黑斑蛙繁殖期血浆性激素浓度变化的研究

本文研究了黑斑蛙在繁殖期血浆性激素的变化,得到如下结果:1.雄蛙在繁殖期吋,精巢饱满,活动精子多、血浆雄激素含量高;繁殖期过后,精巢萎缩,活动精子数少、血浆雄激素含量低。说明雄激素影响精子的形成与成熟;2.雌蛙在排卵前,卵巢较重、有不同发育阶段的卵泡、血浆雌激素含量高;排卵后,卵巢较轻,有残留小卵和残留物,血浆雌激素含量低。说明雌激素对卵和副性征的发育有关。     

黑斑蛙光感受器计数和分类—扫描电镜研究

在扫描电镜下观察了黑斑蛙视网膜光感受器的类型、直径和密度。并用统计学方法对光感受器进行了计数。六个视网膜的光感受器计数平均为2,120,000±230,000(P<0.05)。可以见到两类视锥细胞和两类视杆细胞:单视锥,外段为锥形,最粗处直径约6微米;双视锥,由一主锥和一附锥构成,外段直径最粗处约7微米;红视杆,外段圆柱形,直径约6微米,其内段短粗,数目比绿视杆多;绿视杆,外段与红视杆极相似,但内段细长。视锥和视杆的外段上有许多小突起,这些小突起互相联系。     

棘胸蛙、虎纹蛙、黑斑蛙血细胞的比较

应用Giemsa染色法对棘胸蛙、虎纹蛙和黑斑蛙的血细胞进行显微观察和各形态参数测定,并对各类细胞作了图示和描述。结果表明,红细胞和白细胞的形态和数量比例有一定属和种的特征,并与其生长环境和进化地位有一定联系。     

黑斑蛙乳酸脱氢酶和酯酶同功酶的研究

用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,分析了黑斑蛙肝脏和眼球中的乳酸脱氢酶（LDH）和酯酶（EST）同功酶,乳酸脱氢酶有3个遗传位点,Ldh-2和Ldh-3在肝脏和眼球中均表达,而Ldh-1仅在眼球中表达,这3个位点均为单态。酯酶共有10个点,其中Est-2、Est-4和Est-8为多态位点,Est-1、Est-2和Est-3在肝脏中表达,且活力很高,而在眼球中不表达。     

黑斑蛙肾的组织结构

应用组织学和组织化学方法研究了黑斑蛙(Rana nigromaculata)肾的显微结构。结果表明,黑斑蛙的肾除具有肾单位和集合小管外,还见有淋巴样组织分散于肾实质中。在肾腹侧发现有与真骨鱼类斯坦尼斯小体相似的结构,其中聚集有较多的肥大细胞。说明黑斑蛙的肾具有多种生理功能。     

沈阳地区黑斑蛙早期胚胎发育研究

黑斑蛙Rana nigromaculata是中国大陆分布最广的两栖类之一,对沈阳地区黑斑蛙的胚胎发育进行观察,并拍摄各期图片,对各时期的形态特征进行描述。结果表明:在19～20℃的水温条件下,从受精卵期至鳃盖完全愈合期胚胎发育可分为26期,胚胎发育历时258.66h,胚体长10.315mm±0.893mm,有整齐的孵化期。本研究中的黑斑蛙胚胎发育和前人报道差异较大,可能与不同地区黑斑蛙的群体遗传组成、生态环境及试验中的水质和光照等其它条件的差异有关。     

几种农药对黑斑蛙黑斑蛙胚胎及蝌蚪的毒性

本文报道了常用的几种农药对黑斑蛙胚胎及蝌蚪发育的毒性影响。结果表明 :农药对黑斑蛙胚胎、蝌蚪期的毒性大小依次为使它隆 >多效唑 >多菌灵 >异丙隆 >甲胺磷。胚胎期死亡时表现为胚体腐烂 ;蝌蚪期死亡时则表现为头部膨大 ,尾部缩小 ,弯曲。畸形在两个时期都表现为腹部膨大呈透明状和尾部弯曲     

黑斑蛙骨髓细胞染色体标本制备的新方法

染色体标本制备是黑斑蛙分子细胞遗传学研究的基础。为了简化操作程序,缩短实验周期,建立了黑斑蛙染色体制备的一种新方法——骨髓细胞体外短时培养与秋水仙素同步处理法。该方法操作简便,重复性较好,可在较短时间里制备出分裂相较多且形态良好的蛙染色体标本,适用于核型分析、染色体荧光原位杂交、染色体显微分离和单染色体文库构建等多个方面的研究。     

镉对黑斑蛙蝌蚪生长发育的影响

两栖动物幼体的生长发育过程对环境变化和化学污染物都很敏感,为研究镉对两栖动物幼体生长发育的影响,将37—38期黑王证蛙（Rana．nigromaculata）蝌蚪暴露于含不同浓度镉的水中饲养,直至完全变态,观察幼体生长发育过程,记录蝌蚪完全变态所需时间,平均体重和平均长度增长率的测定。结果表明,随着Cd^2＋浓度的升高,蝌蚪的啤均体重和平均长度的增长率降低,完全变态所需时间增长。说明Cd^2＋污染可抑制黑斑蛙蝌蚪的生长发育,延缓变态。     

壬基酚对雄性黑斑蛙生殖毒性的研究

通过研究壬基酚对雄性黑斑蛙(Rana nigromaculata)成体的精子和精巢的影响,探讨壬基酚对黑斑蛙的生殖毒性.用不同剂量的壬基酚对雄性黑斑蛙进行处理,对黑斑蛙的精巢系数、精子数、形态结构、畸形率和精巢显微结构等分别进行研究.结果表明,与对照组相比,随着壬基酚浓度的升高,染毒组黑斑蛙的精巢系数下降,精子数减少,精子畸形率明显增大;畸形精子主要表现为其头部出现肥大、弯曲和圆形等现象;精巢显微结构发生变化,表现为生精小管萎缩,生精细胞层次减少,间质区不明显.说明壬基酚对雄性黑斑蛙生殖系统具有毒性效应.     

两种蛙Sox基因的PCR-SSCP分析

采用PCR技术,以参考人SRI,基因HMG-box的保守区序列而设计一对特异引物,扩增了黑斑蛙和金线蛙的Sox基因。结果两种蛙的雌雄个体均扩增出217bp的基因片段,与人对照相同。对扩增产物进行SSCP分析显示,两种蛙雌雄个体间的单链迁移率相同,两种蛙之间差异较小,而与人有较大差异。测序表明,两种蛙的Sox序列之间以及与各类物种的Sox基因都有非常高的相似性,充分显示出Sox基因在系统进化上的高度保守性。     

黑斑蛙消化系统蛋白酶的活力

用福林 酚试剂法对黑斑蛙 (Rananigromaculata)消化系统蛋白酶的活力进行了分析。结果表明 ,黑斑蛙食道、胃、前肠、后肠、直肠和胰脏蛋白酶的最适pH值分别为 1 5、1 5、7 4、7 4、7 4和 9 6 ,最适温度分别为 55、55、50、50、50和 50℃。在各自最适pH值和最适温度条件下 ,各部位蛋白酶活力由高到低的顺序为 :胰脏 >食道 >胃 >前肠 >后肠 >直肠。文中对黑斑蛙蛋白酶的特性进行了讨论 ,并对蛙的人工养殖提出了几点建议     

镉在黑斑蛙组织的积累与分布

研究民镉暴露实验中黑斑蛙不同器官组织对镉的吸收积累,并对其在不同器官组织中的分布规律进行了分析。结果表明：镉在黑斑蛙器官组织的积累具有选择性,主要积累在肠和肝脏中,其次是皮肤、肌肉,而骨骼中没有积累。     

壬基酚对黑斑蛙的毒性效应

通过研究壬基酚对黑斑蛙(Rana nigromaculata)血浆渗透压以及血细胞的影响,探讨壬基酚对黑斑蛙血液的毒性效应。用200、400和600mg/kg壬基酚分别对黑斑蛙腹部淋巴囊注射染毒,在不同的时间间隔内利用渗透压仪测量各组血浆渗透压,同时制作血涂片观察血细胞的异常现象。结果表明,在相同处理时间内,随着壬基酚浓度的增加,黑斑蛙血浆渗透压值上升,血细胞膨大,血细胞核分裂以及核质不均匀现象明显;在相同浓度处理组中,随着处理时间的延长,黑斑蛙血浆渗透压上升,血细胞膨大,细胞核损害严重。壬基酚可诱发红细胞出现微核现象,随着壬基酚浓度的增加,同一处理时间内黑斑蛙红细胞微核及核异常率呈现先上升后下降的变化规律;随着处理时间的延长,各处理组红细胞微核率及核异常率呈现下降的趋势。     

黑斑蛙精巢MDA和抗氧化酶对铅、镉暴露的生态毒性响应

以健康性成熟黑斑蛙为供试动物,以精巢组织丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性为指标,进行了水体铅、镉暴露的生态毒性响应研究.结果表明:(1)精巢MDA含量随铅、镉暴露浓度的升高而明显增加,且呈明显的浓度-效应关系.说明低水平铅、镉的长期暴露对黑斑蛙精巢具有一定的损伤作用;(2)SOD活性在各处理组响应变化不明显,CAT、GSH-Px活性则被显著诱导,说明GSH-Px、CAT在铅、镉引起的精巢抗氧化损伤中起着重要作用;(3)3种抗氧化酶相比,GSH-Px活性对铅、镉暴露响应最敏感,SOD活性的响应最不明显,精巢GSH-Px活性是指示铅、镉暴露的优选生物标志物。     

镉致黑斑蛙肝脏氧化损伤与金属硫蛋白含量的变化

为观察镉对黑斑蛙(Rana nigromaculata)肝脏脂质过氧化产物和金属硫蛋白含量的影响,将黑斑蛙暴露于10.0mg·mL-1浓度的镉溶液中30d,分别测定了黑斑蛙在暴露4、10d和30d时肝脏组织中镉(Cd)、还原型谷胱甘肽(GSH)、金属硫蛋白(MT)和过氧化产物丙二醛(MDA)的含量。实验结果表明,黑斑蛙肝脏中镉的积累量、GSH和MT含量均随着镉暴露时间的延长而显著升高,具有明显的时间-效应关系;在镉暴露的第10天,肝MDA含量明显高于对照组。提示镉可对黑斑蛙肝脏造成氧化损伤,而GSH、MT含量的升高则可能是机体抗氧化损伤的机理之一。     

Breeding ecology and oviposition site selection of black-spotted pond frogs (Rana nigromaculata) in Ningbo, China

The black-spotted pond frog (Rana nigromacu-lata) is one of the most widely distributed species in China. However, there have been only a few qualitative descrip-tions of their breeding ecology and oviposition site selec-tion. From 2004 to 2006, we investigated the breeding ecology and oviposition site selection of K nigromaculata in Ningbo, China, quantitatively. Analyses of breeding ecology show that: (1) mean frog density in the breeding season was 0.0903 ± 0.0029 individuals per meter (n = 11) (mean ± SE); (2) R. nigromaculata was a sexually dimorphic species, with females significantly larger than males in both body weight and snout-vent length; (3) the clutch size averaged 4643.04± 235.96 eggs (range 1546-7897, n = 50); and (4) the egg size ranged from 1.50 to 1.74 mm in diameter, with an average egg size of 1.6050 ± 0.0046 mm (n = 226). Oviposition sites differed significantly from random sites in percentages of water, bare ground and vegetation cover, water depth (cm), water temperature (°C) and water turbidity. Rana nigro-maculata preferred microhabitats with higher percentages of water and vegetation cover, while it avoided microha-bitats with deeper water. The results suggest that micro-habitats with higher percentages of water and vegetation cover, but not deeper water, should be priorities for pro-tection and conservation of the breeding habitats of R. nigromaculata.