改良CTAB法提取林木树种基因组DNA的研究

目的:验证改良CTAB法提取不同林木树种基因组DNA的效果,寻求一种对于不同林木树种基因组DNA提取普遍使用的方法。方法:采用改良的CTAB法提取22种木本植物基因组DNA,并对其进行定性、定量分析及酶切分析。结果:采用本法可以去除多糖和其他次生代谢物并获得高质量的DNA。结论:该方法可以作为一种适于在实验室进行的林木树种基因组DNA的提取方法。     

四季桔试管苗基因组DNA微量提取方法

本试验以四季桔试管苗为试材,进行基因组DNA微量、快速提取方法的研究。结果表明:采用改良CTAB法,仅需20mg样品、2.5h就能获得高纯度、高质量的DNA,这是目前木本植物样品量最小的DNA提取方法;提取的DNA能直接被限制性内切酶BamHⅠ酶切,也能进行PCR扩增,可用于进一步的分子生物学研究。     

山蛭基因组DNA的提取及其PCR扩增产物的分析

利用PCR技术从海南山蛭体内分离山蛭素（抗凝血蛋白）基因,首先需获得不带有山蛭体表色素且完整的山蛭基因组DNA,本试验通过结合使用SDS-蛋白酶裂解法和CTAB法,有效的去除了山蛭基因组DNA提取过程中难以去除的色素,得到的基因组DNA保持完整,无降解,以之作为模板,进行PCR扩增,获得一个长度约为237bp的特异性片段,此片段与印度山蛭蛭素的cDNA大小几乎一致。初步表明,这个序列没有内含子,而仅是海南山蛭蛭素的编码序列。     

木本植物基因组DNA提取及鉴定

采用改良后的CTAB法,对山葡萄、软枣猕猴桃、蒙古栎、核桃楸、西伯利亚红松和偃松基因组DNA进行提取。结果表明,所提基因组DNA分子量与λDNA（48 kb）接近,其紫外吸收比在1.66～1.89之间。第3次和第4次上清提取的DNA质量优于第1次和第2次。从提取产量看,每克鲜重提取DNA量最小为15 μg·g^-1（核桃楸第4次上清）,最高的为272 μg·g^-1（山葡萄第3次上清）。西伯利亚红松和偃松第1次和第2次上清基本未提出DNA,第3次和第4次上清中得到了较高质量的DNA。经酶切鉴定和PCR扩增,所提的基因组DNA可以用于进一步研究。     

构建丝状真菌大片段基因组文库载体DNA的制备

载体DNA的制备是构建大片段基因组文库的关键步骤之一,高质量载体DNA受到酶切、脱磷等因素的影响,以载体pBHYG为材料,优化了限制性内切酶胁HindⅢ酶切和小牛肠碱性磷酸酶(CLAP)脱磷的作用条件,并在T4连接酶作用下自连,通过胶回收纯化制备了可用于进一步构建大片段基因组文库的线性载体DNA。     

水稻基因组DNA微量提取

随着植物学向分子水平的深入发展,研究中经常需要获得高质量的植物DNA样品,因此,建立植物DNA提取与纯化的常规实验方法对教学和科研都显得非常必要。介绍一种快速提取微量DNA的方法,该方法简单易行,无需任何特殊设备,所需样品量少,提取的DNA纯度高,可满足以PCR扩增为基础的实验需要。     

用加酶洗衣粉提取野生动物基因组DNA的新方法

介绍一种新的动物基因组 DNA 提取方法.该方法用加酶洗衣粉、洗洁精替代含有蛋白酶K、SDS、EDTA等成分的裂解液裂解动物肌肉样品,具有经济、简便、快速的特点,以所获得的 DNA作为模板能扩增出高纯度的PCR产物,有助于快速、准确地鉴定野生动物的种属.     

一种通用的基因组DNA提取方法

目的:探讨一种通厢的基因组DNA提取方法.方法:采用改良的膜法分别从动植物组织、外周血、细菌、细胞等标本提取基因组DNA,DNA样品经紫外吸收、琼脂糖凝胶电泳、PCR扩增和酶切进行榆测.结果:该方法提取的基因组DNA纯度较高,电泳条带清晰,DNA质量能满足下游分子生物学研究的需要.结论:该方法简便快速、适用范围广,是提取基因组DNA的一种有效方法.     

细菌基因组DNA提取方法概述

细菌基因组DNA提取是分子生物学研究的基础,DNA提取的质量和效率可直接影响后续实验结果的准确性和精确性。综述并比较了近10年细菌DNA提取的几种方法,分析不同方法的提取效率,以期为分子生物学研究提供更可靠的基础。     

微波法快速提取放线菌基因组DNA

原有的放线菌基因组DNA提取方法费时、费力、费用高,且对极端环境放线菌成功率较低。利用微波热振惊提取固体培养基表面放线菌菌落基因组DNA,具有快速、简便、费用低廉等优点。所得的基因组DNA可作为PCR反应的模板进行16S rRNA基因有效扩增。这为大量放线菌菌株的快速鉴别和系统分类创造了条件。     

栗属植物基因组DNA的提取及RAPD、SSR分析

以中国板栗、茅栗和锥栗的叶片为材料,提取栗属的DNA。针对栗属植物富含多酚类等次生物质的特点对栗属DNA的提取方法进行了改良,采用CTAB-蛋白酶K法加重复抽提,去除栗属植物中的相关次生物质,获得了高质量的DNA。所提取的DNA完全满足PCR、RAPD、SSR等一些分子生物学实验要求。     

石斛干品基因组DNA的提取与RAPD分析

市场中药干品的药性差异一直是影响中药标准化的瓶颈,而检测技术相对落后是导致这一现象的主要原因。DNA分子水平检测的困难是药材干品的基因组DNA难以提取。本文以铁皮石斛(Dendrobium candidum)干茎为材料,采用了四种方法从干品石斛中提取基因组DNA。结果表明,采用改良的CTAB法可从石斛干品尤其是干茎皮中提取质量较高的基因组DNA,其分子量大于23kb,以此DNA为模板进行不同引物的PCR扩增可获得清晰的RAPD条带。该研究初步建立了石斛干品合适的RAPD技术体系。     

直接从人工老化的菜心干种子中提取基因组DNA用于RAPD分析

利用 4 0℃、1 0 0 %RH对菜心种子进行人工加速老化处理获得了不同活力的种子批 ,利用平衡酚_氯仿法直接从人工老化的菜心干种子中提取基因组DNA ,并对提取的基因组DNA进行了RAPD扩增。结果表明 ,所提取的基因组DNA量多 ,而且比较整齐一致。引物S2 0 8扩增所获得的基因组DNA指纹图谱上的DNA带清晰、明亮 ,从而表明利用本方法从人工老化菜心干种子中直接提取的基因组DNA完全可以用于RAPD分析。     

夏枯草DNA提取及RAPD反应条件的优化

用改进后的SDS法从夏枯草植物的新鲜叶片中提取基因组DNA,通过正交设计和单因素结合的方法对RAPD-PCR反应条件进行优化,确定了适合夏枯草DNA的最佳扩增体系:20μL的PCR反应体系中,模板DNA浓度1.0-2.0 mg/L,引物浓度1.00-1.50 mmol/L,Mg2 浓度2.0-2.5 mmol/L,dNTP浓度0.20-0.25 mmol/L,Taq酶用量0.5 U,10×BufferMg2 free 2μL,BSA浓度0.25-0.50μg/μL。     

大花蕙兰基因组DNA提取及RAPD反应条件探索

用SDS、CTAB和改良CTAB法分别提取大花蕙兰叶片基因组DNA,发现以改良CTAB法提取的DNA纯度高,产率也较高。以5’-GGTGCTCCGT-3(’BA440)为随机引物,并以大花蕙兰品‘种金杯(’Cymbidiumhybridiumcv.HiroshimaGoldenCu“pSunnyMoon”)的DNA为模板,对RAPD(RandomAmplifiedPolymorphicDNA)反应体系进行了优化研究,结果表明,25μl反应体系中,Mg2 、TaqDNA聚合酶、引物、模板DNA和dNTP5种主要成分的适宜浓度或用量分别是:2.0mmol/L、1.0U、0.20μmol/L、25ng和0.20mmol/L。扩增程序优化为:94℃预变性4min;94℃变性0.5min,37℃退火1min,72℃延伸1min,40个循环;最后72℃延伸7min。     

杜鹃属基因组DNA提取及RAPD的检定

以杜鹃花属常绿杜鹃亚属井冈山杜鹃树叶为材料,分别采用修改的CTAB法、碱裂解法、SDS法提取基因组DNA。实验表明,三种方法所提的DNA纯度及产率有差别,从综合结果看,以CTAB法最好,其所提到的DNA大小与λDNA（21kb）相似,经检验该法适合杜鹃花属植物总基因组DNA的提取,所得DNA不需纯化就可直接用于RAPD分析。     

缢蛏滩涂养殖环境的细菌群落组成及分析

1引言滩涂贝类养殖由于实行生态养殖,目前已成为宁波市海水养殖业的一大热点.近几年来,随着沿海经济的高速发展,滩涂环境污染问题日趋严重,养殖贝类大规模死亡的现象时有发生,给海洋水产经济造成了严重损失.而微生物数量及种群分布与区域环境有着密切联系,它可直接或间接地反映区域环境的营养水平、污染程度及底质状况等.目前有关养殖环境微生物学的研究主要是针对水体及养殖池底泥中的细菌[1,4,7～10],而对养殖滩涂环境细菌的研究很少[15,18,19].为此,本文以宁波市昆亭缢蛏滩涂养殖区为研究对象,从细菌生态学角度对滩涂缢蛏养殖环境进行研…     

米心水青冈基因组DNA提取及RAPD反应体系优化

采用4种方法对米心水青冈基因组DNA进行提取,通过比较得出改良CTAB法提出的DNA纯度较高,能够达到扩增要求,因此采用此方法用于正式DNA的提取。适合米心水青冈的RAPD反应体系为：反应体积为25 μL,模板DNA40 ng,引物0.8 μmol·L^-1,Taq聚合酶1.25 U,Mg²⁺浓度2.0 mmol·L^-1,dNTP浓度0.16 mmol·L^-1。适合米心水青冈RAPD扩增程序： 94℃预变性3 min,一个循环,94℃变性30 s,37℃退火1 min,72℃延伸2 min,45个循环。     

基于AFLP分析用吴茱萸叶高质量DNA的提取

目的：研究吴茱萸叶基因组DNA的提取方法,以用于扩增片段长度多态性（AFLP）分析。方法：设计了一种改良CTAB法：以石英砂代替液氮研磨;抽提前用不溶性PVP结合酚形成络合物,然后用缓冲液除去;抽提中加入Vc。将改良CTAB法所提吴茱萸叶DNA与传统的SDS法、CTAB法所提DNA进行比较。利用植物的核糖体DNA（rDNA）保守序列设计引物行PCR扩增鉴定吴茱萸DNA及其质量。并确定提取方法中最佳样本含量和β-巯基乙醇浓度。结果：改良CTAB法提取石虎、疏毛吴茱萸总DNA呈白色,A260/A280为1.721~1.886,DNA分子完整,约20kb左右,PCR扩增条带清晰、明亮,无杂带和脱尾。并确定0.10g为最佳样本量,2.0%为最佳β-ME浓度。结论：石英砂研磨简便、迅速、均匀,该实验所建立的改良CTAB法可有效避免次生代谢物的氧化褐变,是一种小量、快速提取吴茱萸叶DNA优化方法。     

RAPD分析用白花丹参叶片DNA的提取方法

本研究采用改良CTAB法和SDS法提取新鲜白花丹参叶片的基因组DNA,初步筛选RAPD扩增引物。结果表明改良CTAB法提取的DNA较SDS法质量好,随机引物p2扩增条带相对较为清晰。再利用p2随机引物对2种方法提取的DNA进行RAPD检测比较,结果显示仅改良CTAB法能扩增出有效条带,说明改良CTAB法更适合用于白花丹参基因组DNA的RAPD检测分析。本文将为白花丹参叶片DNA的提取提供方法学参考。