横纹肌样瘤的起源研究——高变异率BHK-21细胞致裸鼠产生恶性横纹肌样瘤的实验研究

横纹肌样瘤（ＲＴ）的起源迄今仍是世界上悬而未决的重大难题。第一例ＲＴ发现于肾脏。但迄今发现的ＲＴ均难以复制成功。在纯化３代的肿瘤阴性对照猫肾和犬肾原代细胞皮下接种裸鼠的致癌／致瘤率为０％（０／３２）,肿瘤阳性对照Ｈｅｌａ细胞皮下接种裸鼠产生进行性生长恶性肿瘤的比率为１００％（４０／４０）的前提下,ＢＨＫ－２１细胞皮下接种裸鼠均产生进行性生长的恶性肿瘤（６５／６５）,其中染色体众数为４０±２（比率５８％～６８％）的ＫＡ株致ＲＴ比率为５２．３８％（１１／２１）,具有两个染色体众数４０±２（比率４１％～５３．５）和７２±２（比率３１％～３５％）的ＹＡ株致ＲＴ的比率为８３．３３％（１０／１２）,染色体众数为７３±３（比率４２％～５０％）的成瘤细胞体外再培养ＮＭ２８／ＹＡ株致ＲＴ的比率为７１．４３％（１５／２１）,染色体众数为４２（比率２８％～３０％）的Ｍ株致ＲＴ的比率为０％（０／１０）,致形态类似于分化比较好的平滑肌肉瘤的恶性肿瘤的比率为１００％（１０／１０）,可见ＢＨＫ－２１细胞不能用作病毒活疫苗培养基质,可替代Ｈｅｌａ细胞用作恶性肿瘤阳性对照细胞。高变异率ＢＨＫ－２１细胞株皮下接种无胸腺裸鼠大多产生恶性ＲＴ（２６／４２）,但要求完形活细胞接种量要大（２～９×１０７／鼠）,肿瘤产生迅速,生长快速,血管丰富,供血充分,接种细胞后１０～２０天或２～３周肿瘤长径×短径均值基本达到３０ｍｍ×２０ｍｍ标准。其它高变异率细胞系接种丧失免疫机能的无菌实验动物,如环境条件和生长状况达到上述标准,理当可能产生恶性ＲＴ。ＲＴ在模型动物体内的首次发现和成功复制,为弄清ＲＴ的起源问题提供了机会。可见,肾上皮是恶性ＲＴ的重要起源组织,本研究开辟了ＲＴ起源研究的新阶段。克隆出致ＲＴ的高变异率ＢＨＫ－２１细胞株,建立ＲＴ裸鼠模型,并应用于ＲＴ的临床诊断防治或进一步探索,都具有重大意义。     

恶性横纹肌样瘤（MRT）的起源研究——高变异率HeLa细胞致裸鼠产生MRT的实验研究

HeLa细胞KB株、X株、NM20／X株、H株的染色体众数依次为60±3（超二倍体）、62±3（超二倍体）、68±3（超二倍体和亚四倍体）和78±2（亚四倍体）,所占比率分别为72%～76%,69%,52%和40%。在纯化3代的肿瘤阴性对照二倍体猫肾（染色体众数38所占比率80%）和犬肾原代细胞皮下接种裸鼠的致癌／致瘤率分别为0%（0／22）和0%（0／10）,X株HeLa细胞冻融裂解物皮下接种裸鼠产生进行性缩小肿瘤的比率为20%（1／5）的前提下,HeLa细胞KB株、X株、NM20／X株皮下接种裸鼠产生进行性生长恶性肿瘤的比率分别为100%（10／ 10）,100%（25／25）和100%（5／5）,H株细胞皮下接种裸鼠产生恶性肿瘤的比率为50%（5／10）。其中,只有HeLa细胞KB株10～11代（染色体结构畸变率高达20%,出现18%双着丝点和2%断片）以超高数量接种的1组4只裸鼠（0.17ml12.75×10     

恶性横纹肌样瘤(MRT)的起源研究取得突破——高变异率BHK-21细胞移植于裸鼠皮下多呈MRT细胞形态生长为阐明该瘤的起源问题提供了机会

弄清恶性横纹肌样瘤（ＭＲＴ）的组织细胞起源是进行诊断并攻克防治问题的基础。自１９７８年首例发现于肾脏以来,有关该肿瘤的报道逐年增多,但迄今发现的ＭＲＴ均难以复制成功,ＭＲＴ的起源仍是医学上悬而未决的重大难题。作者在纯化３代的肿瘤阴性的对照猫肾和犬肾原...     

成人肾恶性横纹肌样瘤的研究:1例报告及文献复习

应用组织化学、免疫组织化学及电镜技术对我国首例成人肾恶性横纹肌样瘤（ｍ ａｌｉｎｇａｎｔｒｈａｂｄｏｉｄｔｕｍ ｏｒ, ＭＲＴ） 进行了研究, 与婴幼儿ＭＲＴ相比本例有以下临床病理特点： （１） 以血尿为早期和唯一症状,肿块缺乏特征性ＣＴ 改变; （２） 光镜下大量ＰＡＳ阳性嗜酸性球形小体多位于细胞外, 电镜下细胞外小体由微丝构成并有界膜包绕; （３） 免疫组化显示肿瘤细胞向神经外胚层、横纹肌和组织细胞多向性分化; （４） 肿瘤侵袭力较低, 高度表达ｎｍ ２３－Ｈ１ 蛋白, 随访１８个月术后化疗效果佳, 提示其恶性度较婴幼儿ＭＲＴ 低。     

藏红花素对人膀胱移行细胞癌T24细胞裸鼠移植瘤的实验研究

目的检测藏红花素（crocin）对人膀胱移行细胞癌T24细胞株裸鼠移植瘤的作用。方法12只裸鼠右后腿背侧皮下接种T24移植瘤细胞后随机分为PBS对照组（6只）和50mmol/L藏红花素治疗组（6只）。从接种后第28d开始,每3d一次于肿瘤局部注射给予PBS或藏红花素,每3d测量1次肿瘤大小,并绘制移植瘤生长曲线;处理后第21d杀鼠摘取移植瘤,光镜、电镜观察肿瘤组织形态改变;RT-PCR检测Bcl-2、Bax mRNA表达;SP-免疫组织化学法分析sur-vivin、cyclinD1蛋白表达。结果藏红花素对人膀胱癌T24细胞裸鼠移植瘤的生长具有抑制作用,抑制率达28.7%。HE染色结果显示肿瘤标本内出现片状坏死灶;电镜观察可见凋亡的形态学改变;RT-PCR检测结果显示Bcl-2的表达水平下降,而Bax的表达水平上调;免疫组化结果显示经藏红花素处理后survivin、CyclinD1的表达下调。结论藏红花素能够抑制人膀胱癌T24细胞裸鼠移植瘤的生长,作用的分子机制与下调Bcl-2、survivin、cyclinD1和上调Bax基因表达有关。     

树突状细胞(DC)瘤苗治疗恶性黑色素瘤的疗效观察

目的:探讨树突状细胞瘤苗联合化疗治疗恶性黑色素瘤的疗效及不良反应。方法:采用多药联合化疗方案续贯联合树突状细胞瘤苗治疗32例恶黑患者,4周为一疗程,连续4个疗程。化学治疗组31例单纯采用联合化疗,方法及药物剂量均同生物化疗组。不良反应依据WHO化疗药物急性及亚急性不良反应分度标准判断。结果:生物化疗组32例中CR 3例,PR18例,有效率65.63%;化学治疗组31例中CR 1例,PR 11例,有效率38.71%。生物化疗组与化学治疗组疗效差异有显著性(P0.05)。两组均无治疗相关性死亡。两组的血液学毒性、消化道反应、肝功能损害、肾功能损害、神经毒性等方面差异无显著性(P0.05)。经对症处理后缓解,不影响治疗。结论:将DC细胞瘤苗免疫治疗与化学治疗有机地结合,充分发挥综合治疗的优势,有提高Ⅲ/Ⅳ期恶性黑色素瘤患者疗效的作用。     

病毒疫苗制备用不同核型VERO细胞系在裸鼠体内致癌/致瘤性的系统实验研究

生产疫苗用细胞系可能具有致瘤性,一些常用的细胞系需要检查不同代次有无致癌性。在建立传代细胞种子库与工作库基础上,对研制生产病毒活疫苗所用8株VERO细胞系在219只裸鼠进行了致癌(瘤)实验。本研究结果表明,VERO细胞染色体核型可发生变异,亚四倍体JA株与超二倍体KA株具有强的致癌性,不能用于致弱活病毒疫苗制备,但可替代HeLa细胞系用作恶性肿瘤阳性对照细胞。筛出无致瘤性的YB、dC、M和JB株亚二倍体VERO细胞系,可替代BHK-21细胞用于狂犬病减毒活疫苗制备。VERO细胞系染色体遗传相对稳定。不同代次变化不大。研究发现细胞染色体遗传特征决定致瘤性质并具有种属特异性,不同核型细胞致瘤性不同,细胞染色体数目变异大小和致癌性成正相关,通过体内外交替选育可在裸鼠体内快速选育成功高变异率肿瘤细胞系。高变异率HeLa或VERO细胞系移植于裸鼠可能产生恶性横纹肌样瘤。因此,应当强调疫苗生产用细胞系致瘤性评价的重要性。     

人喉癌裸鼠移植瘤模型的建立及部分生物学特性研究

用人喉癌手术切除标本建立了裸鼠移植瘤模型,已传至13代。原代移植成功率为66.7％,潜伏期30～70d;鼠间传代移植成功率为100％,潜伏期14～19d,生长稳定。经光学显微镜检查,各代移植瘤组织结构与原人喉癌组织基本一致。电镜检查证明,具有人喉癌特征,癌细胞间有大量桥粒,细胞浆中可见张力原纤维,有的张力原纤维与桥粒相连。细胞表面有较大的指状突,核膜较规则,胞浆中线粒体较多。     

Characterization of Effector Cells against B16 Melanoma in Mice Inoculated with Allogeneic Spleen Cells

Inbred C57BL/6 (B6) mice which had received an inoculation of allogeneic spleen cells showed remarkable antitumor activity against syngeneic tumor challenge with B16 melanoma cells 3 days after the allogeneic cell inoculation. This antitumor activity was not specific to the inoculated alloantigen, since the challenging B16 cells are syngeneic to B6 mice and since it was induced by BALB/c spleen cells as well as C3H/He spleen cells. The antitumor activity was sensitive to an in vivo treatment with anti-asialo GM1 (AGM1) antiserum or anti-Thy.1 monoclonal antibody (mAb) just before the tumor challenge and was resistant to an in vivo treatment with anti-CD8 (Ly. 2) mAb. These results suggest that AGM1+Thy.1+CD8– activated natural killer (NK) cells were generated by alloantigen inoculation and took an important part in the antitumor effect of the alloantigen inoculation.     

口蹄疫病毒多基因重组质粒在BHK-21细胞中的表达

利用定点突变的原理,获得包含有口蹄疫病毒P1,2A,3C及部分2B编码区的目的基因片段,KpnⅠ和XbaⅠ双酶切后,定向克隆于真核表达质粒载体pcDNA3.1（+）,经筛选、鉴定及DNA序列分析后,将重组质粒pcDNA3.1/P12X3C转染BHK-21细胞,通过双抗体夹心ELISA方法和间接免疫荧光标记方法,检测细胞中表达的口蹄疫病毒抗原。结果表明,口蹄疫病毒基因片段正确克隆到真核表达质粒载体上,重组质粒pcDNA3.1/P12X3C可在BHK-21细胞中表达FMDV目的蛋白。     

抗癌方对裸鼠移植性人肝癌细胞形态学及P21waf1/Cip1蛋白表达的影响

为了探索中药抗癌方的疗效机理,采用裸鼠移植性人肝癌细胞,分中药组（ＴＣＭ）、环磷酰胺（ＣＴＸ）组和空模组对照治疗试验。结果发现：中药组中癌细胞的形态改变以凋亡为主,而ＣＴＸ组中癌细胞的形态改变主要为坏死。在可疑凋亡细胞处,光镜常见Ｐ２１＾Ｗａｆ１／Ｃｉｐ１表达。其疗效机理与诱导ＨｅｐＧ２调亡,提高Ｐ２１＾Ｗａｆ１／Ｃｉｐ１蛋白表达有关。     

牛肠道病毒（MZ—468株）对P615移植瘤及人癌细胞增殖的影响

本文进行了牛牛肠道病毒(MZ—468株)对P_(615)移植瘤和体内、外对人癌细胞增殖影响的实验研究,结果表明,MZ—468株病毒可以明显抑制P_(615)移植瘤的生长(P<0.01),明显延长荷瘤小鼠的生存时间(P<0.05);同时该病毒不仅可以在体外杀伤人癌(HeLa、AGZY-83—a和LTEP-a-2)干细胞,抑制其细胞集落形成,而且可以在体内抑制人癌细胞(HeLa和AGZY-83—a)异种移植瘤的生长。这充分提示MZ—468株病毒对动物和人的固体瘤具有比较明显的抗肿瘤作用。     

蛇毒金属蛋白酶抑制剂抗小鼠黑色素瘤肺转移

探讨蛇毒金属蛋白酶抑制剂BJ46a抗肿瘤侵袭转移作用。以BJ46a为目的基因,选择杆状病毒表达系统生产重组BJ46a蛋白,ProBondTM亲和层析纯化后处理黑色素瘤细胞B16,经尾静脉接种C57BL/6小鼠,建立B16细胞实验性肺转移模型,20天后以颈椎脱臼法处死小鼠,观察肺组织病理学变化。结果表明：不同浓度重组BJ46a蛋白处理组肺部转移瘤数分别为1.1±0.83、0.9±0.7,明显低于对照组（6.3±3.00,P<0.001）和空白对照组（10.7±5.73,P<0.001）,光镜下对照组肿瘤病理学征象明显,而重组BJ46a蛋白处理组瘤结节小。研究结果首次证明了重组BJ46a蛋白能抑制小鼠黑色素瘤细胞的侵袭转移,为其作为抗肿瘤侵袭转移药物的进一步研制和开发应用提供理论依据和前提条件。探讨蛇毒金属蛋白酶抑制剂BJ46a抗肿瘤侵袭转移作用。以BJ46a为目的基因,选择杆状病毒表达系统生产重组BJ46a蛋白,ProBond™ 亲和层析纯化后处理黑色素瘤细胞B16,经尾静脉接种C57BL/6小鼠,建立B16细胞实验性肺转移模型,20天后以颈椎脱臼法处死小鼠,观察肺组织病理学变化。结果表明：不同浓度重组BJ46a蛋白处理组肺部转移瘤数分别为1.1±0.83、0.9±0.7,明显低于对照组（6.3±3.00,P<0.001）和空白对照组（10.7±5.73,P<0.001）,光镜下对照组肿瘤病理学征象明显,而重组BJ46a蛋白处理组瘤结节小。本研究结果首次证明了重组BJ46a蛋白能抑制小鼠黑色素瘤细胞的侵袭转移,为其作为抗肿瘤侵袭转移药物的进一步研制和开发应用提供理论依据和前提条件。     

Immunological Studies on Antisera of Mice Immunized with Dried or DEPC-treated Ehrlich Ascites Tumor Cells

Intracellular arylsulfatases from Klebsiella aerogenes W70 cells grown in methionine medium (M enzyme) and inorganic sulfate medium containing tyramine (T enzyme) were purified respectively by fractionation with (NH₄)₂SO₄, followed by successive chromatographies on DEAE cellulose, hydroxylapatite, Sephadex G-100 and DEAE Sephadex A-25. On polyacrylamide gel electrophoresis, the two enzymes gave single bands with the same mobilities. Molecular weights of both, determined by SDS gel electrophoresis and by Sephadex G-100 chromatography, were 47,000 and 45,000, respectively. Their activities were maximal at pH 7.5. The affinities of the enzymes (M and T enzymes) for their substrate (Km) and the maximum velocity of hydrolysis (V_max) were enhanced by addition of electron withdrawing substituents. The enzymes were inhibited by inorganic phosphate, cyanide, hydroxylamine and tyramine. The inhibition by tyramine was competitive (Ki = 1.0 × 10^?4 m). These results show that the two enzymes were identical. This was confirmed by the fact that mutant strains, which were unable to synthesize arylsulfatase when grown with methionine, could also not synthesize the enzyme when grown with tyramine.     

Bevacizumab 联合吉西他滨对荷肝癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用

目的:探讨抗血管生成药物Bevacizumab联合吉西他滨对人肝癌裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用。方法:构建人肝癌细胞HepG2裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为空白对照组、Bevacizumab组、吉西他滨组和联合用药组。观察用药前后肿瘤体积,绘制肿瘤生长曲线;应用免疫组化检测肿瘤微血管密度(MVD);Western Blot检测Bcl-2蛋白的表达。结果:Bevacizumab和吉西他滨单药均能抑制肿瘤生长,两药联合疗效明显增强(P=0.000)。与对照组和吉西他滨组相比,Bevacizumab组和联合用药组能明显抑制肿瘤血管生成,MVD值均明显降低,以联合用药组最为明显(P均0.000)。Bevacizumab和吉西他滨单药均能下调Bcl-2的表达,两药联合下调作用明显增强。结论:Bevacizumab联合吉西他滨能增强对人肝癌裸鼠移植瘤的生长及微血管生成的抑制作用,其机制可能与调控Bcl-2的表达有关。     

放线菌素23-21微生物检定法及HPLC法比较

采用微生物检定法测定放线菌素２３－２１的抗菌活性,检定菌为枯草芽孢杆菌。当放线菌素２３－２１的浓度为０．９１～４．３７μｇ／ｍｌ时,其抑菌圈直径与反应剂量有线性关系。经生物学统计分析,实验结果可靠。并与高效液相色谱法（ＨＰＬＣ）进行对照检测,实验结果基本吻合。