下温浴20分钟。用温浴的最后五分钟配制3∶1甲醇-醋酸固定液。温浴完毕时加2滴固定剂并温和地摇匀。600转离心机离心5分钟弃去上清液(留1毫升左右)再加3毫升固定剂,加塞后放置冰箱30分钟。在600转离心机离心5分钟弃去上清液(留1毫升),再加预冷固定液3毫升,用吸管来回搅匀。离心弃去上清液。再加2毫升冷固定剂,并在冰箱中过夜。第二天离心后弃去上清液,用甲醇洗,吸去甲醇,取一     

对牛,羊,人包虫囊液成份及抗原性的研究

诊断人、畜包虫病的免疫学方法主要以包虫囊液作抗原,但存在一定的非特异反应。研究包虫囊液生化成份及抗原性,有助于选择适宜的包虫囊液供作免疫实验,以及纯化包虫囊液粗抗原,可提高免疫诊断方法的特异性。本文收集牛、羊、人包虫囊液对抗原的生化成分及免疫性进行了研究。现报道如下:材料与方法一、包虫囊液:将收集的包虫囊液经3000rpm离心30分钟,取上清液存于-20℃备用。二、抗血清:将囊液离心收集原头节,制成匀浆。浸提后10000rpm离心30分钟,上清液蛋白含量为2.8mg/ml(Lowry法)。多点注射免疫家兔。抗血清阳性滴度ELISA为1/12800,对…     

一种快速观察四膜虫纤毛的方法

器材与药品离心机,三用水箱,天平,染色缸。席夫试剂(schiff reagent),漂白液,乙醇二甲苯,磷酸缓冲液(PH7.2)。亮绿(溶剂是95％的乙醇) 步骤 1.取四膜虫浮液3—5ml,离心5分钟(800—1000转/分),去上清液,留沉淀物0.3—0.5ml。 2.用PH7.2磷酸缓冲液洗涤,离心5分钟(800—1000转/分),去上清液,留沉淀物0.3—0.5ml。 3.涂片。用甲醇固定液固定。 4.水解处理。室温下先在1NHCl中处理1分钟,后移至1NHCl(60℃)中处理7—9分钟(水解     

染色体分析用于鉴定大熊猫幼仔性别

我们应用人类外周血微量短期培养技术,对出生2个半月的大熊猫染色体组型进行了分析,并确定了性别。 材料来自福州动物园初生大熊猫“榕榕”,培养基组合:RPMI—1640 4ml,小牛血清1ml,植物血凝素0.2ml混合,pH调至7.4左右。加静脉血0.2ml,37℃下培养72小时。终止培养前6小时,加入秋水仙素,浓度为0.08～0.15微克/ml。将收获的细胞用0.075M氯化钾溶液低渗处理20分钟,低速离心沉淀,用甲醇:冰醋酸(3:1)混合液固定30分钟,重复二次。最后用空气干燥法常规制作标本片。选择30个中期核分裂象计数,观察染色体的数目和形态。     

黑麂的核型

我们在进行麂属核型进化的研究过程中,发现我国特有动物—黑麂(Muntiacus crinifrons)的染色体数目较少,比已知脊椎动物中,染色体数最少的赤麂(Muntiacus muntjak vaginalis)略多,与Wurster等(1972)报导的一头捕自马来西亚的雌性赤麂(Muntiacus,muntjak muntjak)的染色体数目相同,但形态有差异。现简报如下。 材料和方法 雌性:用肺成纤维细胞培养法,在含有15％小牛血清的F_(12)培养基中培养,温度38℃。终止培养前4小时加入秋水仙素,用胰酶消化法收获细胞,细胞悬浮在0.075M的氯化钾液中低渗15分钟,用甲醇—冰乙酸(3:1)液固定30分钟(每次15分钟)。空气干燥法制片。Giemsa染色。测量计算10个中期分裂相,按Leven等(1964)的标准进行染色体分组。     

三种固定液对两种氧化应激细胞模型Bclin1和LC3蛋白免疫荧光染色的影响

摘要 目的：比较采用三种不同的固定液对两种氧化应激细胞模型Beclin1和LC3蛋白免疫荧光染色的影响。方法：本研究使用丙酮/甲醇（1:1）固定液、甲醇固定液和4%多聚甲醛三种固定液分别对氧化应激细胞模型大鼠原代心肌成纤维细胞和MCF-7乳腺癌细胞株进行固定,然后再分别进行免疫荧光双染实验,对比三种固定液固定后对自噬关键调控蛋白Beclin1和LC3染色效果。结果：三种固定液对氧化应激细胞模型Beclin1和LC3蛋白免疫荧光染色结果存在较大差异。丙酮/甲醇（1:1）固定液固定后免疫荧光染色效果最佳,细胞结构清晰可见,两种蛋白定位表达清晰,甲醇固定液次之,4%多聚甲醛固定液效果欠佳。结论：在对大鼠原代心肌成纤维细胞和MCF-7乳腺癌细胞进行自噬相关蛋白免疫荧光双染色实验中,在使用其它固定液染色效果不佳的情况下,可以选择应用丙酮/甲醇（1:1）固定液固定,再进行免疫荧光染色;根据不同实验需求相应选择更适宜的固定液,以达到最佳的荧光染色结果。     

绒毛滋养层细胞直接制备染色体方法

本方法对绒毛滋养层细胞直接制备染色体作了改进。分别将制片手法,低渗液配制,秋水仙素浓度与固定时间等方面给以改良。后三者不同于Simoni及国内报道,作者认为低渗液成分,秋水仙素浓度与固定时间是不可分割与相互影响的。此法所得分裂相中,染色体形态及分散良好和显带清晰,方法稳定,有利于孕早期诊断的染色体结构分析。     

介绍一种染色体离心制片法

染色体标本的制备一般都采用气千法。即 于冰水中浸过的玻片上滴加固定好的细胞悬 液,并立即吹气使之铺展,再经火焰烤干,然后 染色而成。此法简便易行,然而有时仍有一些 缺点。如在玻片上形成大小不等之点状痕迹; 细胞铺占整个玻片,一些分裂相易落在玻片边 缘或玻片下端;由于细胞布满整个玻片,因此贴 标签时也会被盖去一部分等等。为避免上述缺 点,我们试采用离心制片法。几经实践,结果尚 感满意（图1),现作简要介绍如下。     

虎斑游蛇染色体组型的研究

研究各种蛇的染色体数目、组型、带型及 其相互之间的关系,对于探讨蛇的分类及其演 化均有一定意义。关于蛇类染色体的研究自 Thatcher (1922）首先报道后,相继Nakamura (1927、1928、1929, 1935), Bhatnager（1960), Manroe(1962), Bergak(1963、1964、1965、1966, 1968, 1969), Itoh(1970), Bickham(1976）等对 游蛇科（Colubridae)、眼镜蛇科（Elapidae)、海 蛇科（Hydro户hdae),蜂科（Vipiridae）等科的部 分蛇类的染色都有所报道。但国内只近年有所 报道,研究不多[1,2,37。关于虎斑游蛇（Natrix tigrina lateralis (Berthold) ]染色体的研究未见 报道。为此我们对虎斑游蛇的染色体组型作了 研究和分析,现将研究方法与结果报道如下。 甲醇与冰醋酸（3:1)固定液固定30分钟。重复 固定3次,最后用空气干燥法制片。1:10的 Giemsa液（pH7.2 )染色30分钟。 染色体标本制成后,在油镜下计数100个 以上完整的、分散良好清晰的中期分裂相检查 二倍体染色体数目。再选取20个优良的中期 分裂相照相放大。参照Denve：体制测量方法, 进行染色体配对和组型分析。     

蝗虫性细胞减数分裂制片方法的改良

最近,我室采用分离、滴片方法观察蝗虫性细胞减数分裂,取得良好效果。现介绍如下。 1.取材在麦熟和稻熟季节采集蝗虫。取其精巢固定于卡诺液中0.5—1小时。去固定液,用95％酒精洗3次,移于70％酒精中,置于低温下可长期保存。 2.制片方法 (1)用眼科镊把精巢取出,装入瓶中,加入碎玻璃反复振荡,使组织捣碎。 (2)用吸管吸取捣碎液放入离心管内,以1000转/分的速度离心3—5分钟。去上清液,     

简易胶原酶灌流法分离培养大鼠肝细胞

目的:对传统的胶原酶灌流法加以改进,以节约分离肝细胞的实验时间和成本。方法:采用离体法,分3次从肝窦灌注含有肝素钠的D-Hanks液共150mL;用30mL终浓度为0.04%的胶原酶液(Ⅰ∶Ⅳ=1∶4)灌洗2min;去除表皮等结缔组织,过筛、离心洗涤即得肝细胞。结果:平均1g大鼠肝脏能获取7×106～8×106个肝细胞,细胞存活率为96.3%。结论:简易胶原酶灌流法的胶原酶用量是Seglen二步灌注法用量的1/16,是半原位的1/4;灌流时间约5min,是Seglen二步灌注法的1/4;半原位法也通常需要6～7min。此法具有装置简单、试剂消耗量小、操作方便快捷、实验成本低的特点,为需要周期性重复建立大鼠肝细胞模型的实验提供了一种简单快速的分离方法。     

昆虫病毒重组质粒的快速提取

质粒的提取与纯化是基因工程的重要内容。我们用昆虫杆状病毒BsNPV DNA的Bam HI片段与质粒pBR322重组得到重组体pBSa18和pBSb36。用LB摇床培养。 质粒pBR322 DNA用Gonzalls等(1980)的常规法提取。重组质粒的提取是离心40ml培养液收获细胞,加pH7.8 4×TEA缓冲液50ml,GSE(甘油50％,SDS 5％,EDTA0.1M)18ml,70℃保温10分钟,-20℃冷冻过夜,次日在4℃离心12 000r/min15分钟,取上清直接进行制备性琼脂糖凝胶电     

早期自然流产患者绒毛中肥大细胞数量与CD34和TNF-α表达的相关性研究

国内外研究表明,肥大细胞（MC）在不同动物的发情周期以及胚泡着床、正常分娩和自然流产等过程中可能具有重要作用。本研究以不明原因早期自然流产患者的绒毛组织为研究对象,以正常妊娠（孕5～9周）人工流产患者的绒毛为对照,以4%中性甲醛为固定液,用阿辛蓝-萨红染色（ADS）法,结合细胞记数半定量,分析MC在绒毛中的分布特点和变化规律。     

农业其它

921165利用膜操作提纯赤霉酸〔英〕/Leonhardt,H.W.…了Aeta Bioteehnol一1991,11(2)一95~101〔译自DBA,1001,10(15),31一05776〕 提供了利用合成的纤维素一2,5一乙酸醋膜通过超滤工艺提纯赤霉素(GA)的方法。利用表面技术式浸没技术生产GA,依产GA手段的不同,培养液中GA的产量变化范围为40mg/1~19/l。初始原料含一厚层油性物质,可在ds。。rpm下离心分开。在0.3MPa压力下使用纤维素一2,5一乙酸醋膜UF60和UF40。经用PEG和在不同温度下进行的一系列实验得出用UF60提取GA的温度应选择85℃。首次离心提纯初始溶液后加人沉淀剂。共同使…     

用印片法制青霉和曲霉的永久封片

(一)材料和方法 1.菌种:青霉(Penicillium chrysogenum),黑曲霉(Aspergillus niger) 2.培养:将青霉和黑曲霉斜面制成悬液,吸0.1ml于马铃薯培养基(马铃薯200克,蔗糖20克,琼脂粉11克,水1000毫升,15磅/吋~2灭菌30分钟)平板上涂布,于28℃培养2天。 3.制片:取两块干净载玻片,在其中一块上涂一层薄胶层(胶为光学树脂),然后用解剖针在青霉或曲霉平板上挖一小块带菌琼脂(约0.5厘米~2),将琼脂块放在薄胶层上(培养面朝下),用另一块载玻片在琼脂块上轻轻按压,然后将琼脂块小心弃去。将印有菌迹的载玻片     

不同固定液对体外细胞系荧光蛋白淬灭及对胞内蛋白荧光染色的影响

目的:比较不同细胞固定液对荧光蛋白淬灭情况以及核内、胞浆蛋白免疫荧光染色的影响。方法:分别对融合了RFP和GFP基因的鼻咽癌HK1细胞采用95%乙醇、75%乙醇、甲醇、丙酮:甲醇=1:1、5%冰乙酸、Carnoy固定液进行固定,然后采用免疫荧光法对细胞进行免疫染色。结果:六种固定液均能使荧光蛋白猝灭。免疫荧光染色方面,对于核蛋白染色,75%乙醇、95%乙醇、丙酮:甲醇=1:1、Carnoy固定液固定后核区获得明显的荧光染色,而采用甲醇、5%冰乙酸固定后荧光染色不明显。对于胞质蛋白染色,按荧光染色的清晰程度分为固定于Carnoy固定液丙酮:甲醇=1:1甲醇5%冰乙酸75%乙醇95%乙醇,前四者固定可见分布于胞质,75%乙醇或95%乙醇固定的目标蛋白定位不清。结论:六种不同的固定液在有效失活荧光蛋白的情况下对核蛋白及胞浆蛋白抗原性的影响略有不同,可根据研究目的蛋白表达的部位及特点来选用合适的固定液。     

果蝇唾腺染色体的观察和制片方法的改进

几年来我们在教学中进行了多方面的实验探索,在果蝇唾腺制片方法上加以改进,采用加蔗糖液保色,树脂胶封边,制备一种半永久制片标本。操作过程如下: 1.取出唾腺,在其上加2滴(37℃)蒸馏水低渗处理10～20分钟,使唾腺细胞涨大有利于染色体的分散。 2.用滤纸吸去蒸馏水,加1滴1N HCl解离8～15分钟(时间随当时的温度而定),吸去解离液,用蒸馏水轻轻冲洗2～3次,将水吸净。     

基因工程

<正>发展了奶制品发酵生产中的重要乳酸链球菌质粒DNA的快速纯化方法。将Strepto coccus cremoris wg2一2和Streptococcus lactis MG1216在含酵母膏和DL一苏氨酸的培养基中分别在25℃和20℃培养24小时,然后离心收集细胞,加人溶菌酶和Mutanolysin溶液以除外壳。再加入Tris-HC1蔗糖溶液混均,培养于37℃经3.5分钟,将制备物冷却,     

制作活体草属虫临时装片的技巧

现介绍一种制作活体草履虫临时装片的技巧。１）用胶头吸管（长８０ｍｍ）吸取密度适当的草属虫液,将其１／４滴滴到载片中央,盖上盖片。２）取一张棱形的滤纸（对角线１．５ｃｍ长左右）用它的一个角尖触在盖片的一边,吸去多余的水分,稍候,再改用其另一个角尖继续吸,这样重复吸２～３次,即可将此装片用于实验观察,且效果十分理想。本方法优点：制片快。片中草履虫不易丢失;观察清楚,生动;制片成功率１００％;制片方法简便易行。制作活体草属虫临时装片的技巧@黄丽清$北京市日坛中学!100020     

花背蟾蜍的染色体组型及核仁形成区硝酸银特异性染色

花背蟾蜍隶属于蟾蜍科 (Bufonidae) ,蟾蜍属(Bufo) ,是常见种之一 ,在安徽及以北各省均有分布。本文研究其染色体组型和 Ag- NORs,以期了解该物种的细胞遗传学特征 ,以及对整个蟾蜍属的分类、进化提供一些资料。1　材料和方法花背蟾蜍 (4♀ 2♂ )取自安徽淮北市郊。　　实验时按 1～ 3mg秋水仙素 / kg体重 ,肌肉注射0 .0 1%秋水仙素 ,8～ 12 h后处死动物取大腿骨。用0 .6 5% Na Cl冲洗骨髓细胞于离心管 ,10 0 0 r/ min离心10 min,弃上清液 ,加 8ml 0 .4 % KCl,混匀 ,于室温下低渗 30 min加 8滴固定液 (甲醇∶冰乙醇 =3∶ 1) ,轻轻打匀 ,…