鸡PPARs基因组织表达特性的研究

以8周龄Arber Acres(AA)肉鸡为研究材料,采用RT-PCR和Northern blot方法对鸡PPAR基因组织表达特点进行了研究。RT-PCR半定量检测显示,在检测的10种组织中除胸部肌肉组织外,PPAR-α基因在其他9种组织中都表达,其中较高表达于脑、肺脏、肾脏、心脏和小肠,中等程度表达于胃、肝脏和脂肪,较低表达于脾脏。PPAR-γ基因除了在肝脏和肌肉中没有检测到外,在其他8种组织都有表达,其中高表达于脂肪,其次是脑和肾脏,低量表达于脾脏、心脏、肺脏、胃和小肠。Northern blot检测显示,PPAR-α基因在心脏、肝脏、肾脏和胃这4种组织表达,其中在肝脏杂交信号最强;PPAR-γ基因只在脂肪和肾脏表达,其中在脂肪组织有强的杂交信号。以上结果表明,鸡PPARS基因的组织表达特点同啮齿动物和人基本一致,但也有其自身的特殊性,即PPAR-α基因不在肌肉组织中表达,PPAR-γ基因在肾脏中有高表达。PPAR基因与鸡的多种组织的生长和发育有关。     

鸡骨骼肌卫星细胞的分离培养、鉴定及生物学特性研究

采用I型胶原酶和胰蛋白酶二步消化,经体外培养获得鸡骨骼肌卫星细胞,并通过检测肌卫星细胞特异基因的表达进行鉴定。结果表明：二步消化法适用于鸡骨骼肌卫星细胞的分离和获取,此方法分离得到的鸡骨骼肌卫星细胞表达卫星细胞特异的标志基因desmin和Pax7,并具有良好的增殖和分化能力,为鸡骨骼肌细胞增殖、分化和再生机制的研究提供技术平台。      

陆地棉‘徐州142’纤维不同发育时期蛋白质组比较分析

该研究以陆地棉‘徐州142’为材料,于开花后5、10、15、20、25、30d分别取样(棉铃)代表6个不同时期的棉纤维,利用双向电泳技术比较了棉纤维发育不同时期蛋白质组的变化,以明确不同发育阶段差异表达蛋白质及其功能与纤维发育之间的关系,为棉花产量和品质的改良提供理论依据。结果显示:(1)随着棉花的发育,棉纤维中的总蛋白含量逐渐降低,在开花后5d(5DPA)时棉花纤维中总蛋白的含量最高,达到11.7%,同时2-DE图谱中发现了15个明显的差异蛋白点;(2)运用MALDI-TOF-MS对差异蛋白质点鉴定结果发现,有5个明显的差异蛋白与棉花纤维发育相关,分别是GhSAM、GhPGK、GhCSD、GhFB和GhMDH蛋白;(3)开花后不同时期棉纤维蛋白质组的2-DE图谱表明,GhSAM、GhPGK1和GhMDH 3个蛋白在整个发育期都表达,但GhCSD从15DPA开始表达,GhFB从20DPA开始表达,而且GhSAM在15DPA时蛋白表达量最高,GhPGK1在10DPA时表达量最高,GhMDH、GhCSD和GhFB都是在30DPA时表达量最高。研究表明,棉纤维发育不同时期存在着差异蛋白,且在纤维发育不同时期蛋白的表达量也存在差异,同时这些差异蛋白参与能量代谢、碳代谢、细胞周期调控和发育等途径。     

Gene Expression and Polymorphism of Myostatin Gene and its Association with Growth Traits in Chicken

Myostatin is a member of TGF-β super family and is directly involved in regulation of body growth through limiting muscular growth. A study was carried out in three chicken lines to identify the polymorphism in the coding region of the myostatin gene through SSCP and DNA sequencing. A total of 12 haplotypes were observed in myostatin coding region of chicken. Significant associations between haplogroups with body weight at day 1, 14, 28, and 42 days, and carcass traits at 42 days were observed across the lines. It is concluded that the coding region of myostatin gene was polymorphic, with varied levels of expression among lines and had significant effects on growth traits. The expression of MSTN gene varied during embryonic and post hatch development stage.     

鸡骨骼肌发育过程生肌素的表达

ＭｙｏＤ家族生肌因子ＭｙｏＤ、生肌素（ｍｙｏｇｅｎｉｎ）、ｍｙｆ－５和ｍｙｆ－６／ｈｅｒｃｕｌｉｎ对脊椎动物肌细胞分化和骨骼肌系统的发育成熟具有重要意义,其中生肌素的作用尤为突出,是肌细胞终末分化的关键因素。采用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ和Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹技术检测鸡胚骨骼肌发育过程中生肌素在转录水平的表达动力学,发现在胚胎发育第９ｄ已有鸡肢体骨骼肌生肌素ｍＲＮＡ表达,第１３ｄ达到高峰,第１５ｄ开始下降,第１８ｄ至出生后两周几无可检测的ｍＲＮＡ;而生肌素蛋白则在胚胎发育第１３ｄ方可被检测到,第１５～１８ｄ达到高峰,至出生后两周仍维持在一定水平,表明生肌素的表达存在翻译和翻译后水平的调控。利用鸡生肌素基因上游－２２３／＋４０调控片段为探针对发育不同时期的鸡肌肉组织细胞核抽提物进行Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔｅｒｎ印迹分析。发现一种约３５ｋＤ的核内蛋白与探针有较强结合,结合活性第９ｄ时出现,至第１８ｄ达到峰值,出生后两周时降至难检测水平;另外有一种约１１ｋＤ的核内蛋白的ＤＮＡ结合活性恰好在转录活性下降的第１５～１８ｄ发生,按此情况两种核因子可能对生肌素的转录激活分别起正负调控作用。     

肝细胞生长因子在骨骼肌再生中的作用研究进展

骨骼肌损伤后的修复包括炎症反应期、修复期、组织重塑期三个阶段。而骨骼肌卫星细胞的激活、增殖与分化和骨骼肌伤后的修复有着密切的关系。骨骼肌损伤后,肝细胞生长因子(HGF)可以自分泌、旁分泌或内分泌的形式,调控肌卫星细胞功能,从而影响损伤骨骼肌的再生。其机制研究表明,HGF可能通过与其受体c-met结合,启动相关信号途径,参与骨骼肌卫星细胞激活、增殖、分化和迁移,从而影响骨骼肌再生进程。     

Tx-TnT在不同发育时期的艾维茵鸡和洪山鸡肌肉组织中的表达分析

以艾维茵鸡和湖北省地方鸡种洪山鸡为实验材料 ,借助特异性识别Tx残基肽的单克隆抗体 6B8,采用Western杂交方法 ,检测Tx TnT异构体在洪山鸡和艾维茵鸡 7个发育时期 (孵化第 14d、初生 1日龄、7、14、2 1、2 8和35日龄 )的胸肌和腿肌中的表达差异 ,并与胸肌重进行相关分析。结果表明 ,Tx TnT在腿肌和孵化第 14d的胸肌中均不表达 ,在初生 1日龄后胸肌中的表达随发育逐步增长 ,统计分析发现 ,Tx TnT在艾维茵鸡和洪山鸡胸肌中的表达量具有显著差异 (P <0 0 5 ) ,与胸肌重具有显著相关 (P <0 0 5 )。     

Atrogin-1/MAFbx,a Muscle-Specific Ubiquitin Ligase,Is Highly Expressed in the Smooth Muscle of the Chicken Gizzard

To improve the transformation efficiency of Zygosaccharomyces rouxii by electroporation, glycerol was added to the electroporation buffer and the cells were frozen at ?80 °C. These alterations drastically increased transformation efficiency, and we found that competent cells can be preserved at ?80 °C without decreasing their transformation efficiency for at least 30 d.     

基因芯片在骨骼肌老龄化相关基因表达谱中的应用

对老龄组大鼠 (30月龄 )和年轻对照组大鼠 (3月龄 )的腓肠肌超微结构进行观察 ,可以看到前者肌肉肌纤维萎缩伴有线粒体空泡变性。并进行总RNA抽提、mRNA纯化、探针制备 ,应用基因芯片筛选老龄化相关基因 ,两组大鼠骨骼肌重复出现的差异表达基因 12 7个 ,下调基因涉及能量代谢、信号转导 ,上调基因涉及蛋白质分解、细胞凋亡     

Isolation and Biological Characteristics of Beijing Fatty Chicken Skeletal Muscle Satellite Cells

Abstract

Skeletal muscle satellite cells, a postulated multipotential stem cell population, play an essential role in the postnatal replenishment of skeletal muscles. In the present research, the skeletal muscle satellite cells were isolated from the pectorals of 15-day-old Beijing Fatty Chicken embryos using combined enzymatic digestion of 0.1% collagenase 1 and 0.25% trypsin. Myogenic markers such as MyoD, Pax7 and demin were detected, indicating their skeletal muscle satellite cell identity. Karyotype analysis showed that these in vitro cultured cells were genetically stable. Being exposed to bone morphogen and adipogenic factors, it was proved that they differentiated into osteocytes and adipocytes correspondingly.     

利用基因芯片技术研究两品种鸡脂肪组织差异表达基因

应用包含9024条鸡cDNA的表达谱芯片,对从两品种鸡脂肪组织抽提及纯化的mRNA进行芯片杂交,并对基因表达谱进行分析,旨在筛选高脂肉鸡和白耳蛋鸡脂肪组织差异表达的基因,探讨造成两品种体脂性状差异的分子生物学机理。结果按差异显著阳性标准分析,共筛选出差异表达基因67条,主要涉及脂类代谢、能量代谢、细胞骨架构成、转录和剪接因子以及蛋白质合成与分解等相关基因,此外,还筛选出一些尚未在GenBank上登陆的序列,推测可能是未知的新基因,它们在鸡脂类代谢的过程所起到的作用还需进一步实验证明。     

北京油鸡purH基因结构与表达特征研究

提取北京油鸡8种组织的总RNA,利用RT-PCR检测purH基因mRNA的差异表达。将purH基因完整开放阅读框定向插入pEGFP-N3,构建带有GFP报告基因重组表达载体pEGFP-purH,利用脂质体介导法将其导入北京油鸡体外培养细胞中,进行G418药物筛选和克隆化培养。结果表明：北京油鸡purH基因（GenBank 登录号：EU334506）编码区为1782 bp,编码 593 aa的多肽,转染后24 h、48 h和72 h,pEGFP-purH转染率在10.3 %～53.2 %之间,绿色荧光均匀分布于细胞质与细胞核中,随表达量的增加,绿色荧光在细胞核中聚集成团块状或颗粒状。经药物筛选和克隆化培养,获得表达pEGFP-purH融合蛋白的克隆细胞株,RT-PCR与Western blotting检测确认pEGFP-purH已整合到北京油鸡成纤维细胞基因组中,在优化的条件下,阳性细胞凋亡率、生长与增殖状况与对照组比较差异不显著（P 〉0.05）。     

鸡肉肌苷酸和肌内脂肪等肉品风味性状遗传参数的估计

对鸡肉肌苷酸（Inosine-5¢-Monophosphate,IMP）和肌内脂肪（Intramuscular fat,IMF）等重要肉品风味性状的遗传参数进行了估计,旨在从遗传理论上为确定鸡肉风味品质性状的选育方法提供依据。采用MTDFREML方法对1069只90日龄北京油鸡公鸡的相关性状的遗传力和遗传相关进行了估计,结果表明,胸肌IMP和IMF含量属中等偏低遗传力性状（h2=0.23,0.10）,腹脂重(AFW)、胸肌重(BMY)、胸肌率(BMR)、腿肌重(LMY)、体重(BW)、鸡冠重(CW)和鸡冠率(CWP)的遗传力较高（h2=0.56～0.79）,腹脂率(AFP)、腿肌率(LMR)、睾丸重(TW)和睾丸率(TWP)等性状的遗传力分别为0.24、0.32、0.39和0.35。IMP与胸肌率、腿肌率和尾脂厚呈较低度的表型正相关,与其他性状无明显表型相关;IMF与体重、腹脂率、尾脂厚和脂带宽呈一定程度的表型正相关（rP=0.11～0.33）。IMP与体重和鸡冠率呈中等以上程度的遗传负相关（rA=-0.38,-0.62）,与胸肌率呈较高水平的遗传正相关（rA=0.57）;IMF与体重和腹脂重则呈高度遗传正相关（rA=0.7 5,0.66）,与腹脂率和鸡冠率呈中等水平遗传正相关（rA=0.32,0.40）;IMP与IMF之间呈中低水平的遗传正相关（rA =0.27）。据此推断,可以利用家系法对IMP和IMF含量进行选择提高。     

鸡akirin同源基因的克隆与组织表达分析

Akirin是最近被发现的,在果蝇和小鼠的免疫炎症反应和调控肌肉 发生再生中起着重要作用的新基因．本实验采用电子克隆技术成功克隆获 得了海兰褐鸡Akirin基因的全长编码序列.利用生物信息学方法对Akirin 基因进行序列分析和预测,并利用半定量RT-PCR技术对雏鸡和成鸡的 Akirin基因进行组织表达谱分析．结果表明,鸡Akirin同源基因可读框长 576 bp,进化保守高,编码蛋白的氨基酸序列存在PFAM、RGS、TOP1Bc、 UTG、HMG和low complexity sequence几种结构域,和蛋白激酶C磷酸化位 点、酪氨酸激酶磷酸化位点和 N端豆蔻酰化位点3个功能位点,同时在鸡 Akirin的3′ 非翻译区预测到1个microRNA靶位点．Akirin在鸡的心、脾、 脑等多种组织中广泛表达,推测鸡Akirin基因是一个可能具有多种功能作 用的新基因．本研究将为深入研究鸡Akirin基因功能作用奠定基础．     

鸡胚ESC和SSCs特定基因表达差异的研究

目的:探讨鸡胚胎干细胞(ESC)和精原干细胞(SSCs)在基因表达水平上的差异.方法:传至二代的ESC和SSCs,采用免疫荧光和碱性磷酸酶检测法联合鉴定其干细胞特性,RT-PCR方法检测两者相关基因的表达差异.结果:两种处于未分化状态时的干细胞基因表达存在差异:未分化的ESC表达基因GDF3基因和Nanog基因;SSCs表达特定基因c-kit、Cvh和Stra8基因.结论:两种干细胞在基因表达水平上有差异,为ESC与SSCs在基因水平上的鉴定提供参考依据.     

猪背最长肌中肌肉生长和脂肪沉积相关基因的差异表达和主成分分析

骨骼肌细胞和脂肪细胞在分化生长速度上相对竞争的平衡点是猪肉质和胴体性状的决定因素.利用Oligo功能分类芯片检测了瘦肉型的长白猪和脂肪型的太湖猪在初生、1、2、3、4和5月龄间背最长肌中肌肉生长和脂肪沉积相关基因的动态表达变化.差异表达分析结果显示,在初生至5月龄的品种间分别有15、16、11、13、18和20个基因的表达差异倍数大于2倍.品种内的方差分析表明,长白猪分别有18和22个基因,太湖猪分别有3和7个基因在月龄间的表达差异达极显著(Ｐ<0.01)和显著水平(Ｐ<0.05).主成分分析结果显示,先降后升是两品种内最具代表性的基因表达模式,且长白猪和太湖猪分别有7和6个基因的表达模式明显偏离其他基因,提示其可能受到了重要的调控. 此外,5个差异表达基因的荧光定量RT-PCR验证结果均与芯片结果呈正相关趋势.以上结果筛选出了对于猪肉质和胴体性状可能具有重要影响,值得深入研究的一些候选基因,为深入研究生长发育过程中参与肌纤维生长和脂肪酸合成关键基因的表达变化规律和互作调控机制提供了基础数据.     

鸡Myostatin基因单核苷酸多态性的群体遗传学分析

肌肉生长抑制素是控制骨骼肌生长发育的重要细胞因子,采用PCR－SSCP和测序的方法发现了5个位于Myostatin基因5′－和3′－调控区的单核苷酸多态性位点,对北京油鸡、白耳鸡、石歧杂、矮小黄鸡、小型黄鸡、惠阳胡须鸡、隐性白羽鸡、海兰、AA鸡等不同鸡种的该单核苷酸多态性分析结果表明：Myostatin基因的5′调控区引物P60／P61扩增片段多态性是由3个核苷酸的改变而产生的[分别是G→A（304位）、A→G（322位）、G→（344位）],引物P93／P94扩增片段的多态性是由G→A（167位）突变造成的,引物P117。P118PC扩增片段多态性是由T→C（177位）造成的。3′调控我引物P80／P81扩增片段多态性是由第7263位A突变为T造成的,引物P76／P77扩增片段多态性是由A→G（6935位）造成的。不同鸡种群体遗传学分析表明,5′－调控区引物60／P61扩增片段多态性片段多态性是由A→G（6935位）造成的。不同鸡种群体遗传学分析表明,5′－调控区引物P60／P61扩增片段多态性位点在北京油鸡的基因型频率分布与其他的品种有很大的差异,其BB型频率为0．700,AA基因型频率仅为0．033,而其他鸡种中以A基因优势;对于引物P93／P94,品种间的基因型频率差异极显著（P＜0．01）,北京油鸡和AA鸡的EE型频率鸡种中以A基因占优势;对于引物P93／P94,品种间的基因型频率差异极显著（P＜0．01）,北京油鸡和AA鸡的EE型频率低于其他品种,白耳鸡和海兰蛋鸡以EE型为主,其频率高于其他品种;3′－调控区引物P80／P81多态怀位点在9个鸡种中都是等位基因C占优势。引物P76／P77,总体上MM型的频率较低,杂合子MN型的频率较高。     

Changes in fat metabolism of black-bone chickens during early stages of infection with Newcastle disease virus

Experiments were conducted to determine the effects of Newcastle disease on chicken fat metabolism. Thirty black-bone chickens were infected intraocularly with the Newcastle disease virus (NDV). Six birds were killed at 0, 12, 24, 48 and 72 h post infection, respectively. Results showed that the NDV infection decreased concentration of high-density lipoprotein cholesterol and increased concentrations of total cholesterol and low-density lipoprotein cholesterol in the plasma. Concentrations of triglycerides and free fatty acid were decreased after their initial increase. NDV infection also dramatically raised the activities of lipoprotein lipase (LPL), hepatic lipase and lipases in the serum. Furthermore, PCR results showed that the incipient infection up-regulated mRNA expression of LPL, adipose triglyceride lipase and nuclear factor peroxisome proliferator-activated receptor alpha (PPARα), but down-regulated them at later stage. Similarly, mRNA expression of fatty acid synthase, acetyl-CoA carboxylase and nuclear factor PPARγ, fatty acid transport protein 1 (FATP1), and 4(FATP4) decreased, whereas fatty acid translocase and fatty acid-binding protein increased initially. Data from Western blotting analysis showed that the changes in protein levels were consistent with mRNA expression. These results indicated that fat metabolism of the chicken was affected by the NDV infection. At the beginning of NDV infection, lipogenesis was inhibited, whereas lipolysis was strengthened. After lipolysis was strengthened, fat metabolism was found to be maximally depressed.     

大鼠成长期左心室基因表达谱的变化

为观察大鼠发育成熟过程中心脏生长与其基因表达谱变化的关系 ,应用超声心动术检测 8、10、12周龄Wistar大鼠的心脏结构和功能指标 ,应用cDNA基因芯片技术观察心脏基因表达水平的变化。大鼠从 8周龄生长至12周龄 ,体重增加约 45 7% ( 2 87± 13 gvs 197± 10g) ,前 2周和后 2周增加幅度相近。心脏左心室重量和室壁厚度分别增加约 2 7 7% ( 0 60± 0 0 3 gvs 0 47± 0 0 2 g)和 2 3 6% ( 2 0 4± 0 0 4mmvs 1 65± 0 13mm) ,前 2周增加幅度明显大于后 2周。基因表达谱的改变涉及细胞结构、代谢、氧化应激及信号转导等多方面的基因。 10周龄和 8周龄大鼠比较 ,变化的基因多数上调 ;12周龄和 10周龄大鼠比较 ,基因表达谱基本又返转至 8周龄水平。结果表明 ,大鼠在成长期的 4周内 ( 8- 12周龄 ) ,左心室基因表达谱发生的变化适应生理性心肌生长需要     

调控肌肉生长发育的lncRNAs

长链非编码RNA（long non-coding RNA, lncRNA）是存在于真核生物体内的一种长度大于200 nt主要由RNA聚合酶Ⅱ转录而来的RNAs,且不具有编码蛋白质能力。作为机体基因调控网络的重要调节因子,lncRNA在X染色体沉默、脂肪代谢、细胞生长发育等方面发挥重要作用。近期研究结果表明,lncRNA通过介导表观遗传、转录水平和转录后水平调控等方式,参与骨骼肌的生长发育以及分化过程的调节,包括调控肌源性干细胞和成肌细胞的增殖、分化和肌管的融合等进程,从而影响肌肉的生长发育。本文概述了lncRNA的分类与生物学功能,归纳了lncRNA的作用机制,重点介绍参与骨骼肌生长发育调控的lncRNAs,分析目前lncRNA研究面临的机遇及挑战,展望未来研究的热点与方向,以期为lncRNA在肌肉生长调控方面开展深入研究提供参考。