利用PCR-SSCP对人MINK 基因的研究

人类MINK基因的两种突变导致长QT综合征（LQTS）。我们设计了两对引物利用PCR-SSCP结合直接测序法在病人及健康者中对MINK基因进行分析,结果发现第149位密码子产生A→G转换。在所研究的对象中,此变化在病人及正常对照者中均有存在。提示MINK基因的此突变性质为非病理性的多态突变。 Abstract:Two novel mutations that have been described in human MINKgene are corresponding for Long QT Syndrome (LQTS). Two pairs of primers were designed to screen hMINKgene both in patients and in normal controls, We performed screening by PCR-SSCP analysis combining with direct sequencing. It showed a single A→G transition at position 149. This change was found in both patients and healthy subjects.     

PCR—SSCP检测肺癌细胞p53基因点突变

应用溴化乙锭（ＥＢ）染色的ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术对１０例非小细胞性肺癌组织标本ｐ５３基因外显子５￣８进行分析,其中１例在外显子５￣６;１例在外显子７;２例在外显子８发现异常电泳带。对１例经ＳＳＣＰ检测异常的ｐ５３基因进行核酸序列分析,发现第２８０位密码子ＡＣＡ,其编码的氨基酸由丝氨酸变成半胱氨酸。结果证实：非小细胞性肺癌与ｐ５３基因突变有关;ＥＢ法ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术是一种简便、可靠的点突变检测法。     

PCR—单链构象多态性分析对p53基因点突变检测的研究进展

单链构象多态性（ＳＳＣＰ）对分析基因的突变是一种有效的手段,并具有其独特的优点。ＰＣＲ与ＳＳＣＰ结合后检测灵敏度更高,而在许多类型的肿瘤都存在有ｐ５３抑癌基因的突变,章综述了ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分析技术检测ｐ５３基因突变的进展。     

PCR-SSCP检测结核分枝杆菌利福平耐药相关基因rpoB突变

目的 建立聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)技术快速检测结核分枝杆菌利福平(RFP)耐药相关基因rpoB突变.方法 设计结核分枝杆菌RFP耐药相关rpoB基因PCR引物,建立PCR-SSCP技术检测临床菌株rpoB基因的突变导致的运动变位,同时采用PCR直接测序(PCR-DS)技术检测rpoB基因突变,并对上述方法检测结果进行分析和比较.结果 84株临床菌株均含有rpoB基因;PCR-SSCP和PCR-DS检测结果显示,56株RFP敏感菌株中rpoB基因分别有3株和2株检测出突变,检测特异性分别为94.6％ (53/56)和96.4％(54/56);28株RFP耐药菌株中rpoB基因分别有27株和28株发生突变,检测灵敏度分别为96.4％和100％.结论 本研究建立的PCR-SSCP技术能快速、简便、特异、敏感地检测结核分枝杆菌利福平耐药基因rpoB突变,具有临床应用前景.     

PCR－SSCP检测肺癌细胞p53基因点突变

应用溴化乙锭(EB)染色的PCR-SSCP技术对10例非小细胞性肺癌组织标本p53基因外显子5～8进行分析,其中1例在外显子5～6;1例在外显子7;2例在外显子8发现异常电泳带.对1例经SSCP检测异常的p53基因进行核酸序列分析,发现第280位密码子由AGA变成ACA,其编码的氨基酸由丝氨酸变成半胱氨酸.结果证实:非小细胞性肺癌与p53基因突变有关;EB法PCR-SSCP技术是一种简便、可靠的点突变检测法.     

非同位素PCR－单链构象多态性技术的建立和应用

ＰＣＲ－单链构象多态性技术问世以来,成为研究基因突变的工具,特别是在分子肿瘤学研究中,广泛应用于癌基因,抑癌基因突变的研究,常规ＰＣＲ－ＳＳＣＰ采用同位素标记ＰＣＲ产物,测序板电泳分离突变,在操作和费用上有种种局限,文章建立了一种非同位素ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术;通过不对称ＰＣＲ获得单链,普通ＰＡＧＥ分离,经银染检出突变,用这种方法,还研究了四株鼻咽癌细胞株ＣＮＥ１,ＣＮＥ２,ＨＫ１和ＳＵＮＥ１中肿瘤     

应用PCR-SSCP快速鉴定结核分枝杆菌复合群

通过聚合酶链反应（ＰＣＲ）－单链构象多态性（ＳＳＣＰ）技术分析结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌临床株的１６ＳｒＤＮＡ基因。６０例临床标本中,２０例为阳性,与传统方法比较无差异。其中分型：１８例为结核分枝杆菌,２例为结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌双重感染。２０例阴性标本中,ＰＣＲ－ＳＳＣＰ又检查出５例阳性。２０例对照标本中,３种传统方法与ＰＣＲ－ＳＳＣＰ法均检测为阴性。全部试验３ｄ报告结果。结核分枝杆菌复合群和卡介苗的图形相同以外,其它分枝杆菌的ＰＣＲ－ＳＳＣＰ电泳图谱均有差异。所以,应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术快速     

应用单链构象多态性－聚合酶链反应研究我国大麦黄花叶病毒株系的分化

根据致病性差异,我国大麦黄花叶病毒（ＢａＹＭＶ）存在若干不同株系,血清学和核酸杂交等技术不能区分这些株系。但还由于致病性不同,各株系的核酸序列间必定存在差异。最近建立的单链构象多态性。聚合酶链反应（ＳＳＣＰ－ＰＣＲ）技术能灵敏而有效地诊断和区分核酸序列间的差异,从而进一步证实我国ＢａＹＭＶ不同株系的分化。     

中国广东汉族人群核苷酸修复基因hMTH1 遗传多态性研究

为研究中国南方汉族人群核苷酸修复基因hMTH1遗传多态性,应用聚合酶链反应-单链构象多态性技术检测172名健康人外周血白细胞hMTH1基因启动子及全部5个外显子多态性,并进行DNA测序。结果发现hMTH1基因启动子及外显子1序列保守,未见突变;外显子2第73位碱基存在T→C杂合型突变,基因型TT和TC频率分别为93.02%、6.98%,等位基因T和C频率分别为96.51%、3.49％;外显子3第45位遗传密码存在T→C杂合型突变,基因型TT和TC频率分别为95.35%、4.65%,等位基因T和C频率分别为97.67%、2.33%,该多态性为首次发现;外显子4第83位遗传密码存在G→A杂合型突变,基因型GG和GA频率分别为89.53%、10.47%,等位基因G和A频率分别为94.77%、5.23％;外显子5第119位氨基酸遗传密码存在C→T杂合型突变,基因型CC和CT频率分别为95.93%、4.07%,等位基因C和T频率分别为97.97%、2.03％。Abstract: In order to study the genetic polymorphisms of nucleotide repair gene hMTH1 in southern Chinese Han population, the polymorphisms of the gene’s promoter and its five exons among peripheral blood lymphocytes of 172 Chinese Han people were analyzed with polymerase chain reaction-single strand conformation polymorphism (PCR-SSCP) and DNA sequencing. The sequences of the promoter and exon 1 of hMTH1 gene were conserved. A T to C polymorphism was detected at the 73th base in exon2. The genotype frequencies of TT and TC were 93.02% and 6.98%, respectively. The allelic frequencies of T and C were 96.51% and 3.49％, respectively. A T to C polymorphism was detected at codon 45 in exon3, which was first reported. The genotype frequencies of TT and TC were 95.35% and 4.65%, respectively. The allelic frequencies of T and C were 97.67% and 2.33%, respectively. A G to A polymorphism was detected at codon 83 in exon4. The genotype frequencies of GG and GA were 89.53% and 10.47%, respectively. The allelic frequencies of G and A were 94.77% and 5.23％, respectively. A C to T polymorphism was detected at codon 119 in exon5. The genotype frequencies of CC and CT were 95.93% and 4.07%, respectively. The allelic frequencies of C and T were 97.97% and 2.03％, respectively.     

PCR－SSCP分析实践

介绍了一种在一般实验室都能使用的适用于SSCP分析电泳的改良方法．并对如何设计引物、选择PCR条件和分析结果进行了讨论．     

PCR-SSCP的效果分析

PCR-SSCP是一种以PCR为基础的单链构象多态性分析技术,是DNA已知突变的检测或未知变异分析中常用和实用的技术之一。影响SSCP试验效果的因素有很多,本研究主要对凝胶浓度和是否添加甘油两个因素进行分析与探讨。结果表明,凝胶浓度12%和添加甘油终浓度10%的条件下可以得到满意的结果。     

猪H-FABP基因PCR-SSCP分析

应用PCR-SSCP方法分析了H-FABP基因在山西白猪、马身猪、大白猪、长白猪和杜洛克猪5个猪种的多态性。结果表明:在H-FABP基因内含子1中发现了多态位点,该位点上具有两个等位基因A和B,马身猪BB基因型频率最高,B等位基因频率明显高于A等位基因频率;其余4个猪种AA基因型频率最高。序列测定的结果表明,SSCP的变异是由碱基C→T的替换造成的。     

两种蛙Sox基因的PCR-SSCP分析

采用PCR技术,以参考人SRI,基因HMG-box的保守区序列而设计一对特异引物,扩增了黑斑蛙和金线蛙的Sox基因。结果两种蛙的雌雄个体均扩增出217bp的基因片段,与人对照相同。对扩增产物进行SSCP分析显示,两种蛙雌雄个体间的单链迁移率相同,两种蛙之间差异较小,而与人有较大差异。测序表明,两种蛙的Sox序列之间以及与各类物种的Sox基因都有非常高的相似性,充分显示出Sox基因在系统进化上的高度保守性。     

猪MyoG基因3'端PCR-SSCP遗传多态性及其遗传效应

采用PCR—SSCP方法对长白猪、大白猪、杜洛克猪、山西黑猪和马身猪共636头猪的肌细胞生成素（Myogenin,简称MyoG）基因3’端的遗传多态性进行检测,分析MyoG基因对猪的初生体质量、断奶体质量、6月龄体质量和背膘厚的影响。根据已发表的猪MyoG基因3’端侧翼序列设计3对引物,发现F1／R1引物对扩增的片段有多态性。统计结果发现：长白、大白、杜洛克猪种B基因为优势基因,其基因频率分别为0．8807、0．7256和0．8581：山西黑猪种4基因为优势基因,其基因频率为0．9359;马身猪种只检测到4基因。χ^2独立性检验表明,基因型分布在外来猪种（长白猪、大白猪、杜洛克猪）与地方猪种（山西黑猪、马身猪）间存在极显著差异（P〈0．01）。固定效应模型分析结果表明,初生体质量基因型闻差异显著（P〈0．05）,而断奶体质量、6月龄体质量和背膘厚基因型闻差异不显著（P〉0．05）。最小二乘分析结果表明,BB基因型与其它2种基因型比较有较大的初生质量,同似和AB型比较差异极显著（P〈0．01）。因此,推测MyoG基因对个体的初生体质量存在一足的影响,选择带有B等位基因的个体有望提高个体的初生体质量。     

PCR-SSCP技术在假丝酵母属菌种鉴别中的应用

选取中国工业微生物菌种保藏管理中心(CICC)保藏的假丝酵母属的7个种30株菌, 对其rDNA的ITS1区及ITS2区进行了PCR-SSCP指纹图谱分析, 结果表明在假丝酵母属种水平的区分鉴定中, ITS1区与ITS2区的PCR-SSCP图谱均能对本研究所选7个种的菌株进行显著区分, 比较两个区段的PCR-SSCP图谱及鉴别效果, 发现ITS2区的应用效果要优于ITS1区。     

PCR-SSCP技术在微生物检测中的应用

聚合酶链式反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)是一种能够检测DNA突变的分子生物学分析技术,具有快速、简便、灵敏与适于大样本筛选的特点,近年来被广泛应用于生命科学领域的研究。对PCR-SSCP技术在微生物检测研究领域的应用和发展作简要的介绍。     

The congenital long QT syndrome Type 3: An update

Congenital long QT syndrome type 3 (LQT3) is the third in frequency compared to the 15 forms known currently of congenital long QT syndrome (LQTS). Cardiac events are less frequent in LQT3 when compared with LQT1 and LQT2, but more likely to be lethal; the likelihood of dying during a cardiac event is 20% in families with an LQT3 mutation and 4% with either an LQT1 or an LQT2 mutation. LQT3 is consequence of mutation of gene SCN5A which codes for the Nav1.5 Na⁺ channel α-subunit and electrocardiographically characterized by a tendency to bradycardia related to age, prolonged QT/QTc interval (mean QTc value 478 ± 52 ms), accentuated QT dispersion consequence of prolonged ST segment, late onset of T wave and frequent prominent U wave because of longer repolarization of the M cell across left ventricular wall.     

浓香型大曲原核微生物群落的PCR-SSCP解析

采用PCR-SSCP(单链构象多态性)技术对浓香型大曲发酵过程中原核微生物群落结构的变化情况进行了研究, 结果表明: (1)发酵各时期曲样的群落结构相似, 同时也具有多态性; (2)不同微生物群落具有协同和制约的复杂生态学效应; (3)各时期曲样微生物多样性指数均在1.69~2.01之间, 群落结构相对较稳定; (4)各曲样微生物群落相似性位于0.67~1.00之间, 邻近时期样品间的相似性程度较高。