体外培养牛白细胞中环形泰勒焦虫(Theileria annulata)的增殖、释放与感染

在体外培养的牛外周血白细胞中,环形泰勒焦虫裂殖子与裂殖体寄生于宿主细胞的细胞质中,并且随着宿主细胞的分裂而分到两个子细胞中。焦虫染色质粒的分裂方式为二分裂,随着焦虫颗粒的不断增殖,逐渐发育为成熟的裂殖体。体外培养感染焦虫的牛白细胞可通过伪足与细胞裂解两种途径向培养液中释放焦虫颗粒。释放到培养液中的焦虫颗粒对体外培养的健康牛外周血白细胞具有感染能力,感染细胞能在体外连续传代培养。     

牛泰勒焦虫病的诊治与扑灭

2012年7月初,本院的教学实习牧场发生一起牛的群发性疾病,该病来势凶猛,发病普遍,损失较大。全场36头牛中,有20头发病,其中成年牛发病13头,死亡2头。周岁牛发病7头,死亡1头。通过临床诊断和病源学检查(剖检、试验性治疗,微生物学检查)确诊为牛泰勒焦虫病,经一个多月的治疗和护理,将该病彻底平息。     

环形泰勒焦虫裂殖体细胞培养及其免疫原性的研究

1.本实验中所试用的BLS和“乳叶”培养液,都能良好地支持环形泰勒焦虫裂殖体感染的成淋巴细胞贴壁和悬浮生长,在4天内细胞量增殖5倍以上,传代以后的成淋巴细胞95%以上都寄生有裂殖体。成淋巴细胞“乳叶”培养液中,已连续传代培养15个月以上,仍生长良好,初步证明某些培养液中所加入的多种维生素等成份,对促进寄生有裂殖体的成淋巴细胞的生长繁殖,不是必要的。 2.传代细胞内的裂殖体,仅见无性裂殖体一种。裂殖体的分裂方式与宿主细胞的有丝分裂是密切相关的,在成淋巴细胞分裂的后期,裂殖体核沿纺锤丝排列成一行或数行,然后几乎被均等地分配到两个子细胞中去。裂殖体是细胞分裂的一种强烈刺激物。 3.成淋巴细胞在明胶制剂中,于4—6℃下保存到40—50天仍不失其再生长繁殖的能力。 4.裂殖体具有坚强的免疫原性,接种牛体后可产生抗环形泰勒焦虫病的免疫力。传代培养45天,2个半月和5个半月的细胞接种牛体后,前二种细胞形成带虫免疫,后者为非带虫免疫,安全性皆表现良好。经蜱叮咬攻毒,17头牛100%得到保护。516×10~5—5×10~6细胞剂量均安全有效。用明胶制剂作为保护剂,所制的胶冻细胞苗在4—6℃下保存20天和30天,对牛体仍然可产生坚强的保护能力,即疫苗的有效保存期可达30天。     

白符(虫兆)胚胎发育的形态观察(弹尾纲:等节(虫兆)科)

对白符(Folsomiacandida)胚胎发育全过程进行显微观察,记述了白符从卵裂、囊胚期、原肠期、组织分化期、孵化前期等不同发育阶段的形态变化和发育过程。其结果表明,白符卵为聚产,形成大小不等的卵块,卵初产时为乳白色,卵壳表面覆盖有细密的颗粒状突起,直径为110—126μm。随着白符发育的进行,胚膜直径增大到180—185μm,其卵裂方式为完全均等卵裂,整个胚胎发育历期7—10d。     

牛白细胞粘附缺陷病(BLAD)的调查

牛白细胞粘附缺陷病(BLAD)是一种常染色体单基因隐性遗传疾病, 病因为白细胞表面整合素CD18亚单位基因突变所致。为了解我国奶牛群中BLAD的携带和发生情况, 本研究采用RT-PCR扩增CD18基因片段后, 用TaqⅠ内切酶对扩增产物进行酶切的方法检测了1 000头1~6岁的奶牛, 结果有19头奶牛为BLAD携带牛, 即BLAD携带率为1.9%; 1头为BLAD病牛。     

黎氏牛腹腔丝虫(Sataria leichengwingi)人工感染中华按蚊实验观察

中华按蚊是我国马来丝虫的主要传播媒介,也是指状牛腹腔丝虫(Sataria digitata)的适宜媒介(王冠群等,1981)。因此,在马来丝虫病的调查和监测中,中华按蚊体内幼丝虫的虫种鉴别是急待解决的新课题。我们根据四川水牛多为黎氏牛腹腔丝虫所寄生的特点,进行了中华按蚊人工感染黎氏牛     

尾柱虫(Urostyla cristata)的形态发生研究

U.cristata的表膜“纤毛图式”的构成多而复杂,棘毛大小、基部形状都不相同。在分裂时期产生四个新原基(primordium)区域:(1)口原基(AZM和PM),(2)额部、腹部和臀部棘毛原基(FVT),(3)缘棘毛原基和(4)背触毛原基。 U.cristata在无性分裂时,以口原基的出现为第一迹象,PM和No.O棘毛及腹棘毛中部分棘毛产生新原基居中,而以缘棘毛和背触毛产生原基为最后。分裂过程中,后仔虫上的PM是在新AZM原基的右边产生的,而前仔虫上的老PM则在原位从上往下开始更新的,老AZM是在原位从下往上更新的。左右两边缘棘毛都是在最左一条棘毛排上出现上下两个原基区域的。背面各排触毛的原基是在虫体长1/3和2/3两个位置上出现的。     

车轮虫感染奥尼罗非鱼的白细胞分类百分比变化

车轮虫(Trichodina spp.)是奥尼罗非鱼(Oreochromis aureus×Oreochromis niloticus)养殖中最常见的一种原生动物寄生虫。实验测定了感染组和未感染组中奥尼罗非鱼的各类型白细胞的百分比。感染组该鱼血液中的淋巴细胞和嗜中性粒细胞百分比极显著高于未感染组;未感染组该鱼血液中的单核细胞百分比极显著高于感染组。发现嗜中性粒细胞和淋巴细胞可能在抵御车轮虫入侵中起着重要作用;单核细胞在抵御车轮虫起着一定的作用。表明奥尼罗非鱼感染车轮虫后,细胞免疫增强。     

人血树突状细胞培养后的形态及抗肿瘤活性

观察新鲜分离和经体外培养３６小时的人外周血树突状细胞ＤＣ。和ＤＣ３６的形态学及其对淋巴因子与植物血凝素激活的杀伤细胞（ＬＰＡＫ细胞）体外诱导人肝癌细胞株ＢＥＬ┐７４０２的促进作用。形成学观察用免疫细胞化学法。抗肿瘤实验分为三大组：（１）Ｌ组（ＢＥＬ┐７４０２＋ＬＰＡＫ）,（２）ＬＤ３６组（ＢＥＬ┐７４０２＋ＬＰＡＫ＋ＤＣ３６）,（３）ＬＤ０组（ＢＥＬ┐７４０２＋ＬＰＡＫ＋ＤＣ０）。各组均采用ＬＰＡＫ与ＢＥＬ┐７４０２为５∶１和１０∶１两种效靶比。培养４８小时后用中性红摄入比色法检测ＬＰＡＫ细胞的杀伤活性。结果显示,ＤＣ３６的形态以具有细长突起者为多,与ＤＣ０主要为园形或具有短而钝突起的形态有明显差别。各组的细胞毒活性依次为：ＬＤ３６组＞ＬＤ０组＞Ｌ组（Ｐ＜０．０１）,并随效靶比增高而相应增强。这表明新鲜分离的人外周血ＤＣ在体外经３６ｈ培养后,不仅在形态上成熟,而且抗肿瘤活性也明显增强     

外周血树突状细胞的体外培养

本文用塑料贴壁的外周血单个核细胞(PBMNCs)在含自体血浆、rhGM-CSF、rhIL-4和TNFα的RPMI1640培养基,37℃,5%CO2湿化空气培养树突状细胞(DCs).经10天培养,可获得大量具DCs形态学特征的细胞,其有很强的刺激同种淋巴细胞增殖功能,约30%的细胞表达HLA-DR和CD1a.健康志愿者每1×107PBMNCs可收获细胞约5×105.本文培养方法产率高,培养体系简单,用自体血浆代替小牛血清,培养过程简便,这些均适应临床治疗要求.     

不同培养基对牛体外受精胚发育率及抗冻性的影响

采用M199、SOFaa(aa:Amino Acid)和SOF对牛体外受精卵进行发育培养,比较了三种培养条件下的囊胚发育率、孵化率以及这三种条件下培养出来的囊胚的抗冻能力。在M199和SOFaa处理组,囊胚发育率分别为22.6％和29.0％,孵化率分别为 11.3％和8.1％,两者间无显著差异,但均极显著高于SOF处理组(13.6％,0,P<0.01)。三个处理组的囊胚经冷冻解冻后的存活率分别为78.5％、46.4％和17.3％,孵化率分别为41.9％、23.2％和0,三者间存在极显著差异(P < 0.01)。结果表明,不同的培养液不但影响胚胎发育率,同时也影响胚胎的抗冻能力,M199的培养效果优于SOF,氨基酸能明显提高胚胎发育率及抗冻能力。     

中华鲟外周血细胞组成及形态观察

利用光镜和透射电镜技术对北京海洋馆养殖的40尾中华鲟(Acipenser sinensis)(介于4—30龄以上, 包括野生、子一代和子二代共7个龄组)外周血细胞组成、大小、显微和超微结构进行研究。结果表明, 在外周血细胞中可区分出以下六类细胞。形态结果: 红细胞卵圆形, 胞质内可见少量线粒体; 淋巴细胞多圆形, 有明显伪足样或指状胞凸, 核质比大, 可明显分为大淋巴和小淋巴; 嗜中性粒细胞核型多样, 胞质细胞器丰富, 含有大小不等的特殊颗粒; 嗜酸性粒细胞多为规则圆形, 表面大量细小指状突起, 胞质细胞器丰富, 含有大量个体较大的嗜酸性颗粒; 单核细胞变形现象多, 胞质内大量空泡, 核型多样; 血栓细胞形状多样, 胞质内大量小的空泡, 散布或成团出现, 常见直接分裂现象。各类血细胞从大到小依次为: 单核细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、大淋巴细胞、红细胞、血栓细胞和小淋巴细胞, 各龄组间无显著差异。外周血红细胞总数(RBC)平均为(5.56±1.19)×108/mL, 18龄和11龄与其他龄组之间存在显著性差异(P<0.05); 白细胞总数(WBC)平均为(16.53±4.94)×106/mL, 18龄与4龄间存在显著差异, 且分别与其他龄组间存在显著性差异(P<0.05); 血栓细胞总数(15.53±15.82)×106/mL。白细胞分类计数(DLC)中大淋巴细胞、小淋巴细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和单核细胞所占百分比分别为: (5.26±3.95)%、(77.74±11.73)%、(9.40±7.98)%、(1.90±2.06)%、(5.50±4.00)%, >30龄和4龄间显著差异, 且分别与其他龄组间存在显著性差异( P<0.05)。结论认为中华鲟血细胞进化地位低, 免疫系统为淋巴细胞系为主, 主要包括淋巴细胞、粒细胞和单核细胞, 结果对中华鲟的健康评价与保育研究有重要的参考意义。     

成年草鱼外周血细胞的超微结构

用透视电镜技术研究了成年草鱼外周血细胞的超微结构，结果表明：在外周血细胞中可区分出红细胞，淋巴细胞，单核细胞，嗜中性白细胞，嗜酸性白细胞和血检细胞；嗜碱性白细胞无论在血涂片上或超薄切片上都没有发现。电镜图像显示，在红细胞中，仅能看到少数线粒体和液泡。淋巴细胞以短的伪足，较多的游离核糖体和滑面内质网为其特征。单核细胞的特征是具有较多的伪足和胞质液泡以及偏位核。在外周血液中发现了嗜中性白细胞生长、发育、功能成熟和衰退的全过程，描述了嗜中性白细胞的幼稚型、成熟型和衰退型细胞的超微结构。在成年草鱼外周血中，还发现了一种新型的颗粒细胞，它的特殊颗粒为大的六角形或棒状致密结晶颗粒，对上述特殊颗粒细胞的属性也进行了讨论。     

人外周血中LAK细胞的克隆化

本文报道首次采用半固体-液体两步法克隆正常人外周血单个核细胞(PBMNC)中的淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)获得成功。先用含重组人白细胞介素2(rhIL-2)的软琼脂半固体克隆外周血中的T细胞,再将T细胞克隆转移至96孔板中继续在含rhIL-2的液体中培养。~(51)Cr释放的结果表明,约10～30％的克隆对NK敏感的K562细胞和NK不敏感的H7402、Anip-1肿瘤细胞均有细胞毒性,即为LAK细胞克隆。LAK细胞克隆能在体外含rhIL-2培养液中增殖1.5～3.0个月,每个克隆可扩增至10~9～10~(10)个细胞,仍然维持LAK细胞活性。表型分析的结果表明,克隆的LAK细胞CD3( )、CD8( ),属T细胞系统。有增殖能力的LAK前体细胞在PBMNC中的频率约为1～3×10~(-4)。用有限稀释法将LAK细胞克隆进一步亚克隆,98％以上的亚克隆均有LAK活性,表型也和原克隆相同,证实原克隆具有克隆源性。本文的两步法克隆LAK细胞程序可在较短时间内获得大量均一的LAK细胞,极大地有助于LAK细胞的深入研究和广泛应用。     

利用人摄金蛋白(METALLOTHIONEIN)启动子和牛乳突瘤病毒在哺乳动物细胞中表达乙型肝炎表面抗原

用人Metallothioenin-Ⅱ启动子、乙型肝炎表面抗原基因,SV40早期基因的编接位点和多聚A位点构成了表达组件,然后插入到经改造过的BpV-1质粒中。所得质粒pdMTsAg-5转染小鼠C127细胞得到转化克隆。Ausria Ⅱ检测证明13株中有12株能产生HBsAg。对其中一株进行HBsAg收率观察,隔天收获为292.6～525.8μg/升,每天收获为200.9～369.0μg/升,可连续收获60天以上。经重金属离子诱导后,收率增至583～854.4μg/升。培养液经超滤浓缩和两次密梯离心后,可集中为一个狭窄的峰,顶峰的Ausria Ⅱ cpm为1.05×10~7,密度为1.20g/ml。     

红细胞的前向光散射

本文从红细胞前向光散射的观点出发对红细胞的尺寸、红细胞的变形性研究以及红细胞容积、血红蛋白浓度等参数的测定作了系统的思考。提出在红细胞与周围悬浮介质折射车相差不大时,反常衍射比夫朗和费衍射更适合用于红细胞前向光散射的研究。利用两组不同角间隔的前向散射光来同时测量红细胞容积和血红蛋白浓度。同时其它一些标识红细胞的参数如平均红细胞容量（ＭＣＶ）、平均血红蛋白量（ＭＣＨ）等均可直接或间接由这两项参数导出。最后还将红细胞的光散射与Ｍｉｅ理论作了对比．     

兰州百合精细胞表膜上存在被牛精子抗体识别的抗原决定簇

以兔抗牛精子 Ig G为一抗 ,对植物精细胞蛋白进行 Western blot分析 ,发现兰州百合 (Liliumdavidii Duch.)精细胞和生殖细胞中各有一分子量为 64k D的蛋白显示阳性反应 ;在玉米 (Zea mays)精细胞蛋白中也发现了阳性反应条带 ,其分子量为 65 k D和 2 2 k D;而兰州百合花丝、花药壁和玉米黄化苗的蛋白中均没有阳性条带。用兔抗牛精子 Ig G对兰州百合精细胞进行间接免疫荧光标记 ,结果表明在兰州百合精细胞表面 ,有兔抗牛精子 Ig G的识别位点。根据以上结果 ,作者认为植物精细胞中有与动物精子相同或相似的抗原决定簇 ,它 (们 )主要分布于精细胞表膜上 ,并为精细胞所特有