人NMT的表达,纯化和活性研究

利用ＰＣＲ技术并进行ＤＮＡ序列测定,从人脑ｃＤＮＡ库中扩增得到人豆蔻酰ＣｏＡ蛋白Ｎ端豆蔻酰转移酶的编码基因,构建其在Ｔ７启动子控制下的成熟型和Ｈｉｓ６融合型的表达质粒ｐＭＦ－ｈＮＭＴ３和ｐＭＦＨＴ－ｈＮＭＴ２。转化大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）,进行ＩＰＴＧ诱导表达研究。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析结果显示,在３７℃条件下表达的各种重组ｈＮＭＲ几乎全是不溶性产物,但在较低温度条件下表达的Ｈｉｓ６－ｈＮＭＲ绝大     

黄瓜花叶病毒山东株（CMV—SD）RNA2全和cDNA克隆的构建及全序列分析

分别利用５’ＲＡＣＥ和３’ＲＡＣＥ确定了ＣＭＶ－ＳＤＲＮＡ２的５’和３’未端序列,在此基础上,利用ＲＴ－ＰＣＲ得到了ＲＮＡ２的５’端一半的ｃＤＮＡＤＱ ＢＴＧ Ｐｃ２５和３’端一半的ｃＤＮＡ克隆ＰＣ２３,并通过拼接构建了ＲＮＡ２全长ｃＤＮＡ克隆ＰＣ２Ｆ。     

美洲商陆一种抗真菌蛋白的cDNA克隆及序列分析

根据美洲商陆种子中一种抗真菌蛋白ＰＡＦＰ的Ｎ端部分氨基酸顺序,设计,合成一条５‘端寡核苷酸引物,通过３’－ＲＡＣＥ技术从种子总ＲＮＡ扩增出一约３５０ｂｐ的ｃＤＮＡ片段,成功地克隆到ｐＧＥＭ－Ｔ载体系统中。序列分析该,ｃＤＮＡ含有１１４ｂｐ的编码区,由此推导的３８个氨基酸序列有３６个与ＰＡＦＰ的序列相同,仅在第３５,３６位氨基酸分别由Ｃｙｓ,Ｌｙｓ代了后者的Ｇｌｎ和Ｉｌｅ。     

3‘端非翻译区影响TNFa cDNA在大肠杆菌中的表达

采用ＰＣＲ方法改变了表达构建物ｐＲＬ－ｒｈＴＮＦ中的结构,即去掉ｒｈ ＴＮＦａ ｃＤＮＡ ３’端非翻译区序列１１０ｂｐ（命名为ｐＲＬ－ｒｈ ＴＮＦａ２）,转入大肠杆菌后,观察数个阳性转化子的表达情况,并与原型ｐＲＬ－ｒｈ ＴＮＦａ的表达进行比较。结果表明,去掉３’端非翻译区的ｐＲＬ－ｒｈＴＮＦａ２能稳定表达ｒｈＴＮＦａ,其发酵及纯化产品的生物学特征均等同于原型的,且其表达量比原型的有提高,提示ｅ‘     

传染性法氏囊病病毒中国强毒株节段cDNA基因的克隆和序列分析

以来自哈尔滨传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）强素株（Ｈａｒｂｉｎ 毒株,Ｈ）的基因组ＲＮＡ为模板,用反转录聚合酶链反应（ＲＰ－ＰＣＲ）的方法得到了其Ａ节段的全长ｃＤＮＡ片段,分５端（１６５９ｂｐ）和３端（１４４４ｂｐ）上下两段分别克隆到ｐＧＥＭＢ－Ｔ载体上,测定了其核苷酸顺序,在长为３１０１ｂｐ中含有两个阅读枢ＯＲＦ Ａ１和ＯＲＦ Ａ２,分别编码１０１２个氨酸酸的前体蛋白（ＶＰ２－４－３）和１４５个     

传染性法氏囊病病毒中国强毒株A节段cDNA基因的克隆和序列分析

以来自哈尔滨传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ） 强毒株（Ｈａｒｂｉｎ 毒株,Ｈ） 的基因组ＲＮＡ为模板,用反转录聚合酶链反应（ＲＴ－ ＰＣＲ） 的方法得到了其Ａ 节段的全长ｃＤＮＡ 片段,分５＇端（１ ６５９ｂｐ） 和３＇端（１ ４４４ｂｐ） 上下两段分别克隆到ｐＧＥＭＢ○Ｒ － Ｔ 载体上,测定了其核苷酸顺序,在长为３ １０１ ｂｐ 中含有两个阅读框ＯＲＦＡ１ 和ＯＲＦＡ２ ,分别编码１ ０１２ 个氨基酸的前体蛋白（ＶＰ２ － ４ －３） 和１４５ 个氨基酸的ＶＰ５,ＯＲＦＡ１ 和ＯＲＦＡ２ 有部分的重叠。将核苷酸序列及推测出的氨基酸序列与已报道的ＩＢＤＶ 血清Ⅰ型和Ⅱ型毒株的相应序列进行了比较,结果表明：Ｈ 毒株与其它血清Ⅰ型毒株之间,在核苷酸水平上存在２５ｂｐ － ２６７ｂｐ 的差异;在氨基酸水平上存在１７ ～４０ 个氨基酸的差异。在ＶＰ２ － ４ － ３ 内比较显示,Ｈ 毒株与Ｐ２ 、Ｃｕ－ １ 之间氨基酸的差异最小为１ ．７％ ,Ｈ 毒株与ＵＫ６６１ 之间氨基酸的差异最大为３ ．９ ％ 。变异主要发生在ＶＰ２ 的可变区（２０６ － ３５０ 位氨基酸） ,在Ｈ 毒株所特有的１２ 个氨基酸当中,该区就占５ 个,代表１ ．７６ ％ 的变异。ＶＰ４、ＶＰ３ 和ＶＰ５区各有     

VEGF受体Flt—1在大肠杆菌中的高效融合表达

鉴于Ｆｌｔ－１有肿瘤及其他由于病理血管生成而导致的多种疾病中的核心作用,本文通过ＰＣＲ扩增出的ＶＥＧＦ受体Ｆｌｔ－１Ｎ端１－３个ＩｇＧ样ｌｏｏｐ基因,经过基因重组实现了Ｆｌｔ－１在原核表达体系５Ｘ－１的融合表达。     

大鼠FMR1同源基因cDNA的克隆,测序与选择剪接的初步分析

应用ＲＴ－ＰＣＲ方法,从新生大鼠脑组织总ＲＮＡ扩增大鼠ＦＭＲ１同源基因的ｃＤＮＡ片段,克降至ｐＵＣ１８质粒中进行序列分析。获得从终止密码子起共１６８１ｂｐ的编码序列,尚缺少约２００ｂｐ的５‘序列。所克隆的这部分大鼠ＦＭＲ１ｃＤＮＡ,不含有对应于人ＦＭＲ１基因的外显子１２及外显子１７第一和第三剪接受点之间的序列,提示大鼠ＦＭＲ１基因也有选择剪接表达。     

FMR—1同源基因在大鼠脑发育过程中持续表达

以克隆的人ＦＭＲ－１ ｃＤＮＡ片段为探针，进行ＲＮＡ印迹杂交，检测发育过程中大鼠脑组织ＦＭＲ－１同源基因的表达，结果显示从胚胎早期至出生后一个月该基因有持续表达，其中在胚胎发育晚期表达量较高，提示ＦＭＲ－１基因可能参与胎脑发育的调节。     

鱼类HGPRT缺陷型细胞的诱变和筛选

草鱼卵巢细胞ＧＣＧ经乙基甲磺酸（ＥＭＳ）诱变,稳定表达３代以后,采取逐步提高培养基中６－疏基嘌呤（６－ＭＰ）的方法,获得对６－ＭＰ稳定抗性的细胞,暂定名ＦＭＲ－１．本文比较了ＧＣＧ细胞及ＦＭＲ－１细胞在含６－ＭＰ（２０μｇ／ｍｌ）和不含６－ＭＰ的培养基中生长曲线的特点,并对上述两种细胞的染色体数目和葡萄糖－６－磷酸脱氢酶电泳图谱进行了比较分析。最后对两种细胞在ＨＡＴ培养基中的生长特点进行了平行对照实验,根据实验结果,可以判定ＦＭＲ－１细胞为草鱼ＨＧＰＲＴ缺陷型细胞。本义还讨论了进一步研究草鱼ＨＧＰＲＴ缺陷型细胞的途径及草鱼ＨＧＰＲＴ缺陷型细胞在鱼类细胞遗传学上的应用前景。     

番茄花叶病毒外壳蛋白基因及3‘端非编码区的克隆,序列分析及其表达

根据已报道的番茄花叶病毒Ｌ株系序列人工合成引物,经ＲＴ－ＰＣＲ扩增并克隆了我国番茄花叶病毒分离物的外壳蛋白ＣＰ基因及３‘端非编码我。序列测量结果表明,所得ｃＤＮＡ共长６８２个核苷酸,其中ＣＰ基因含４８０个核苷酸,编码１５８个氨基酸,３’端非编码区含２０２个核苷酸,其核苷酸序列与ＴｏＭＶ－Ｌ株系具有９９．５％的同源率。     

人白细胞介素11 cDNA的克隆、融合表达及活性测定

取人胎肺做原代培养细胞,ＰＭＡ诱导后,利用ＲＴ－ＰＣＲ技术,扩增出去了Ｎ端信号肽序列的ＩＬ１１ｃＤＮＡ,经序列分析表明,该序列与文献报道序列高度同源,仅３个核苷酸有变化,氨基酸序列一致。将此ＩＬ－１１ｃＤＮＡ克隆人硫氧还蛋白基因融合表达载体ｐＴＲＸＦＵＳ的ｔｒｘＡ基因３‘末端,利用其３’端的蛋白肠激酶切点。构建符合读码框的融合基因。该融合蛋白在大肠杆菌中表达量法２０％以上。用ＩＬ－６依赖细胞株７Ｔ     

LDL受体基因内含子15结构分析及其在家族性高胆固醇血症基因诊断中的应用

为了解人类ＬＤＬ受体基因内含子１５的遗传背景,利用长链ＰＣＲ和锚定ＰＣＲ分离了ＬＤＬ受体基因外显子１５－内含子１５－外显子１６和内含子１５的３‘末端片段。利用Ｄｙｎａｌｂｅａｄｓ固相单链分离ＰＣＲ产物直接测序法测定了内含子１５ ３’末端１２２２个碱基序列。序列显示：３‘末端含有由１６个碱基组成的典型３’末端剪接位点;３‘端上游第３１个碱基处含有经典分支位点,除了经典分支位点外,在３’末端上游第２０     

烟草花叶病毒蚕豆株系外壳蛋白基因及3‘端非编码区的克隆与序列分析

根据烟草花叶病毒Ｕ１株系序列,人工合成引物,用ＲＴ法合成了ｃＤＮＡ后,通过ＰＣＲ技术扩增并克隆了烟草花叶病毒蚕豆株系的外壳蛋白的基因和３‘端非编码区。ＤＮＡ序列测定结果表明,外壳蛋白基因全长４８０个碱基,编码１５８个氨基酸,３’端非编码区全长２０４个碱基,与ＴＭＶ－Ｕ１株系的同源率为１００％。     

M—CSFR家族受体的配基结合区的研究进展

本文综述Ｍ－ＣＳＦＲ家族受体Ｍ－ＣＳＦＲ、Ｋｉｔ、ＰＤＧＦＲ等与其相应配基Ｍ－ＣＳＦ、ＳＣＦ及ＰＤＧＦ等相结合的区域的研究进展;讨论了该家族受体的二聚化区域;关提及Ｋ－受体的结合方法－Ｓｃａｔｃｈａｒｄ分析。     

二甲亚砜与维甲酸对人卵巢癌细胞COC1的生长抑制及转化生长因子β_1表达的影响

本实验以人卵巢癌细胞株（ＣＯＣ１）为模型,观察诱导分化剂二甲亚砜（ＤＭＳＯ）与维甲酸（ＲＡ）对该细胞生长增殖、ＤＮＡ合成和转化生长因子β１（ＴＧＦβ１）在细胞内表达的影响。结果显示：ＤＭＳＯ与ＲＡ对人卵巢细胞ＣＯＣ１生长有明显的抑制作用,生长曲线表明作用５天后其生长抑制率分别为６２．７％和４２．１％;３Ｈ－胸腺嘧啶核苷（３Ｈ－ＴｄＲ）掺入实验说明ＤＭＳＯ组与ＲＡ组的单位时间计数率（ＣＰＭ）明显低于对照组（Ｐ＜０．０１）。用药３天后百分掺入抑制率分别为６０．４％与３７．９％,表明ＤＭＳＯ与ＲＡ抑制ＣＯＣ１细胞的ＤＮＡ合成;免疫细胞化学反应表明,ＤＭＳＯ或ＲＡ处理５天后,对照组细胞ＴＧＦβ１表达为阳性,定位于胞浆,而处理组细胞ＴＧＦβ１呈阴性或弱阳性反应。以上结果提示ＤＭＳＯ和ＲＡ对人卵巢癌细胞有一定的诱导分化作用。     

云南三种同域分布的棘蛙（蛙科Ranidae：无尾目Anura）的核型和银带研究

本文比较分析了云南景东地区三种同域分布棘蛙的核型和Ａｇ－ＮＯＲｓ。花棘蛙２ｎ＝２６（１６Ｍ＋ １０ＳＭ）,ＮＦ＝５２,次缢痕和Ａｇ－ＮＯＲｓ位于１ｐｉｎｔｅｒ,Ｎｏｓ．２－４,８,９等为ＳＭ。棘肛蛙２ｎ＝４０（１６Ｍ＋ ２０ＳＭ＋２ＳＴ＋２Ｔ）,ＮＦ＝７８,Ｎｏｓ．５－９,１１－１３,１５,１７等１０对为ＳＭ,Ｎｏ．３为ＳＴ,Ｎｏ．１８为Ｔ,其余 均为Ｍ,Ａｇ－ＮＯＲｓ位于１１Ｐ。二种的Ａｇ－ＮＯＲｓ都有异形现象。双团棘胸蛙２ｎ＝６４Ｔ,次缢痕和Ａｇ－ ＮＯＲＳ在４ｑｐｅｒ。都未发现异形性染色体。最后,对棘蛙属的核型演化机制和物种形成方式作了讨论。     

戊型肝炎病毒（HEV）合成肽及基因重组抗的免疫反应性研究

用ＯＲＦ２、ＯＲＦ３合成肽抗原（１－１０号）及基因工程重组的ＯＲＦ２抗原（１和２号）分别建立了酶联免疫方法（ＥＩＡ）,检测６０份戊型肝炎病人血清中ＨＥＶＩｇＧ及ＩｇＭ１０个合成肽抗原及２人重组抗原,均和ＨＥＶ阳性血清发生特异反应,但阳性率和反应强度差别很大。以Ｒｅｌ（ＯＲＦ２,４０２－６６０）检测的抗体阳性率最高,为９６．７％;Ｓｐ６（ＯＲＦ３,８８－１２３）次之,为９３．３％（５６／６０）;以上     

橡胶延伸因子基因及3'端非编码区的克隆与序列分析

橡胶延伸因子ＲＥＦ（Ｒｕｂｂｅｒ Ｅｌｏｎｇａｔｉｏｎ Ｆａｃｔｏｒ）是橡胶生物合成中最重要的酶之一．作者利用ＲＥＦ基因序列设计并合成引物． 通过提取胶乳总ＲＮＡ 用ＲＴ法合成ｃＤＮＡ 后,通过ＰＣＲ技术扩增并克隆了ＲＥＦ基因和３端非编码区． 序列测定结果表明,ＲＥＦ基因全长４１４ 个碱基,编码１３８ 个氨基酸,３端非编码区长１１２ ｂｐ． 与Ｇｏｙｖａｅｒｔｓ Ｅ 等人发表的序列比较：ＲＥＦ基因同源率为１００％ ,３端非编码区有２ ｂｐ 的差异,同源率为９８％ ． 将所克隆的ＲＥＦ基因及３非编码区进行地高辛标记, 对胶乳和叶片总ＲＮＡ 进行点杂交分析,结果表明,胶乳总ＲＮＡ 呈阳性反应,叶片总ＲＮＡ 则呈阴性反应．     

应用肌肉介导基因转移制备5,10亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)抗体

５,１０亚甲基四氢叶酸还原酶（ＭＴＨＦＲ）是叶酸代谢的关键酶．为了试验肌肉介导外源基因人ＭＴＨＦＲ（ｈＭＴＨＦＲ）制备抗体和建立ＭＴＨＦＲ免疫检测的可能性,构建了ＭＴＨＦＲ基因真核表达载体（ｐｃＤＮＡ３／ＭＴＨＦＲ）;通过基因缝线法将携带ｐｃＤＮＡ３／ＭＴＨＦＲ的质粒,缝合于预先注射再生剂（丁哌卡因）的肌肉内．２个月后分离血清,所得抗体应用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ,ＥＬＩＳＡ和胎肝免疫组织化学染色进行免疫鉴定．胎肝免疫组织化学显示,在肝小梁细胞浆中具有大量ＭＴＨＦＲ阳性反应颗粒;Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ有ＭＴＨＦＲ抗体与其抗原特异的褐色条带,分子量约为３７ｋＤ;ＥＬＩＳＡ分析表明,３种不同浓度的抗体与不同剂量的抗原反应具有剂效关系,最适抗体滴度（ＥＤ５０）为１∶４００。以上结果说明肌肉介导外源基因是获得抗体的一种简单、快捷的方法．该抗体可用于ＭＴＨＦＲ的免疫检测和有关的叶酸代谢研究工作．