细胞周期及DNA损伤剂引起的细胞NAD含量变化及其意义

本文观察了FL细胞中ADP-核糖基转移酶(ADPRT)底物NAD含量的细胞周期性变化及其与DNA复制之间的关系。FL细胞NAD含最在G_1期最高,而在S期DNA合成高峰后0—3小时(S/G_2期)达到最低点。ADPRT抑制剂3 AB能够抑制NAD含量的细胞周期性变化,而且S期DNA合成亦受到抑制,并呈现S期延长,提示ADP-核糖基化作用可能参与DNA复制过程。本文还观察了三种DNA损伤剂MNNG、MMS及4NQO对处于细胞周期不同时相的FL细胞NAD含量的影响,以及ADPRT抑制剂3 AB及尼克酰胺对此影响的作用。证明ADPRT抑制剂可以特异地抑制DNA损伤性NAD含量下降而对正常FL细胞NAD含量及代谢抑制剂2,4-DNP所致的NAD含量下降没有影响。从而有可能建立一个以测量细胞内NAD含量为指标的简便、快速、特异的检测DNA损伤因子的方法。     

哺乳动物细胞DNA辐射损伤与修复的研究——Ⅰ.γ-线引起人外周血转化淋巴细胞DNA链的断裂与重接

~(60)Coγ-线照射人外周血转化淋巴细胞后,即刻经碱性蔗糖梯度(5～20%)超离心沉降分析,结果表明随照射剂量(1～6Krad)增大,DNA单链断裂亦增加。3Krad照射细胞经与自体血清37℃保温在2小时以内,DNA断裂链重接分子随保温时间的延长而逐渐增加,然未见完全修复。若继续保温至8小时后,DNA重接分子又发生断裂,至24小时后已重接好的DNA沉降峰几乎消失,并在离心管口出现DNA降解分子,同时细胞活力降低,较保温前下降28%。可以设想DNA重接分子的再断裂是一种不可逆的生化变化,且与细胞死亡有关。     

哺乳动物细胞DNA辐射损伤与修复的研究 Ⅰ.γ-线引起人外周血转化淋巴细胞DNA链的断裂与重接

~(60)Coγ-线照射人外周血转化淋巴细胞后,即刻经碱性蔗糖梯度(5～20%〕超离心沉降分析,结果表明随照射剂量(1～6Krad)增大,DNA单链断裂亦增加。3Krad照射细胞经与自体血清37℃保温在2小时以内,DNA断裂链重接分子随保温时间的延长而逐渐增加,然未见完全修复。若继续保温至8小时后,DNA重接分子又发生断裂,至24小时后已重接好的DNA沉降峰几乎消失,并在离心管口出现DNA降解分子,同时细胞活力降低,较保温前下降28%。可以设想DNA重接分子的再断裂是一种不可逆的生化变化,且与细胞死亡有关。     

两种类型细胞DNA辐射损伤与修复作用的比较观察

本文比较了对射线敏感的鼠血淋巴细胞与不敏感的鼠白血病L_(7712)细胞DNA辐射损伤及其重接修复的能力,观察到两种类型细胞DNA受射线辐射损伤断链的程度无明显差别;然在DNA断链重接修复的能力上,则不敏感的L_(7712)细胞比敏感的淋巴细胞强,这可能是两者差别的分子基础.     

激光、血卟啉对肿瘤细胞DNA单链断裂及其重接的影响

用简化的Kohn氏碱洗脱法,观察了光敏剂血卟啉衍生物(HPD)对小鼠S-180肿瘤细胞DNA单链断裂及其重接修复的影响。激光HPD能导致S-180细胞DNA单链断裂明显增加,而且这种断裂随着保温时间的延长,继续增多。在本实验条件下没有观察到HPD对X线的增敏作用,HPD不能增加X线所致的DNA单链断裂,也不能影响其重接。单链断裂重接动力学的实验进一步证明了这个论点。     

羟磷灰石离心法及其在细胞DNA辐射损伤和修复研究中的应用

Ahnstrm等在1973年首先用羟磷灰石(以下简称HA)层析法检测DNA单链断裂。该法较经典的硷性蔗糖梯度离心法操作简便,灵敏度高。我们根据本室条件,按照Kanter等的方法稍加改进,用国产HA建立了HA离心分离检测DNA单链断裂及其重接的技术,并用该法观察了小鼠白血病L_(7712)细胞DNA单链断裂及其重接。材料与方法(一)细胞取郑升等建立的小鼠腹水型淋巴性白血病细胞(L_(7712)),由615纯种小鼠     

衰老过程中大白鼠脾细胞的DNA单链断裂与重接能力的变化

 DNA被紫外线损伤后,由DNA切除修复酶切除嘧啶二聚体,随之以另一条正常的DNA链为模板修复合成DNA片段,最后由DNA连接酶将新合成的DNA片与原有的DNA链连接。本文用荧光法测定DNA修复过程中DNA单链的断裂及重接能力与衰老的关系。结果表明,不同年龄大鼠脾细胞均具有修复DNA单链断裂的能力,DNA单链断裂重接的能力与年龄有相关性,断乳鼠及青年鼠的脾细胞当保温至30min时,即开始了DNA链的重接,保温90min后则恢复到原有水平;而老年鼠脾细胞保温至90min时才开始DNA链的重接,保温150min,尚未恢复到原有水平。还发现,断乳鼠及老年鼠脾细胞的单链DNA含量高于青年鼠。     

SSB蛋白与ssDNA相互作用的动力学和可视化研究

研究大肠杆菌单链结合蛋白(single-stranded DNA-binding protein,SSB)与单链DNA(single-stranded DNA,ssDNA)的相互作用对于了解其在DNA复制、重组和修复中的作用是非常重要的。通过表面等离子共振技术(surface plasmon resonance,SPR)得到了在有、无镁离子的情况下,SSB与ssDNA两者的平衡解离常数(equilibrium dissociation constant,KD)分别为9.67×10-7M和4.79×10-7M,阐明了镁离子对于两者作用形式的影响。利用原子力显微镜技术分别观察SSB蛋白、ssDNA和SSB-ssDNA复合物的成像,为下一步研究SSB在DNA代谢中作用模式的单分子可视化奠定了基础。     

腾冲嗜热菌单链 DNA 结合蛋白 SSB2 和 SSB3 新的单链 DNA 结合特性

摘要：【目的】揭示腾冲嗜热菌中两个单链DNA结合蛋白SSB2和SSB3的全新的底物结合功能及其不同的体内表达模式。【方法】利用腾冲嗜热菌复制起始位点附近的长度较短的单链DNA为底物,采用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳及western blot方法,研究SSB2和SSB3体外单链DNA结合特征和体内表达模式。【结果】SSB2 与35nt的复制起始区单链DNA（ssDNA）结合, 形成单个SSB2-DNA复合物;当与59 nt ssDNA结合时,可以随着蛋白浓度的递增形成一个或两个SSB2-DNA复合物;而与70n     

Tris对高LET碳重离子辐照下质粒DNA链断裂的保护作用

利用100 keV/μm碳离子束(初始能量为290 MeV/u)照射溶解于纯水、10 mmol/L Tris、1 mmol/L EDTA及TE 缓冲液中的pUC19质粒DNA.通过琼脂糖凝胶电泳技术分析了不同溶液中各种形态DNA分子所占份额,并计算得到不同剂量下平均每个质粒分子中单链断裂(SSB)及双链断裂(DSB)的数目.发现Tris通过抑制SSB和DSB的产生对碳重离子辐照下的质粒DNA有明显的保护作用,而EDTA能够加剧SSB的产生而抑制DSB的形成.     

竹红菌甲素光敏作用所致的HeLa细胞DNA单链断裂重接的研究

本文采用羟基磷灰石离心法对竹红菌甲素光敏作用所致的HeLa细胞DNA的单链断裂进行荧光定量测定。以单链DNA的含量变化衡量DNA链断裂程度及其修复活性,并与γ射线的作用进行了比较。细胞经γ射线和甲素的光敏作用后,DNA产生单链断裂,当细胞存活率为0.1时,前者是6.0×10~(-10)断裂/道尔顿,后者是2.3×10~(-10)断裂/道尔顿,两者之比为2.8。细胞本身具有修复能力,当最初的单链断裂频率相等时,γ射线处理的细胞其DNA单链断裂重接能力高于光敏作用的细胞。后者的修复能力能被羟基脲、放线菌素D及丁酸钠等所抑制。细胞修复能力的差别指出两种作用产生的单链断裂的化学性质有重要差别。     

SSB蛋白的高效表达及其与ssDNA的相互作用

大肠杆菌单链结合蛋白SSB在DNA复制、重组和修复中起着重要作用。为研究单链结合蛋白SSB的体外生物功能构建了融合蛋白SSB的表达载体并使其高效表达及易于纯化。ssb基因片段是以E.coli K-12基因组为模板经PCR扩增获得,并通过基因的体外拼接成功构建了表达载体pQE30-ssb。重组菌株M15/ pQE30-ssb经过IPTG的诱导表达了蛋白SSB。收集菌体细胞、超声波破碎后离心取上清进行SDS-PAGE分析,结果表明有一与预期分子量（20.6 kD）相应的诱导表达条带出现,其表达量约占全细胞蛋白的30％且以可溶形式存在。利用固定化金属离子（Ni2+）配体亲和层析柱纯化融合蛋白SSB,其纯度达到90％。通过凝胶层析和等离子共振技术对SSB的生物功能进行了系统研究分析。结果表明,SSB蛋白以四聚体形式与单链DNA分子结合,其亲和力常数（KD）为4.79×10-7 M。     

一种简化的检测细胞DNA单链断裂及其重接修补的Kohn碱液洗脱法

Kohn碱液洗脱法,可用于研究电离辐射6或紫外线照射后细胞的DNA损伤与修补,致癌化合物对离体及体内细胞DNA的损伤,以及细胞的正常DNA复制。国内已开始应用(也有采用pH值较低的洗脱液研究DNA的双链断裂及重接),近有最新综述。我们曾将此法简化,自行设计一种简便的玻璃洗脱器,省去所有蠕动泵,改用廉价的“由”字夹控制洗脱液流速,又用便宜的玻璃比色杯     

用DNA介导的基因转移法提高XP细胞对紫外辐射损伤的修复能力

本文用两种DNA介导的基因转移法(DNA—磷酸钙共沉淀法和电脉冲刺激法),将具有切除修复功能的人HeLaS3细胞的DNA,植入切除修复缺陷的着色性干皮症(XP)细胞中。实验结果表明:植入HeLaS3 DNA后,可以部份恢复XP细胞DNA切除修复的功能,提高其对紫外线辐射损伤的抗性。表现为转化细胞在UV_(254)照射后存活率的显著升高和非周期DNA合成能力的增强。     

科技期刊目录索引选

签础徽生物朱怡文:酵母(soee‘。ro.yc。:。,,。,i,ia。)的PEG电 泳核型比较分析。实验生物学报,2l(1):23, 19880曹恩华等:竹红菌甲素光敏作用所致的HeL。细胞 DNA单链断裂重接的研究。实验生物学报,21 (1):79,19880朱群等:邻苯二酚氧化酶基因在根癌农杆菌中的表 达—多用途基因载体的构建。实验生物学报, 21(2):l哆1,1 9880金健健等:v一fo:基因对NIH3T3细胞转化的研究。 实验生物学报,21(峪):467,1988。黄永秀等:大尺蟆核型多角体病毒DN人和蛋白质的 特性。武汉大学学报,1:121,19880赵书申等:腐叶薯孩的黑曲霉发酵和薯箱皂昔配基的 …     

碱性凝胶电泳定量测定非标记DNA的单链断裂

DNA单链断裂(Single Strand Breaks,SSB)的测定是研究DNA损伤与修复的重要检测方法之一。用碱性琼脂糖凝胶电泳测定SSB的最早报告见于1979年,但直到1986年才由Freeman推导出相应的定量计算公式,此后该方法被广泛应用。该法除不需同位素标记和操作简单快捷外,还能够进行定     

一种简化的检测细胞DNA单链断裂及其重接修补的Kohn碱液洗脱法

Kohn碱液洗脱法,可用于研究电离辐射或紫外线照射后细胞的DNA损伤与修补,致癌化合物对离体及体内细胞DNA的损伤,以及细胞的正常DNA复制.国内已开始应用(也有采用pH值较低的洗脱液研究DNA的双链断裂及重接),近有最新综述. 我们曾将此法简化,自行设计一种简便的玻璃洗脱器,省去所有蠕动泵,改用廉价的“由”字夹控制洗脱液流速,又用便宜的玻璃比色杯代替石英荧光比色杯,满足了实验要求.我们的方法发表后,引起了国内同行的兴趣.现     

氯化锂对KT-1/A3细胞增殖和凋亡的影响

目的：研究氯化锂(LiCl)在体外对KT—1／A3白血病细胞增殖及凋亡的影响。方法：采用液体培养实验,MTT实验,集落培养实验为指标观察LiCl对KT—1／A3细胞增殖的影响,采用DNA片段凝胶电泳及流式细胞检测为指标检测细胞凋亡。结果：①不同浓度的LiCl(5mM—25mM)对KT—1／A3细胞具有抑制增殖的作用,这种增殖抑制作用呈剂量依赖关系。②在LiCl(20mM)作用72h的DNA凝胶电泳谱可见DNA Ladder及流式细胞仪检测可见凋亡特有的AP峰,提示LiCl可诱导KT—1／A3细胞凋亡。绪论：LiCl能抑制KT—1／A3白血病细胞增殖和诱导凋亡。     

过热处理对人类食管癌细胞及中国仓鼠细胞DNA修补能力的抑制作用

人类食管癌细胞Eca—109在受8,000radγ射线照射前,或照射后,用44℃处理30分钟,会全部抑制掉随后在37℃保温1.5小时内的DNA断链重接修补。照前42℃处理也能起部份的抑制作用,照后42℃处理的抑制程度与照前处理的相同,但似乎在42℃处理的时间内已完成了不受抑部份的修补。中国仓鼠细胞CHO-K_1在紫外线照前受到44℃处理30分钟,同样会全部地抑制掉照后37℃保温3小时内的DNA切除修补;照前用42℃处理,也有部份抑制作用。     

淡色库蚊幼虫在发育过程中唾液腺细胞核DNA变化的细胞化学研究

(1)应用DNA—孚尔根细胞光度术与。~3H-TdR放射自显术相结合的方法分析每一细胞,发现在库蚊幼虫早期发育中,唾液腺细胞核DNA含量基本上呈2~n倍数增加。但在各龄期中均有一定比例的U细胞,其DNA含量虽偏离2~n倍数,但并非正在合成DNA;四龄后期此种细胞可达60%以上,并相应地在染色体上不同区域观察到DNA的不同积累,表明在库蚊幼虫唾液腺细胞核内DNA存在不均等复制。(2)用细胞光度法测定了库蚊精原细胞,脑神经节细胞分裂中期染色体和精子DNA含量,算得每单倍体DNA含量0.568微微克。以此为确定倍数值的基数,显示一龄幼虫唾液腺细胞核DNA含量主要为16C,二龄居于16C—32C之间,三龄64C,四龄居于128C—256C之间,最高倍数值860C。(3)放射自显术显示,连续复制居于S期的前期和中期,合成染色体大部分DNA;不连续复制居于S期的后期,合成的DNA所占比例较低。