RAPD技术及其在动物遗传育种中的应用

ＲＡＰＤ技术是在ＰＣＲ基础上发展起来的一种ＤＮＡ多态性检测技术,已广泛应用于基因组研究的种个领域。本文概述了ＲＡＰＤ反应的原理、特点,总结了其在遗传多样性检测、亲缘关系鉴定、遗传连锁分析和数量性状的辅助标记选择等方面的应用,并肯定了ＲＡＰＤ在动物遗传户种领域的应用前景。     

RAPD技术及其在微生物学方面的应用

198 0年 ,Ｂｏｔｓｅｉｎ提出ＤＮＡ限制性片段长度多态性 (ＲＦＬＰ)可以作为遗传标记 ,从此开创了直接应用ＤＮＡ多态的新阶段。 80年代后 ,ＤＮＡ多聚酶链式反应 (ＰＣＲ)的发展 ,使直接扩增ＤＮＡ的多态性成为可能 ,并在此基础上产生了许多种新型分子标记 ,诸如扩增片段多态性 (ＡＬＦＲ)、串联重复序列(ＶＮＴＲ)、单链构型多态性 (ＰＣＲ ＳＳＣＰ)、序列特异扩增区域 (ＳＣＡＲ)、随机扩增多态性ＤＮＡ(ＲＡＰＤ)等。而ＲＡＰＤ是较为突出的一种。ＲＡＰＤ是由Ｗｉｌｌｉａｍｓ和Ｗｅｌｓｈ在 1 990年各自独立发现的一种ＤＮＡ多态检…     

用RFLP和PCR—RFLP技术研究东北虎和华南虎线粒体DNA多态性

采用ｍｔＤＮＡＲＦＬＰ和ＰＣＲＲＦＬＰ技术研究了东北虎和华南虎的ｍｔＤＮＡ的多态性。在ｍｔＤＮＡＲＦＬＰ研究中,分离纯化了东北虎和华南虎肝、肾和心脏组织的ｍｔＤＮＡ,用２０种识别６碱基对的限制性内切酶消化,结果只有１种限制性内切酶（ＸｂａⅠ）检测到多态性片段,其余１９种限制性内切酶消化产生的限制性格局在东北虎和华南虎完全一致。在ＰＣＲＲＦＬＰ研究中,用ＰＣＲ技术分别扩增了东北虎和华南虎ｍｔＤＮＡ的控制区（ｃｏｎｔｒｏｌｒｅｇｉｏｎ）,用８种识别４碱基对的限制性内切酶分别对扩增产物进行消化,结果只有１种限制性内切酶（ＲｓａⅠ）检测到多态性片段。ｍｔＤＮＡＲＦＬＰ及ＰＣＲＲＦＬＰ的结果均提示东北虎和华南虎之间的遗传距离极小。这可能与下列因素有关：两者分布区间无天然隔离屏障;具有强扩散能力;近几百年才被相互隔离。     

中国部分地方鸡种Ｂ—ＬⅡβ（β１外显子）基因分子遗传多态性研究

应用ＰＣＲ－ＲＦＬＰs方法对１０个鸡种的Ｂ－ＬⅡβ（β１外显子）基因进行了遗传多态性研究,综合４种限制性内切酶的酶切情况,共检测到３７种基因组合型,并且在个体间以及品种间的基因型频率、基因组合型频率都存在较大的差异。同时各酶切位点的Ｈardy-Weinberg平衡状态在品种上也表现不一致。克隆测序结果表明β１外显子分子遗传多态性更多地体现在氨基酸水平,作为抗原结合区,其丰富的多态性与抗原多样性相一致。     

耐力运动员及普通人群线粒体DNA调控区遗传多态性分析

目的：通过ＰＣＲ技术对优秀耐力项目运动员以及普通个体的ｍｔＤＮＡ调控区遗传多态性进行分析,以期发现与运动能力相关联的基因标记。方法：以单根毛发为检材,运用ＰＣＲ技术分析中国优秀耐力性项目运动员（ｎ＝６７）,一般水平运动员（ｎ＝３３）以及普通人群（ｎ＝２０）的线粒体ＤＮＡ调控区（Ｄ－Ｌｏｏｐ）的ＲＦＬＰ。结果：优秀耐力性项目运动员线粒体特定区域ＲＦＬＰ分布与普通人群至显著性差异。结论：一些在优秀运动     

日本血吸虫中国大陆株基因多态性研究

对日本血吸虫中国大陆株湖南、湖北、江西、安徽、四川、云南隔离群以及一个实验室传代品系从基因水平进行了多态性研究。首先,在用ＰＣＲ－ＳＳＷＣＰ技术分析了２８Ｓ ｒＤＮＡ－Ｄ２高变区基础上,测定了该区安徽和云南隔离群的ＤＮＡ序列;其次,用ＰＣＲ获得了含有ＩＴＳ的ｒＤＮＡ片段,并对其进行了酶切点重复序列的多态性分析;最后,用ＲＡＰＤ技术分析了全基因组ＤＮＡ的多态性。结果表明,安徽与云南隔离群的２８Ｓ ｒ     

幽门螺杆菌的基因分型方法及其应用

近几年,有关幽门螺杆菌（ＨＰ）基因分型方法及其应用的研究取得了很大进展。基因分型方法包括：质粒分型、限制性内切酶分型（ＲＥＡ）、核糖分型、染色体ＤＮＡ脉冲场凝胶电泳（ＰＦＧＥ）分型、多聚酶链反应限制性内切酶消化（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）分型、任意引物ＰＣＲ（ＡＰ－ＰＣＲ）分型、ＰＣＲ单链构型多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）分型和核苷酸序列分析等。基因分型方法广泛用于ＨＰ的研究,如基因图的构建、感染复发、耐药机     

中国棉花枯萎菌生理小种的RAPD分析

利用随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）分子标记方法对我国棉花枯萎菌３个生理小种（３、７、８号）进行遗传多样性分析,以筛选出的１０个随机引物对采自我国１１个省（自治区）的２６个代表菌株及国外３个不同生理小种对照菌株进行ＲＡＰＤ－ＰＣＲ扩增,共产生了１４０个ＲＡＰＤ分子标记,其中８７．８％具有多态性。通过聚类分析确定了供试小种间的亲缘关系,并寻找到了我国３、７、８号小种的特异条带,为确立我国棉花枯萎菌生     

小卫星区域MS31A等位基因特异MVR—PCR分析

用等位基因特异ＭＶＲ－ＰＣＲ技术能够对小卫星区域ＭＳ３１Ａ（Ｄ７Ｓ２１位点）位基因结构的多态性进行分析,在法医学个体识别上具有极其重要的作用。对１００名中国人无关个体ＭＤ３１Ａ５’端侧翼ＤＮＡ多态性进行分析,获得了其不同等位基因的频率和单倍体型的分布,结果表明８１．８％的 ＤＮＡ样品能够用等位基因特异ＭＶＲ－ＰＣＲ分析。     

中国部分地方鸡种B-LⅡβ(β_1外显子)基因分子遗传多态性研究

应用ＰＣＲ－ＲＦＬＰｓ方法对１０个鸡种的Ｂ－ＬⅡβ（β１外显子）基因进行分子遗传多态性研 究,综合４种限制性内切酶的酶切情况,共检测到３７种基因组合型,并且在个体间以及品种间 的基因型频率、基因组合型频率都存在较大的差异。同时各酶切位点的Ｈａｒｄｙ－Ｗｅｉｎｂｅｒｇ平衡状态在品种上也表现不一致。克隆测序结果表明：β１外显子分子遗传多态性更多地体现在氨 基酸水平,作为抗原结合区,其丰富的多态性与抗原多样性相一致。     

中国棉花枯萎菌生理小种的RAPD分析*

利用随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）分子标记方法对我国棉花枯萎菌３个生理小种（３、７、８号）进行遗传多样性分析,以筛选出的１０个随机引物对采自我国１１个省（自治区）的２６个代表菌株及国外３个不同生理小种对照菌株进行ＲＡＰＤ－ＰＣＲ增,共产生了１４０个ＲＡＰＤ分子标记,其中８７．８％具有多态性。通过聚类分析确定了供试小种间的亲缘关系,并寻找到了我国３、７、８号小种的特异条带,为确立我国棉花枯萎菌生理小种在国际上的分类地位提供了可靠的分子证据。     

用分子生物学技术对草菇进行菌株鉴别

利用ＡＰ－ＰＣＲ和ＲＡＰＤ技术对三个草菇菌株进行鉴别,其结果与用草菇菌株Ｖ３４基因文库中的中等重复序列为探针进行限制性内切酶长度多态性分析（ＲＦＬＰ）,及对编码核糖体５．８ＳｒＲＮＡ的ＤＮＡ（ｒＤＮＡ）进行ＰＣＲ扩增后的产物进行限制性内切酶长主多态性分析（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）的结果相一致。这一结果显示出用这四种方法对草菇菌株进行鉴别具有相似的效果。同时用这四种方法构建的分子生物学标记显示出这三个菌株     

中国棉花枯萎菌生理小种的RAPD分析

利用随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）分子标记方法对我国棉花枯萎菌３个生理小种（３、７、８号）进行遗传多样性分析,以筛选出的１０个随机引物对采自我国１１个省（自治区）的２６个代表菌株及国外３个不同生理小种对照菌株进行ＲＡＰＤ－ＰＣＲ增,共产生了１４０个ＲＡＰＤ分子标记,其中８７．８％具有多态性。通过聚类分析确定了供试小种间的亲缘关系,并寻找到了我国３、７、８号小种的特异条带,为确立我国棉花枯萎菌生理小种在国际上的分类地位提供了可靠的分子证据。     

微卫星DNA和AFLP标记在水稻分子标记连锁图上的分布

以一个栽培稻（ＯｒｙｚａｓａｔｉｖａＬ．ｓｐ．ｉｎｄｉｃａ）和野生稻（Ｏ．ｒｕｆｉｐｏｇｏｎＧｒｉｆ）杂交的Ｆ２作图群体以及由该群体构建的ＲＦＬＰ标记连锁图,分析了微卫星ＤＮＡ和ＡＦＬＰ标记的多态性、遗传行为及其在染色体上的分布。共定位了２８个微卫星ＤＮＡ标记和１７２个ＡＦＬＰ标记。２８个微卫星ＤＮＡ标记中有６个为华中农业大学作物遗传改良国家重点实验室根据数据库中序列而设计,其余２２个来自美国Ｃｏｒｎｅｌ大学已发表的结果。１７２个ＡＦＬＰ标记出自２５对引物扩增得到的２２８个多态性带的片段。这些标记分布于水稻的１２条染色体。将此２００个ＰＣＲ标记与华中农业大学作物遗传改良国家重点实验室构建的ＲＦＬＰ连锁图整合,得到一张含６１２个分子标记位点的遗传连锁图。     

二核苷酸重复多态性的非同位素检测及其在基因诊断中的应用

本文报道了一种检测二核苷酸重复多态性的简便的非同位素法,利用重复序列两侧的特异引物进行ＰＣＲ扩增,产生的等位片段在薄层变性聚丙烯酰胺凝胶电泳上分离,再用灵敏的银染法显色。该方法不需要标记ＰＣＲ产物,简便、快速,分辨率可达１ｂｐ,并可用多对引物同时进行多重ＰＣＲ分析。用此方法对ＤＭＤ家系成员ｄｙｓｔｒｏｐｈｉｎ基因的５＇－脑型外显子止游区和３＇－非翻译区的两个（ＣＡ）。位点进行了扩增片段长度多态性分     

RAPD分子标记及其在作物遗传育种中的应用

ＲＡＰＤ分子标记是一种新型的分了遗传标记,其原理是采用１０个碱基的随机引物,以基因组ＤＮＡ为模板进行ＰＣＲ随机扩增。其优越性在于其方法简单;分析中的花费少,用时短;分析所需的ＤＮＡ用量也不多等。本文着重介绍以电泳技术和ＰＣＲ扩增技术为核心的分子标记以及在农作物遗传育种中的应用。     

植物病原真菌中DNA分子鉴定技术

就基因组ＤＮＡ中Ｇ＋Ｃ含量、分子杂交、聚合酶链式反应（ＰＣＲ）、限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）、随机扩增多态性（ＲＡＰＤ）,以及扩增片段长度多态性（ＡＦＬＰ）等分子标记技术,在植物病原真菌鉴定工作中的应用情况和发展趋势作了介绍。     

AFLP标记及在植物中的应用

ＡＦＬＰ是 1 992年由荷兰Ｋｅｙｇｅｎｅ公司Ｚａｂｅａｕ、Ｖｏｓ在ＰＣＲ和ＲＦＬＰ的基础上发展起来的一种检测ＤＮＡ多态性的新方法[1] ,并于1 993年获得欧洲专利局专利。与ＲＦＬＰ类似 ,ＡＦＬＰ也是通过限制性内切酶片段的不同长度检测ＤＮＡ多态性的一种ＤＮＡ分子标记技术。由于ＲＦＬＰ是以传统的Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交为基础的 ,操作繁琐 ,对ＤＮＡ多态性的检出的灵敏度不高 ,在连锁图上有很多大的空间区。随着ＰＣＲ技术广泛应用 ,对分子标记技术的发展产生了巨大的推动作用。除了ＲＦＬＰ(限制性内切酶酶切片段长度多态性标记 …     

中国对虾16 S rRNA基因序列多态性的研究

利用ＰＣＲ技术扩增获得中国对虾（Ｐｅｎａｅｕｓ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）线粒体ＤＮＡ的１６Ｓ ｒＲＮＡ基因片段,通过测定该基因片段的序列,分析了取自我国烟台、长岛近海和宁波养殖的１７只中国对虾遗传多态性。结果发现,不同地理种群存在丰富的ＤＮＡ序列多态性,１７只个体具有１７种基因型,在扩增的长为５２３ｂｐ的基因片段中,共检测到３７个多态性核苷酸位点（７．０７％）。ＵＰＧＭＡ法构建的分子系统树表明不同地理     

DNA分子标记在柑桔中的应用

ＤＮＡ分子标记是最为理想的遗传标记 ,依其多态性检出所用的分子生物学技术 ,大致可分为Ｓｏｕｔｈｅｍ杂交技术为核心的分子标记和ＰＣＲ技术为核心的分子标记。前者的代表性技术有ＲＥＬＰ(ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎｆｒａｇｍｅｎｔｌｅｎｇｔｈｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ)和ＤＮＡ指纹技术 (ＤＮＡｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｉｎｇｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ)。后者的代表性技术有ＲＡＰＤ(ｒａｎｄｏｍａｍｐｌｉｆｉｅｄｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃＤＮＡ)、ＳＣＡＲ(ｓｅｑｕｅｎｃｅｃｈａｒａｃ ｔｅｒｉｓｔｉｃａｍｐｌｉｆｉｅｄｒｅｇｉｏｎ)…