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本文研究了由嗜肺军团杆菌的巨噬细胞感染性增效子(mip)基因设计的一对引物,用PCR扩增嗜肺军团杆菌3、5、7、8血清型的4个标准菌株的特异DNA序列,研究了用该引物扩增BAL液中嗜肺军团菌特异DNA序列的方法、灵敏度及特异性。结果表明:用上述引物扩增嗜肺军团菌4个标准菌株的DNA,均可得到207bp的特异扩增产物,BAL液中的军团菌经离心及裂解液裂解后,可直接进行DNA扩增,当BAL与液中军团菌量为2×103CFU/ml时,即可检测出特异扩增带(电泳法),除军团菌外,其它受试细菌均无此特异性扩增,用本法对42例临床非典型肺炎患者的BAL液进行嗜肺军团菌的检测,在42份嗜肺军团菌培养均为阴性的BAL液中,其中一例PCR检测军团菌为阳性。本研究提示:用PCR检测BAL液中的军团菌是可行的,并有快速、灵敏、特异之忧点。 相似文献
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RAPD在植物育种上的应用及其技术校正 总被引:1,自引:0,他引:1
RAPD(RandomAmplifiedPolymorphicDNA) ,是在PCR的基础上发展起来的一种DNA多态性检测技术 ,由Willams[1] 和Welsh[2 ] 于 1990年建立 ,原理是以一系列不同的 ,少数碱基组成的随机核甘酸序列为引物 ,对样本基因组DNA进行PCR扩增 ,每个RAPD片段的产生要求在可增范围内存在与引物匹配的反向互补序列。引物结合位点DNA序列的改变以及两扩增位点之间碱基的缺失插入或转换都能导致扩增片段的数目和长度的差异 ,经PAGE或琼脂糖凝胶电泳分离和EB染色来检测DNA片段的多态… 相似文献
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AFLP分子标记及其在植物育种上的应用 总被引:64,自引:0,他引:64
扩增酶切片段多态性(AmplifiedRstricitonfragmentpolymorphism,简称AFLP)是由Zabeau等1992年发明的一项新的DNA指纹技术,它结合了RFLP和PCR技术的特点,具有RFLP技术的可靠性和PCR技术高效性,其基本原理是对基因组DNA酶切片段的选择性扩增,AFLP扩增片段的谱带数取决于采用的内切酶及引物3′端选择碱基的种类数目和所研究基因组的复杂性,实验 相似文献
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PCR——四步两段扩增法分离人碱性成纤维细胞生长因子(hbFGF)基因 总被引:2,自引:0,他引:2
引物是决定PCR结果的关键,本实验中,引物Ⅰ,Ⅱ虽有26个碱基,但由于其5′端有8个碱基为限制性内切酶的识别序列,所以实际上只有18个碱基与原始模板互补配对,采用标准的PCR方法时不能产生理想结果,经采用PCR-四步两段扩增法从人胎盘cDNA文库中分离得到了-484bp的DNA片段。通过斑点杂交鉴定,结果表明该DNA片段为hbFGF基因。 相似文献
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多重PCR法检测对皮下和造血器官坏死杆状病毒 总被引:1,自引:0,他引:1
根据对虾皮下和造血坏死杆状病毒(HHNBV)HHNBV-XIA靶基因序列设计了4个多重PCR法用引物(P1、P2、P3、P4)。采用了五种引物组合形式分别对HHNBV-XIA、HHNBV基因和PRDV-JAPAN片段进行了物异扩增,建立了多重PCR检测HHNBV方法。通过优化多重PCR法检测HHNBV条件,可从阳性感染的中国对虾fg级DNA中定性检测出皮下和造血器官坏死杆状病毒。 相似文献
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介绍了一种从人血清中同步扩增和检测HBV-DNA和HCV-RNA的方法。HCV-RNA反转录成cDNA,这种cDNA和从HBV中抽提出的DNA一起,用根据HBV、HCV保守区序列设计的特异引物进行同步PCR扩增,这种方法对于检测HBV和HCV重复感染很有用处 相似文献
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黑麦染色体的显微分离与PCR扩增 总被引:13,自引:0,他引:13
利用改良的染色体显微分离技术,分离了黑麦(SecalecerealeL.)一个完整细胞的18条染色体(14A+4B),用人工合成的寡核苷酸为引物,进行单一引物法(singleuniqueprimerPCR,SUPPCR)扩增,经Southern杂交证明,PCR扩增产物与黑麦基因组DNA同源。 相似文献
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本文发展了PCR克隆和亚克隆技术制备DNA测序模板。首先,我们用pUC/M13系列质粒的通用正反向引物PCR扩增出质粒pBluescriptKSDNA的多克隆位点及其侧翼序列,用EcoRV和XhoI消化成为左右两个引物多克隆臂,与粘虫核型多角体病毒(LsNPV)的EcoRV和XhoI约400bp和500bp片段分别连接,经PCR扩增,得到两端具有上述正反向引物结合位点的测序模板,用ddNTP链终止法/PCR扩增/银染色,从片段两端测定了全部919bp序列,这种ddNTP/PCR/银染测序法简化了操作,大大缩短了测序模板的制备时间,易于实现自动化操作。 相似文献
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噬菌体6肽随机表面表达文库的构建 总被引:1,自引:0,他引:1
体外合成编码6肽的随机DNA片段以及用于随机DNA片段扩增了一对PCR引物,再经PCR扩增,BgII酶切扩增产物,获得编码6肽的随机DNA克隆片段,并利用已构建的噬菌体表面表达载体,经抗性和插入复活筛选,获得1.6×10^8个独立克隆,构成库的克隆经酶切,PCR扩增,斑点杂交,序列测定,亲和素富集等方法的综合鉴定和评定,以及6肽随机克隆体外增殖和表达特性观察,结果均表明,我们成功构建了编码6肽的 相似文献
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PCR和生物素探针对HFRSV的检测和分型的探讨 总被引:2,自引:0,他引:2
分析比较肾综合征出血热病毒(HFRSV)76/118株和R_(22)株的核苷酸序列,根据引物设计原则及检测分型的目的,设计并合成了3对引物。1对引物取于两毒株间的高同源区段,作为共同引物和外引物;另两对引物取于两毒株间的低同源区段,分别作为野鼠型引物、家鼠型引物和内引物。建立了DNA聚合酶链反应(PCR)和NestPCR方法,并用NcstPCR合成了两种型特异的生物素探针。PCR检测76/118、A_9、陈、R_2、R_225个毒株,用外引物时均扩增出1条约300bp的条带;用内引物的野鼠型引物时,除R_(22)株之外,其余4株均扩增出1条约70bp的条带。斑点杂交试验证实了PCR检测分型的准确性。NestPCR和生物素探针斑点杂交试验可以测出1-10bg的目的cDNA。 相似文献
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PCR产物的RFLP分析在黄芪亚族(豆科)系统学研究中的应用初探 总被引:12,自引:1,他引:11
用聚合酶链式反应(PCR)将豆科黄芪亚族7属9种及甘草亚族1属1种植物叶绿体基因组中ndhF和psbA基因中一段约3.1kb的DNA扩增出来,并摸索出一最佳的PCR条件,使得此条带得以特异性扩增,可直接用于限制性内切酶水解。通过对此扩增片段的限制性片段长度多态性(RFLP)的初步分析,认为利用PCR扩增出的DNA进行RFLP分析来探讨植物的系统进化问题在中国现行条件下大有潜力,其方法简单易行,结果 相似文献
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采用加玻璃珠混合振荡1800r/min15分钟并95℃水浴加热10~20分钟的物理破壁方法由真菌菌丝直接提取DNA用于PCR扩增,具有所提DNA可扩增性好、提取方法简便易行、便宜等优点。相同引物或不同引物的二次扩增产物均好于一次扩增,且以引物B1和B3扩增后再用引物Fg1和Fg2扩增的效果最好。此法可广泛应用于大量样品的PCR和RAPD扩增实验。 相似文献
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一种提取果树叶片DNA的简便方法 总被引:10,自引:5,他引:10
植物DNA的提取是分子遗传学及遗传工程的根本前提。通常DNA提取方法应满足以下几个主要条件:(1)所得DNA具备理想的纯度,如RFLP技术对DNA纯度要求高,因为纯度高的DNA便于酶切及膜转移等操作,而对于涉及PCR扩增的技术,DNA提取则尤为注意样... 相似文献
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用PCR法直接快速筛查重组阳性克隆 总被引:2,自引:0,他引:2
应用PCR法快速筛查插入有苯丙氨酸脱氨酶cDNA重组阳性克隆。方法:用于PCR扩增的引物是位于载体pET23b启动子处的T7启动子引物和位于目的基因PALcDNA3’端终止密码TAA处的引物。以灭菌吸头挑一单菌落加入PCR体系扩增。结果:在筛查的3个克隆中,有2个阳性克降,并且插入方向正确,经DNA序列测定得到进一步证实。结论:以PCR方法筛查重组阳性克隆,可以简便快速鉴定插入片段的大小和方面,不 相似文献
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聚合酶链反应(PCR)技术用于沙门菌检测发展迅速,本文就:①沙门菌检测中的引物设计;②沙门菌DNA提取方法;③检测沙门菌的PCR方法;④PCR扩增产物的检测;⑤各种PCR方法检测沙门菌的特异性、敏感性及注意事项等方面简述该技术在沙门菌检测中的应用进展。 相似文献
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RAPD技术及其在微生物学方面的应用 总被引:4,自引:0,他引:4
198 0年 ,Botsein提出DNA限制性片段长度多态性 (RFLP)可以作为遗传标记 ,从此开创了直接应用DNA多态的新阶段。 80年代后 ,DNA多聚酶链式反应 (PCR)的发展 ,使直接扩增DNA的多态性成为可能 ,并在此基础上产生了许多种新型分子标记 ,诸如扩增片段多态性 (ALFR)、串联重复序列(VNTR)、单链构型多态性 (PCR SSCP)、序列特异扩增区域 (SCAR)、随机扩增多态性DNA(RAPD)等。而RAPD是较为突出的一种。RAPD是由Williams和Welsh在 1 990年各自独立发现的一种DNA多态检… 相似文献
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人源中和性抗汉滩病毒单克隆抗体Fab段基因的获得和表达 总被引:15,自引:5,他引:10
运用噬菌体表面表达技术,获得人源和中性抗滩滩病毒汉滩型G1基因工程单克隆抗体Fab段基因及其表达,并同时获得抗汉滩病毒核蛋白的Fab抗体。从能综合征出血热疫区恢复期病人抗凝血中分离到的外周淋巴细胞中,提取了部细胞RNA。通过RT-PCR方法,用一组人IgG Fab基因特异性引物,从合成了cDNA中经PCR扩增了一组轻链和重链Fab段基因,将轻链和重链先后插入噬菌体载体pComb3,dnalf vf 相似文献
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本文发展了PCR克隆和亚克隆技术制备DNA测序模板。首先,我们用pUC/M13系列质粒的通用正反向引物PCR扩增出质粒pBluescriptKS DNA的多克隆位点及其侧冀序列,用EcoRV和XhoI消化成为左右两个引物多克隆臂,与粘虫核多角体病毒(LsNPV)的EooRV和XhoI约400bp和500bp片段分别连接,经PCR扩增,得到两端具有上述正反向引物结合位点的测序模板,用ddNTP链终点 相似文献
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王汉中 《Virologica Sinica》1995,10(4):351-355
用NestedPCR检测牛白血病病毒的前病毒形式。从牛白血病病毒基因gp51上选择两对引物进行NestedPCR体外扩增,产物经2%agarose凝胶电泳和用生物素标记的探针鉴定,证实其特异性。结果表明该方法能从两个BAT-BLV细胞内检测出BLV的前病毒DNA形式。 相似文献