高效液相色谱法在脱氧核糖核酸酶解动力学

为了更好地对脱氧核糖核酸酶解动力学过程进行研究,建立脱氧核糖核酸(DNA)酶解液中4种脱氧核苷酸(腺嘌呤脱氧核苷酸(dAMP)、鸟嘌呤脱氧核苷酸(dGMP)、胞嘧啶脱氧核苷酸(dCMP)、胸腺嘧啶脱氧核苷酸(dTMP))的高效液相测定方法,能将酶解液中4种脱氧核苷酸完全分离并准确定量.在此基础上,对DNA酶解的动力学进行初步研究,其反应机理为不存在底物和产物抑制的双底物顺序反应,动力学方程为x=1/bln(1+abt)(其中a=0.372 3ρ0-0.974;b=-0.049 3ρ20+1.115 3ρ0 - 1.110 3),该方程可以很好地描述DNA酶解过程,误差仅为3.31%.     

高效液相色谱法在脱氧核糖核酸酶解动力学研究中的应用

为了更好地对脱氧核糖核酸酶解动力学过程进行研究,建立脱氧核糖核酸（DNA）酶解液中4种脱氧核苷酸（腺嘌呤脱氧核苷酸（dAMP）、鸟嘌呤脱氧核苷酸（dGMP）、胞嘧啶脱氧核苷酸（dCMP）、胸腺嘧啶脱氧核苷酸（dTMP））的高效液相测定方法,能将酶解液中4种脱氧核苷酸完全分离并准确定量。在此基础上,对DNA酶解的动力学进行初步研究,其反应机理为不存在底物和产物抑制的双底物顺序反应,动力学方程为x=1／bin（1＋abt）（其中a=0．3723p0—0．974;b=-0．0493p0^2＋1．1150p0-1．1103）,该方程可以很好地描述DNA酶解过程,误差仅为3．31％.     

发酵法制备腺嘌呤核苷三磷酸

腺嘌呤核苷三磷酸这种药物,临床证明可用于抢救病危患者,对治疗肝炎、肾炎、进行性肌肉萎缩以及冠心病等也有一定效果。本文介绍了一种用5′-腺嘌呤核苷酸为原料,利用啤酒酵母,在一定条件下转化为腺嘌呤核苷三磷酸的简便方法。此法比光合磷酸化法优越,成本低,且生产不受季节限制。——编者     

细胞和组织中的O~6-甲基脱氧鸟嘌呤核苷的脱甲基作用

为了探讨细胞和组织中的O~6-甲基脱氧鸟嘌呤核苷的脱甲基作用,我们合成了[~3H]O~6-mGua DNA、O~6-mdGuo、O~6-mdGMP、O~6-mdGTP等底物,在体外利用高压液相色谱分析细胞和组织提取物去除鸟嘌呤基团第六位氧原子上甲基的能力。结果表明,在细胞和组织提取物中存在一种去甲基酶,它能去除O~6-甲基脱氧鸟嘌呤核苷、O~6-甲基脱氧鸟嘌呤核苷-磷酸上的甲基,生成脱氧鸟嘌呤核苷或脱氧鸟嘌呤核苷-磷酸,并伴随着甲醇的释放。它不同于DNA甲基转移酶。没有观察到它对O~6-甲基鸟嘌呤DNA、O~6-甲基脱氧鸟嘌呤核苷三磷酸、O~4-甲基胸腺嘧啶核苷以及O~6-甲基鸟嘌呤的去甲基作用。     

芦丁、槲皮素快速修复嘌呤脱氧核苷酸阳离子自由基

利用脉冲辐解技术研究了芦丁和槲皮素对嘌呤脱氧核苷酸阳离子自由基的修复作用. 脉冲辐照经N²饱和的含20 mmol/L K²S²O⁸, 200 mmol/L t-BuOH及芦丁或槲皮素的脱氧核苷酸中性水溶液, 几十个微秒内出现芦丁或槲皮素酚氧自由基的瞬态吸收谱, 同时先前形成的脱氧核苷酸阳离子自由基的瞬态吸收谱迅速衰减, 表明被试黄酮能够快速修复脱氧核苷酸阳离子自由基. 对dAMP和dGMP阳离子自由基的修复反应速率常数分别为(3.8 ~ 4.4)×10⁸和(1.3 ~ 1.8)× 10⁸ L/(mol·s).     

放射性碘化脱氧胞嘧啶核苷三磷酸的快速合成法

脱氧胞嘧啶核苷三磷酸(dCTP)在三氯化铊催化下,进行碘化反应后,用Dowex 1×8(甲酸型)柱分离纯化,然后用活性炭柱吸附去盐,产物用乙醇/氨水洗脱,再减压浓缩并溶解于乙醇/EDTA中,0℃以下保存。整个标记过程可在一天之内全部完成。实验证明,这样合     

次黄嘌呤核苷-5-二磷酸钡盐的制备

次黄嘌呤核苷-5′-二磷酸(5′-IDP)是多聚核苷酸磷酸化酶的底物,也是制备多聚次黄嘌呤核苷酸(poly I)的基本材料。后者与poly C在一定条件下以等克分子混合后,按碱基配对原理,形成双链多核苷酸poly I:C。它是目前最有效的干扰素诱导物,具有使用剂量小,诱导效价高等优点。关于IDP的制备方法有:发酵法、有机合成法和腺腺嘌呤核苷二磷酸(ADP)脱氨法。其中以ADP用亚硝酸脱氨法最为简便。但以往报道的方法,均过于简略,脱氨程度难以掌     

《生物工程讲座》名词解释(Ⅰ-Ⅳ讲)

1.bp碱基对。DNA长度的单位。1000bp=1kb。 2.kp千碱基对。参见bp。 3.A,G,T,C DNA双链上四种脱氧核苷酸(或其碱基)的符号,A为脱氧腺嘌呤核苷酸,G为脱氧鸟便嘌呤核苷酸,T为脱氧胸腺嘧啶核苷酸,C为脱氧胞嘧啶核苷酸。在双链上。A恒与T配对,G恒与C配对。在RNA链上,四种核苷酸的符号为A,G,u,c,相应为腺嘌呤核苷酸,鸟便嘌呤核苷酸,尿嘧啶核苷酸和胞嘧啶核苷酸。     

酿酒酵母酶促磷酸化合成腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)

酶促磷酸化法生产腺嘌呤核苷三磷酸(以下简称ATP),多利用啤酒酵母、面包酵母等的酶系进行反应,尚未见到以酿酒酵母合成ATP的报道。我国有很多白酒厂,酿酒酵母取材容易,而且培养条件要求低,对糖的发酵力强,对酸和乙醇的耐受力较好。研究用酿酒酵母进行酶促磷酸化合成ATP适于白酒厂土法上马。     

末端脱氧核苷酸转移酶在生物传感及核酸合成领域的应用*

末端脱氧核苷酸转移酶(terminal deoxynucleotidyl transferase, TdT)是聚合酶X家族中的一员,与典型的DNA聚合酶不同,TdT以恒温的无模板依赖的方式催化脱氧核糖核苷三磷酸(dNTP)聚合到寡核苷酸的3'羟基端来合成DNA。并且TdT对底物的耐受性高具有聚合修饰型dNTP的能力,如荧光修饰的dNTP、生物素修饰的dNTP,甚至人工碱基均可作为其良好底物。TdT的这些生化特性使其被广泛的应用在生物传感和核酸合成领域中,促进了许多基于核酸的工具和方法的发展,并为酶促从头合成DNA技术的发展奠定基础。介绍了TdT的性质,重点总结了它在其介导的生物检测技术、核酸的修饰技术以及酶促合成DNA技术三个方面的核心作用、目前面临的挑战以及未来研究的方向,以期促进TdT在生物传感器和核酸合成中的进一步应用。     

降解DNA为5’-脱氧单核苷酸的菌种筛选

从土壤样品中分离到1000余株霉菌、放线菌和细菌。测定它们降解热变性DNA能力的结果指出,5株霉菌和14株放线菌降解能力较强,其中M996霉菌降解能力最强,经鉴定为烟曲霉(Aspergillus~umigatus Frcscnius)。这株菌降解DNA的产物经过纸电泳、纸层析、离子交棰柱屡析和特异性酶分析,证明为dAMP、dGMP、HCMP和dTMP。     

从小牛胸腺分离纯化末端脱氧核苷酸转移酶

本文采用Okamura氏的寡聚脱氧胸苷酸(oligo-dT)-纤维素柱层析法分离纯化小牛胸腺末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)。包括下列主要步骤:制备酶粗提液、磷酸纤维素柱层析、二乙基氨基乙基纤维素柱层析、葡聚糖凝胶过滤、oligo dT-纤维素亲和层析。经过上述几步分离纯化,从500克小牛胸腺中获得6,564单位TdT,比活性达5,199单位/毫克蛋白,聚丙烯酰胺凝胶电泳呈一条带,不含脱氧核糖核酸(DNA)多聚酶Ⅰ。     

脱氧核酶:生物催化剂的新成员

具有酶活性的ＤＮＡ分子称为脱氧核酶(ｄｅｏｘｙｒｉｂｏｚｙｍｅ或ＤＮＡｚｙｍｅ) ,其发现是人类对于酶的认识的又一次重大飞跃。1 .脱氧核酶的几种结构Ｃａｒｍｉ等[1] 通过体外选择技术合成了一种依赖Ｃａ2 的具有自我切割功能的手枪型二级结构脱氧核酶分子 (图 1 )。茎Ⅰ是结合部位 ,茎Ⅱ是催化部位。结合部位不同的碱基序列可以识别不同的底物 ;催化部位则相对保守。由于结合部位碱基配对是催化剂识别底物的基础 ,延长茎Ⅰ序列可以增加酶 底物复合物的稳定性 ,但序列过长则会造成ＤＮＡ分子自我构建 (ｓｅｌｆ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ)…     

Oligo(dT)-纤维素与Oligo(U)-纤维素的合成及其应用

Oligo(dT)-纤维素与Oligo(U)-纤维素具有分离信使RNA(mRNA)的功能。这是由于大多数的mRNA 分子的3’-末端含有多聚腺嘌呤核苷酸的片段(亦有例外,如一类组蛋白的mRNA),在低温与高离子强度的条件下,此片段能与多聚脱氧胸腺嘧啶核苷酸或多聚尿嘧啶核苷酸形成互补的碱基配对,而核糖核蛋白体RNA(rRNA)与转移RNA(tRNA)缺少多聚腺嘌呤核苷酸的片段,不能被该树脂吸附,利用这一特性可将mRNA与其它RNA分离开来。     

利用固定化啤酒酵母合成5'-核苷三磷酸

固定化啤酒酵母细胞由5’-核苷一磷酸(NMPs)合成5’-核苷三磷酸(NTPs)。在250mL摇瓶中加入20g固定化酵母细胞和20mL反应液(NMP 40mmol/L,葡萄糖150mmol/L,K2HPO4-KH2PO4缓冲液250 mmol/L,硫酸镁10mmol/L),pH 7.0,35℃,反应2.5h,NTP转化率达到80%。底物溶液添加NAD 后,该固定化酵母细胞可反复使用10次,NTP的转化率稳定维持在70%以上。     

家蚕丝腺和卵巢核糖体核酸的理化性质

本文报道家蚕丝腺和卵巢核糖体核酸的制备及其理化性质分析。所制备的rRNA中平均含DNA及蛋白质皆为0.4%,表明纯度符合制备要求。对所制备的丝腺和卵巢rRNA进行紫外光谱分析、碱基组成分析、热增色效应和T_m值测定,并进行蔗糖密度离心分析和超速离心沉降分析。丝腺rRNA碱基组成(百分含量)为腺嘌呤26.1;鸟嘌呤29.4;胞嘧啶23.7;尿嘧啶20.7;鸟嘌呤和胞嘧啶占53.1%。卵巢rRNA碱基组成(百分含量)为腺嘌呤26.4;鸟嘌呤29.6;胞嘧啶23.6;尿嘧啶20.4,鸟嘌呤和胞嘧啶占53.2%。丝腺和卵巢的rRNA在0.015M NaCl-0.0015M柠檬酸钠(pH7.0)溶液中的热增色效应分别为22.5%和25.4%;其T_m值分别为43.7℃和45℃。它们的二个亚单位的沉降常数分别皆是29和18。     

双链核糖核酸病毒的研究IV．家蚕细胞质多角体病毒mRNA的体外合成

本文报道以四种核苷三磷酸为底物,在磷酸丙酮酸、丙酮酸激酶、皂土及S-腺嘌呤核苷-L-甲硫氨酸(以下简称SAM)存在下,在体外复制家蚕细胞质多角体病毒(简称CPV)mRNA,用DEAE-Sephadex A-25柱层析分离复制产物。并对体外合成的mRNA的性质进行了研究,表明是单链大分子的RNA。用电镜观察经复制后的家蚕细胞质多角体病毒,仍是含有核酸的颗粒。     

大肠杆菌离子束诱变及rpoB基因两个新的利福平抗性位点鉴定

以60Co-γ射线辐照为参照体系,研究了低能氮离子诱发大肠杆菌利福平抗性突变。结果表明,低能氮离子注入具有损伤轻而突变率较高的特点。碱基置换型突变与其检出频率分析表明,CG→TA、GC→AT、AT→GC转换与AT→TA颠换为低能氮离子诱发大肠杆菌活体细胞内的高频突变,占检出总突变数的875% (77/88)。并鉴定出大肠杆菌rpoB基因中两个新的利福平抗性决定位点。位点一位于1551位鸟嘌呤脱氧核苷酸（dG）被胞嘧啶脱氧核苷酸（dC）取代,导致Gln517 (谷氨酰胺残基) 被His (组氨酸) 替代;位点二位于1692的胞嘧啶脱氧核苷酸（dC）被胸腺嘧啶脱氧核苷酸（dT）替代,导致Pro564 (脯氨酸残基) 被Leu (亮氨酸) 取代,使突变子产生抗性。其中位点一还未见报道,位点二的同义突变已有报道,但1692位点C到T的核苷酸突变并没有得到鉴定。     

8位~3H标记的脱氧腺嘌呤核苷5′-一磷酸的制备

前言8位氚标记脱氧腺嘌呤核苷5＇-一磷酸(以下简写为~3H-dAMP)可用于脱氧核糖核酸结构分析及代谢研究,还可以转变成脱氧腺三磷(~3H-dATP)。我们遵照毛主席“独立自主,自力更生”的     

植物和微生物中ATP的提取及测定方法评述

一、引言 ATP(腺嘌呤核苷三磷酸)首先由Fiske和Subbarow于1929年从哺乳动物的肌肉提取液中分离出来,它的分子结构式如下: