一株地衣芽孢杆菌产凝乳酶酶学性质研究

目的：对地衣芽孢杆菌所产凝乳酶的酶学特性进行研究。方法：在不同的温度、pH值、底物浓度、不同金属离子等条件下测定地衣芽孢杆菌产凝乳酶相对酶活力。结果：地衣芽孢杆菌所产凝乳酶最适凝乳温度为70℃;40℃以上热处理后凝乳活性有不同程度的损失,75℃热处理10min后凝乳酶活性丧失;pH值为5～8时凝乳活性随乳pH值的降低而增强,pH值为7时凝乳酶最稳定;Ca2+ 、Fe2+、Fe3+、Mn2+、Mg2+、Al3+对酶活性有一定的促进作用;Li2+、Na+、Cu2+、Zn2+对酶活性有抑制作用;底物浓度最适为250 g/L、Ca2+的最适浓度为0.014 g/L。     

金属螯合载体固定重组腈水解酶

以琼脂粉为基质制备金属螯合载体,并用于固定重组腈水解酶。研究发现:制备金属螯合载体最合适的金属离子为Zn2+。当Zn2+离子浓度0.3 mol/L、给酶量15.6 mg/g、固定化pH 8.0、固定化温度40℃时,制得的固定化酶活性最高。固定化酶最适反应温度为50℃、最适反应pH为7.0。当扁桃腈浓度为10 mmol/L、反应1 h时,固定化酶最大产率为0.041 mmol/(g·h);在反应12 h时,产物e.e.值可达到99%以上。固定化酶重复使用8次以后,酶活力仍保持在45%。     

螺旋藻乙醇酸氧化酶(GO)的研究

采用比色法对鄂尔多斯高原碱湖的钝顶螺旋藻(S1)与国外引进的钝顶螺旋藻(S2)和极大螺旋藻(S3)的乙醇酸氧化酶(GO)进行了比较研究。结果表明:在25℃、pH 8.0条件下,S1、S2和S3的GO活性分别为70.9 U/gFW、59.6 U/gFW和80.9 U/gFW;最适温度均为30℃;在0℃~35℃(30℃)范围内比较稳定;最适pH值分别为8.6、8.2和8.4;pH值稳定范围,S1为7.6~10.0、S2为8.0~9.0;S3为8.0~8.6。S1的GO对温度和pH适应范围最宽,且在低温、高温、强酸和强碱下的活性均比引进种的高。     

水稻幼苗根细胞质膜和液泡膜微囊Ca^2＋－ATP酶的特性

水稻幼苗根质膜和液泡膜Ca2+-ATP酶对ATP的Km值分别为7.1和4.5 μ mol·L-1;反应的最适pH分别为8.0和7.0.两者活性均受Na3VO4和曙红B(EB)抑制;CPZ抑制质膜Ca2+-ATP酶活性,但促进液泡膜Ca2+-ATP酶活性.30mmol·L-1CaCl2浸种和CaCl2浸种结合低温锻炼预处理,均可提高此酶的活性和冷稳定性.     

一组厌氧真菌菌系产阿魏酸酯酶的初步研究

利用玉米秸秆粉为唯一碳源的筛选培养基,从肉牛瘤胃液中筛选构建了一组厌氧真菌菌系,研究了该菌系产阿魏酸酯酶的特征.阿魏酸酯酶的最适pH为8.0,最适温度为40℃,最高酶活力为19.1 mU/mL,在pH 6.0 ～8.0及35～45℃之间,酶活性保持相对稳定.Mg2+对酶活力具有激活作用,Fe2、Cu2+、Fe3+等均抑制酶活力.     

基因工程菌1020的培养优化及木聚糖酶部分特性研究

对基因工程菌1020培养基成分及培养条件进行了优化。结果表明,Mg2+、Mn2+、Zn2+三种金属离子可促进发酵产木聚糖酶。180 r.m in-1的摇床转速可满足70 mL/500 mL装液量的溶氧需求。最适培养温度为30℃,pH值为7.0。优化后的酶活为优化前的2.09倍。全细胞木聚糖酶的酶学性质表明该酶有两个最适pH值,分别为7.0与9.0。金属离子Ca2+,Fe3+,Fe2+对酶活有促进作用。pH7.0时Km为36.7095 mmol.L-1,Vm为0.3829 mmol.L-1.m in-1;pH9.0时Km29.9945mmol.L-1,Vm 0.2165 mmol.L-1.m in-1。     

桂林小花苣苔离体快速繁殖技术

对抗结核植物桂林小花苣苔(Chiritopsis repanda var. guilinensis)进行离体培养与快速繁殖技术研究。结果表明: 桂林小花苣苔叶片外植体的最适初代诱导培养基为MS+0.5 mg·L^–16-BA+0.05 mg·L^–1IBA, pH8.0; 最适继代增殖培养基为 MS+0.1 mg·L^–16-BA+0.05 mg·L^–1IBA, pH6.0, 繁殖系数7.0/35天; 最适生根培养基为1/2MS+0.2 mg·L^–1NAA, pH6.0, 生根率为93.6%。模拟桂林小花苣苔自然生境, 在春季对生根试管苗进行大棚移栽, 成活率达90%。根据上述快繁技术, 理论上每株试管苗每年可繁殖桂林小花苣苔种苗46万株。     

对植物矿质营养两个概念的思考

1 生理酸性盐和生理碱性盐理论植物矿质营养盐的生理酸性和生理碱性理论是1881年由A. Mayer提出的,至今已有110年的历史了。这期间矿质营养理论有了长足的进步。因此有必要在新的研究成果的基础上,更深入地了解这一理论。 1.1 根诱生的根际pH变化是怎样发生的植物根际土壤pH变化是由根系活动产生的,原因主要有三个:(1)根排泌H~+或HCO_3~-(OH~-当量);(2)根释放CO_2;(3)根的分泌物(有机酸、氨基酸)。后两种情况不是主要原因,因为在通气的土壤中,CO_2通过充气孔隙迅速扩散掉,而且HCO_3~-仅局限于土壤     

枯草芽孢杆菌ZC-7中性蛋白酶的分离纯化及酶学性质研究

枯草芽孢杆菌ZC-7的发酵液,经离心分离得到粗酶液,再经硫酸铵盐析、中空纤维膜除盐浓缩、DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析、Sephadex G-75柱层析等步骤获得电泳纯的中性蛋白酶。SDS-PAGE测得其分子量大约为42KDa。以酪蛋白为底物时,该酶的Km为5×10-3,Vmax为2.5×104ug/min,酶的最适作用pH为7.0,最适反应温度为55℃,在pH6.5～8.0, 40℃以下较稳定,对1mol/L H2O2具有一定的耐受性。EDTA、异丙醇和乙醇对该酶有抑制作用,Ca2+、Mg2+和Li+离子对其具有保护作用。     

樟子松外生菌根中NADP-依赖型异柠檬酸脱氢酶的酶学性质研究

对褐环乳牛肝菌-樟子松菌根组织、樟子松根组织及褐环乳牛肝菌纯培养菌丝的异柠檬酸脱氢酶(isocitrate dehydrogenase,IDH)进行纯化和酶学性质鉴定。通过硫酸铵分级沉淀及葡聚糖凝胶层析纯化后的IDH进行SDS-PAGE电泳检测,并进行3种来源酶的酶学性质鉴定。菌根组织、根组织及真菌纯培养菌丝NADP-IDH对NADP+的Km值分别为10.7μmol/L、11.4μmol/L和22.1μmol/L;对异柠檬酸的Km值分别为71.7μmol/L、79.3μmol/L和87.8μmol/L。最适p H分别为8.2、8.0和7.5,略偏碱性。菌根IDH和根IDH的最适反应温度为45℃,真菌IDH的最适反应温度为42℃。3种IDH的活性依赖于不同的二价金属阳离子的存在,Mn2+、Mg2+存在时酶活性最强,Ca2+、Co2+、Cu2+和Zn2+对酶的活性有较强抑制作用。菌根真菌与樟子松形成外生菌根之后异柠檬酸脱氢酶的蛋白含量及酶活力都得到了提高。     

Zwittermicin A的分离纯化及其稳定性的初步研究

通过离子交换法,用D113树脂对苏云金芽孢杆菌库斯塔克亚种D1-23发酵液进行初步提纯,经HPLC-MS纯化和制备,得到2.89mg Zwittermicin A纯品。离子交换第1次冲洗液NH4H2PO4的最适浓度为5mmol/L;第2次冲洗液CH3COONH4的最适浓度为30mmol/L,梯度冲洗pH值为8.0～9.5;Zwittermicin A的总收得率达93%。Zwittermicin A的热稳定性和pH值稳定性实验表明,Zwittermicin A在100℃下的半衰期为48.22min;在pH值3.0～12.0范围内pH值越低,Zwittermicin A的稳定性越强。     

产低温纤维素酶放线菌的筛选、鉴定及酶学性质初步研究

从青藏高原采集的牦牛粪中,经过CMC平板分离得到一株产低温纤维素酶能力较强的放菌Tibet-YD5227-2,经16S rDNA序列比对分析将其初步鉴定为链霉菌属(Streptomyces sp.),目前尚无链霉菌产低温纤维素酶的研究报道。Tibet-YD5227-2液体摇瓶培养产生低温CMC酶活力高达145U/mL,最适产酶温度25℃,最适产酶pH值为8.0。酶学性质初步研究显示,Tibet-YD5227-2产生的CMC酶反应温度以35℃左右为适,反应的pH值以8.0左右为适,该菌株所产的纤维素酶在中碱性条件具有较强的稳定性;K+、Fe2+、Mg2+对酶反应有促进作用,Hg2+、Cu2+对酶反应有抑制作用。     

3-氰基吡啶水合酶的反应条件及影响因子

研究了芳腈水合酶催化水合3-氰基吡啶生成尼克酰胺的反应条件及影响因子.酶反应的最适pH为8.0,最适温度为25℃.酶在pH8.5于25℃保温4小时或在25—30℃于pH8.0保温3小时是稳定的.反应液中加入Fe~(3+)(1.5 mmol/L)可使酶活力增加 50%,而加入NH_4~+(300 mmol/L)则使酶活降低了67%.Ag~+和 Hg(2+)”强烈地抑制酶反应活性,在浓度均为 5mmol/L时,抑制率分别为99.7%和100%.NaCN(50 mmol/L)和苯甲腈(100 mmol/L)对酶活性的抑制率分别为78%和85%.该酶作用于 3-氰基吡啶的Km为62.5 mmol/L,V_(max)为85.8 μmol·min~(-1)·mg~(-1).     

测定根系溢泌H~+(HCO_3~-)的原位显色方法

植物在生长过程中通过溢泌质子和有机物质而引起根周围介质酸碱度的变化。本方法是利用pH指示剂在不同酸碱条件下变色的特点,测试根系溢泌H~+(HCO_3~-)引起的介质pH值的变化。指示剂为溴甲酚紫,变色范围为pH5.2～6.8,黄色～紫色,加入到琼脂溶胶中组成琼脂—指示剂,既可直接用作植物根系的生长介质,也可作用于生长着根系的土壤上,显示出根际土壤的pH变化。     

低浓度微囊藻毒素MC-LR对梭鱼草幼苗根系NH_4~+和H_2PO_4~-吸收特性的影响

运用营养液培养法和常规耗竭法,对低浓度(2和10μg·L~(-1))微囊藻毒素MC-LR分别处理6和12 d后梭鱼草(Pontederia cordata Linn.)幼苗根系对不同浓度NH_4~+(0.05~1.50 mmol·L~(-1))和H_2PO_4~-(0.01~0.50mmol·L~(-1))的吸收速率和吸收动力学参数的变化进行了研究。结果显示:随培养液中NH_4~+和H_2PO_4~-浓度的提高,各处理组幼苗根系的NH_4~+和H_2PO_4~-吸收速率均逐渐增大,但增幅则因MC-LR处理浓度和处理时间而异。经2和10μg·L~(-1)MC-LR短期(6 d)处理后,幼苗根系的NH_4~+和H_2PO_4~-吸收速率总体上均显著高于CK(对照,0μg·L~(-1)MC-LR)组;经长期(12 d)处理后,2μg·L~(-1)MC-LR处理组幼苗根系的H_2PO_4~-和较高浓度NH_4~+吸收速率均显著高于CK组,而10μg·L~(-1)MC-LR处理组幼苗根系的NH_4~+吸收速率降低,但其较高浓度H_2PO_4~-吸收速率仍显著高于CK组。梭鱼草幼苗根系的NH_4~+和H_2PO_4~-吸收速率与底物浓度的函数关系均符合双倒数曲线,拟合关系均在α=0.001水平上显著,但最大吸收速率(V_(max))和表观米氏常数(K_m)变化规律不同。经2和10μg·L~(-1)MC-LR处理6和12 d后,幼苗根系NH_4~+吸收的V_(max)和K_m值均高于CK组;经2μg·L~(-1)MC-LR处理6和12 d后,幼苗根系H_2PO_4~-吸收的V_(max)值高于CK组、K_m值低于CK组;经10μg·L~(-1)MC-LR处理6 d后幼苗根系H_2PO_4~-吸收的V_(max)值高于CK组、K_m值与CK组无差异,但经10μg·L~(-1)MC-LR处理12 d后幼苗根系H_2PO_4~-吸收的V_(max)值略高于CK组、K_m值明显高于CK组。说明随处理时间延长,经2μg·L~(-1)MC-LR处理后幼苗根系的NH_4~+吸收潜力提高、NH_4~+亲和力略有降低,而H_2PO_4~-吸收潜力略有降低、H_2PO_4~-亲和力略有提高;经10μg·L~(-1)MC-LR处理后幼苗根系的NH_4~+吸收潜力略有提高、NH_4~+亲和力降低,而H_2PO_4~-吸收潜力和亲和力均降低。综合分析结果表明:2和10μg·L~(-1)MC-LR处理均能够提升梭鱼草幼苗根系的NH_4~+和H_2PO_4~-吸收潜力,其中,2μg·L~(-1)MC-LR处理对其根系的NH_4~+和H_2PO_4~-吸收均具有明显的促进作用,而10μg·L~(-1)MC-LR短期处理对其根系的NH_4~+和H_2PO_4~-吸收也具有一定的促进作用。     

高温放线菌莱斯氏属RHA1菌株产低分子量α-淀粉酶的初步研究

嗜热放线菌莱斯氏属RHA1菌株发酵液经过(NH4)2SO4(饱和度为60％)沉淀后,经过分子筛层析纯化获得一种低分子量α-淀粉酶,分子量为11.2 kD.对此酶研究表明,其pH值范围为4.5 -11.5,在pH值为5.5 -6.5之间酶活性较高,最大酶活性的pH值为6.0;此酶在缺乏Ca2+时,最适温度为55 - 60℃,当加入Ca2+后,相对最适温度上升至65℃;然而EDTA(10 mmol/L)可使此酶的酶活性降低98％,同样在Ni2+、Ag2+和Fe2+条件下酶活性也受到干扰;此α-淀粉酶具有淀粉内切酶活性,水解直链淀粉和支链淀粉的主要产物为小分子低聚糖(D2 - D3).     

NaCl胁迫下硝酸盐对大麦幼苗根系Cl~-吸收的调节(简报)

在含20mmolL~(-1) 的 NaCl溶液中,当加入的NO_3~-浓度由0增加到10mmol L~(-1)时,两个耐盐性不同的大麦品种幼苗根系Cl~-吸收速率呈明显降低趋势。NO_3~-是Cl~- 吸收的竞争性抑制剂。在含200mmol L~(-1)NaCl的1/2 Hoagland培养液中,加入7.5～37.5mmolL~(-1)NO_3~-时,根系及地上部Cl~-含量降低,植株干物质积累增加.NO_3~-缓解盐胁迫的适宜浓度范围为[NO_3~-]/[Cl~-]=1/5～1/26。     

烟草头孢霉汞还原酶特性的研究

经检测,抗汞真菌烟草头孢霉(Cephalosporium tabacinum)F2菌株中具有汞五原酶活性。该酶是一种胞内酶,需NADH作为电子供体,催化Hg2+还原成为元素汞(Hgo)。该酶促反应还需硫氢基化合物,反应最适温度为30℃,最适pH范围为7．0-8.0。在25—30℃保温40分钟或在pH7．0保温2小时,酶活力均是稳定的。金属离子Ag+,Co2+,Cu2+,Zn2+,Mn2+和Ni2+在浓变为0．2-1．0mmol／L的范围内,对酶活力有不同程度的抑制作用,一定浓度的乙酸苯汞和铁氰化钾对酶活力也有部分抑制作用。     

盐碱胁迫下不同燕麦品种钠、钾、钙流量测定分析

Na+/K+比值是衡量作物耐盐碱性的一个重要指标,Ca2+能够传递盐碱胁迫信号,开启作物体内一系列的级联反应来抵抗盐碱胁迫。为分析来自不同种植区燕麦主栽品种的耐盐碱性,本实验采用电感耦合等离子体质谱法对生长在两种pH盐碱土上4个裸燕麦栽培品种根、茎、叶中Na+、K+和Ca2+的含量进行测定,在优化的仪器条件下,Na+、K+和Ca2+的检出限分别为10.0 ng/L、8.0 ng/L和5.0 ng/L。检测结果显示,土壤pH为8.0时,燕麦各器官的Na+/K+比值是根茎叶,Ca2+含量是根茎叶60 ng/L;在土壤pH为8.8时,燕麦各器官的Na+/K+比值为茎根叶,Ca2+含量35 ng/L根茎叶;在高、低两种盐碱条件下,4个裸燕麦品种都能够维持叶片中Na+/K+比值最低,这是4个裸燕麦品种能够在盐碱条件下正常生长、具有较强耐盐性的原因之一。     

两株耐碱酵母的pH耐受实验观察

对分离鉴定的两株酵母菌用比浊法和Bradford法进行pH耐受范围检测。Trichosporon asahiiXJU-1的pH耐受范围为2.0~13.0,最适pH值为8.0。Rhodotorula mucilaginosaXJU-1的pH耐受范围为3.0~12.0,最适pH值为8.5。比浊法在pH4.0~10.0测出数值比较可靠,而在pH<4.0和pH≥10.0产生了较大误差。在最适pH时,Bradford法间接测定两酵母的生长量,T.asahii总溶解蛋白为290μg/mL,Rh.mucilaginosa总溶解蛋白为164μg/mL。Bradford法在pH2.0~13.0范围均能较准确地反映出菌株生长状况,数据表明两株酵母有广阔的pH耐受性,它们是耐碱酵母菌的新成员。