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非同位素PCR-单链构象多态性技术的建立和应用 总被引:2,自引:0,他引:2
PCR-单链构象多态性技术问世以来,成为研究基因突变的工具,特别是在分子肿瘤学研究中,广泛应用于癌基因,抑癌基因突变的研究,常规PCR-SSCP采用同位素标记PCR产物,测序板电泳分离突变,在操作和费用上有种种局限,文章建立了一种非同位素PCR-SSCP技术;通过不对称PCR获得单链,普通PAGE分离,经银染检出突变,用这种方法,还研究了四株鼻咽癌细胞株CNE1,CNE2,HK1和SUNE1中肿瘤 相似文献
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PCR—单链构象多态性分析对p53基因点突变检测的研究进展 总被引:1,自引:0,他引:1
周江 《国外医学:分子生物学分册》1996,18(1):11-15
单链构象多态性(SSCP)对分析基因的突变是一种有效的手段,并具有其独特的优点。PCR与SSCP结合后检测灵敏度更高,而在许多类型的肿瘤都存在有p53抑癌基因的突变,章综述了PCR-SSCP分析技术检测p53基因突变的进展。 相似文献
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应用PCR-SSCP快速鉴定结核分枝杆菌复合群 总被引:4,自引:0,他引:4
通过聚合酶链反应(PCR)-单链构象多态性(SSCP)技术分析结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌临床株的16SrDNA基因。60例临床标本中,20例为阳性,与传统方法比较无差异。其中分型:18例为结核分枝杆菌,2例为结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌双重感染。20例阴性标本中,PCR-SSCP又检查出5例阳性。20例对照标本中,3种传统方法与PCR-SSCP法均检测为阴性。全部试验3d报告结果。结核分枝杆菌复合群和卡介苗的图形相同以外,其它分枝杆菌的PCR-SSCP电泳图谱均有差异。所以,应用PCR-SSCP技术快速 相似文献
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本实验用人重组r-干扰素(rhu-IFN)作用HEP-2细胞后HLA-DR抗原和增殖细胞核抗原(PCNA)表达的检测来探讨r-干扰素对HEP-2细胞HLA-DR抗原表达诱导作用及体外抗增殖活性。用单克隆抗体CR3/43(抗HLA-DR)和Ki-67(抗PCNA)。以链霉素一生物素技术(LSAB)检测HEP-2细胞HLA-DR抗原和PCNA表达,结果显示:r-IEN诱导HLA-DR抗原和抑制PCNA表达其强弱与r-IFN剂量有关。资料提示:r-IFN不仅对HEP-2细胞有细胞毒作用,同时能调节其细胞膜特性,因而在喉癌的治疗中是有效的。 相似文献
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近几年,有关幽门螺杆菌(HP)基因分型方法及其应用的研究取得了很大进展。基因分型方法包括:质粒分型、限制性内切酶分型(REA)、核糖分型、染色体DNA脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型、多聚酶链反应限制性内切酶消化(PCR-RFLP)分型、任意引物PCR(AP-PCR)分型、PCR单链构型多态性(PCR-SSCP)分型和核苷酸序列分析等。基因分型方法广泛用于HP的研究,如基因图的构建、感染复发、耐药机 相似文献
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人PSP94全长cDNA的获得及PSP94-TNF~Δ融合蛋白的构建 总被引:2,自引:0,他引:2
利用RT-PCR从人肥大前列腺组织钓取94个氨基酸的人前列腺分泌蛋白(PSP94)全长cDNA,序列分析结果与文献报道的完全一致.将PSP94成熟肽与人TNFα衍生物(TNFΔ)通过Linker-SAPGTP在基因水平上融合成5′PSP94-TNFΔ,融合基因DNA序列分析结果与设计的相符合.5′PSP94-TNFΔ在大肠杆菌中表达产物分子量约为31kD,表达量约占菌体总蛋白量的35%.以L929细胞和人前列腺癌细胞株PC-3为靶细胞进行细胞毒分析结果表明,5′PSP94-TNFΔ融合蛋白既具有TNF的细胞毒活性,又具有对前列腺癌细胞PC-3的杀伤作用 相似文献
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P物质(SP)能神经元及其轴突末梢和受体广泛分布于很多心血管中枢。外侧下丘脑含SP能神经元,外侧下丘脑投射的升压区内又存在SP能纤维及SP受体;因此本工作检验SP在外侧下丘脑升压反应中的作用。实验显示:(1)L-谷氨酸(Glu)兴奋外侧下丘脑的穹窿周围区(LH/PF)或将SP分别注入各LH投射区:蓝斑(LC)、臂旁核(NPB)或中脑导水管周围灰质(PAG)均引起升压反应;(2)[D-Pro2,D-Phe7,D-Trp9]-SP(SP拮抗剂)预先注入LC或PAG可使Glu兴奋LH/PF引起的升压反应减小,而注入NPB对该反应无明显影响;(3)双侧延髓头端腹外侧区(RVL)分别用酚妥拉明、心得安或阿托品预处理也可明显削弱该反应。结合我们以往的实验结果:RVL内的α-、β-、M-受体介导LC升压反应,α-和β-受体介导PAG-升压反应;本工作显示LH/PF可通过其SP能投射纤维作用于LC-RVL和PAG-RVL升压系统而实现其升压反应。 相似文献
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PCR—SSCP检测肺癌细胞p53基因点突变 总被引:2,自引:0,他引:2
应用溴化乙锭(EB)染色的PCR-SSCP技术对10例非小细胞性肺癌组织标本p53基因外显子5 ̄8进行分析,其中1例在外显子5 ̄6;1例在外显子7;2例在外显子8发现异常电泳带。对1例经SSCP检测异常的p53基因进行核酸序列分析,发现第280位密码子ACA,其编码的氨基酸由丝氨酸变成半胱氨酸。结果证实:非小细胞性肺癌与p53基因突变有关;EB法PCR-SSCP技术是一种简便、可靠的点突变检测法。 相似文献
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用免疫组化技术和PCR-SSCP技术对高、中、低分化大肠腺癌、癌旁粘膜、正常粘膜及大肠腺癌型息肉的P21、P53蛋白表达和k-ras基因、P53基因突变进行检测。结果,大肠腺癌P21、P53蛋白表达比大肠腺瘤增多,但增加不显著(P〉0.05),二组均比癌旁粘膜和正常粘膜P21、P53蛋白表达阳性率高(P〈0.01),大肠腺癌k-ras基因和P53基因突变率比大肠腺瘤、癌旁粘膜和正常粘膜组显著增加 相似文献
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中国苋属nrDNA的ITS序列分析及其系统学意义 总被引:11,自引:0,他引:11
运用PCR直接测序法,对苋属(Amaranrhus L.)15个种及外类群鸡冠花(Celosia cristata L.)nrDNA的ITS区(包括ITS-1,5.85rDNA和ITS-2)进行序列测定。结果表明苋属植物的ITS序列总长度为629-632bp,长度变异仅发生在ITS-1区(250-253bp)。采用PAUP软件进行系统发育分析表明:分布于中国的苋属植物可分为3组,即刺苋组(secg 相似文献
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PCR-SSCP技术在基因点突变检测中的几种策略王吉伟,罗赛群(湖南医科大学分子生物学研究中心,长沙410078)关键词PCR-SSCP,点突变检测基因点突变的检测对于分子种群生物学的研究、遗传性疾病预测及分子水平的临床诊断等颇具实用价值。在众多的测... 相似文献
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中国北方人苯丙氨酸羟化酶基因外显子7内新突变的鉴定 总被引:12,自引:0,他引:12
应用PCR-单链构象多态性分析及DNA直接测序,对45例中国北方苯丙酮尿症(PKU)患者苯丙氨酸羟化酶(PAH)基因外显子7内突变进行了鉴定。共检出6种错义突变及一种静止突变:R243Q.R41H,G247V.L249H.P254I.G257V和V245V。经与国际PAH基因突变数据库比较,确认G257V.P254I和L249H为国际上首次发现的突变。结果揭示,中国人与其他种族及中国北方与南方人群PAH突变特点不同。明确了中国北方人群中PAH基因外显子7基因突变分布,有助于提高PKU的基因诊断率,对基因的起源、进化研究有参考价值 相似文献
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应用PCR—SSCP快速鉴定结构分枝杆菌复合群 总被引:12,自引:0,他引:12
通过聚合酶链反应(PCR)-单链的权象多态性(SSCP)技术分析结构分枝杆菌和非结构分枝杆菌临床株的16S rDNA基因。60例临床标本中,20例为阳性,与传统方法比较无差异。其中分型:18例为结核支杆菌,2例为结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌双重感染。20例阴性标本中,PCR-SSCP又检查出5例阳性。20例对照标本中,3种传统方法与PCR-SSCP法均检测为阴性。全部试验3d执行结果。结核分枝杆菌 相似文献
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球形幽门螺杆菌分子生物学研究 总被引:5,自引:1,他引:4
为研究幽门螺杆菌(HP)球形变异本质,作者通过延期培养和采用亚抑菌浓度抗生素,使3株HP发生球形变异,对弯曲形和球形HP作了SDS-PAGE、免疫印迹及4个毒力基因片段PCR和PCR-SSCP分析。SDS-PAGE图谱显示球形HP分子量在74×104以上的蛋白含量减少,免疫印迹显示球形HP125×104蛋白条带反应减弱,而抗生素诱变的球形HP分子量为11×104和63×104的蛋白条带反应增强。PCR及PCR-SSCP结果表明球形HP的hpaA,VacA,CagA和UreA4个毒力基因片段未发生缺失,但在hpaA或VacA基因中存在点突变 相似文献
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p53基因突变几乎存在于所有人类肿瘤中,尤其与严重危害妇女健康的恶性肿瘤──乳腺癌关系密切。研究表明:野生型p53基因是抑癌基因,而突变型p53基因则是癌基因──呈显性负调控突变型。本研究首次构建了这种类型的172HIS突变型p53基因的转基因鼠,用以研究p53基因突变与乳腺癌发生的关系。用重组PCR法把小鼠p53基因的第172个密码子CGC突变成CAC(由编码精氨酸突变为编码组氨酸),得到172HIS突变型p53基固。将其插入到大鼠乳清酸性蛋白(WAP)启动子与SV40poly(A)信号序列之间。获得置于载体pBL119(Fig.1)上的表达结构WAP-172HISmtp53-SV40。经过BssHII酶切,纯化该表达结构部分。通过显微注射,将其分别导入FVB和C57BL品系小鼠受精卵中,获得32只F0代鼠。经PCR鉴定,其中9只为转基因阳性鼠(Fig.2)。对其进行的Southern分析(Fig.3)证实了PCR的鉴定,并得出了每只鼠中整合的转基因拷贝数(Table1)。当这9只鼠哺乳第二天时,取乳腺制备RNA,进行Northern杂交分析,其中5只的乳腺中有转基因表达,其中3只呈较高水平表达(Fig. 相似文献
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硒对培养人胚肝细胞Ⅲ型前胶原,羟脯氨酸合成的影响 总被引:7,自引:0,他引:7
原代培养人胚肝细胞经1.156×10 ̄(-7)mol/L硒预处理4h,加入20mmol/L四氟化碳作用20h,观察硒对其Ⅲ型前胶原(PCⅢ)和羟脯氨酸(Hyp)生成的影响。结果培养液中PCⅢ水平、细胞内Hyp含量及细胞内外丙二醛(MDA)水平均降低,与未加硒对照组比较差别有显著性(P<0.01)。而硒谷腕甘肽过氧化物酶(Se-GSH-PX)活性则较对照组显著增高(P<0.001),且PCⅢ水平与Se-GSH-P_X/MDA比值呈负相关(r=-0.9156,P<0.01)。提示硒可提高Se-GSH-P_X/MDA比值,抑制脂质过氧化激发的肝细胞胶原合成。 相似文献
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人Mn—SOD cDNA的克隆及高效表达 总被引:13,自引:0,他引:13
用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),以人肝细胞株(L02)总RNA为模板,扩增了人锰超氧化物歧化酶(hMn-SOD)的cDNA。重组到T7启动子控制下的表达载体pET-24a(+)中,构建表爱质粒pET-MnSOD,并转化大肠杆菌BL21(DE3)。SDS-PAGE及蛋白质印迹分析表明,经1mmol/L异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导后,可高效表达一分子量为22kD的蛋白质,与抗人 相似文献
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EB病毒(EBV)是一种与地区性伯基特氏淋巴瘤、鼻咽癌、何杰金氏病等多种人体肿瘤有关的疱疹病毒.已往的研究表明,潜伏膜蛋白(LMP)基因是EBV最可能的致瘤基因.为制备LMP基因转基因小鼠,探讨LMP的体内致瘤作用,首先构建了含鼠金属硫蛋白-1(MT-1)基因调控区和LMP基因编码区的pBR322-MT-LMP质粒,并用电击法将该质粒与pKJ1-Neo质粒共转染人胃癌细胞株MGC,对MT-LMP基因在转染细胞中的整合、转录情况及重金属镉和镍对该融合基因的转录调控进行了研究.结果表明:(1)两质粒共转染效率为86.7%;(2)PCR和Southern杂交分析显示,完整的MT-LMP基因已整合入转染的MGC细胞基因组,且在不同的转染细胞克隆中,MT-LMP基因整合的方式及拷贝数不同,拷贝数从1到19不等;(3)RT-PCR和Northern杂交分析证实,MT-LMP基因不仅在转染的MGC中能够转录,而且在10μmol/L镉诱导下,MT-LMP基因转录增强,平均增高约1.4倍.结果说明,在MT-1基因调控区指导下,LMP基因不但有mRNA水平的表达,而且其表达受重金属镉的调控,上述结果为制备MT-LMP转基因小鼠 相似文献