新型缓释片剂辅料甲壳胺的研究 Ⅰ:甲壳胺性质对药物溶出的影响

本文以非甾体抗炎药吲哚美辛为模型药物制备了骨架型缓释片剂,以体外溶出为检验指标,考察了甲壳胺的脱乙酰度、表观粘度及用量对药物释放的影响,并确定了甲壳胺的脱乙酰度及粘度范围。实验结果表明,缓释作用随脱乙酰度升高而降低;随用量增多而增强;粘度对药物释放的影响随脱乙酰度不同而不同。脱乙酰度为85％的甲壳胺,其缓释作用随表观粘度的增大而增大;脱乙酰度为75％的甲壳胺缓释作用随粘度升高而降低。     

钠米颗粒介导质粒DNA转染体外真核细胞

DNA传递是基因表达与功能研究及其医学应用的重要技术,安全高效的DNA传递一直是研究者期待的目标。利用一种新的阳离子多聚物脱乙酰甲壳胺16介导重组质粒pcDNA3vp1转染COS7细胞,RTPCR可检测到目的基因vp1在mRNA水平的表达,实时定量PCR结果表明其转染效率介于脂质体与磷酸钙法之间,同时还对转染条件进行了探讨。DNA结合分析发现脱乙酰甲壳胺16能够与DNA形成核酸纳米颗粒,提高DNA稳定性,促进真核细胞转染效率的提高。这些结果表明脱乙酰甲壳胺16确能做为一种新型的非病毒纳米DNA传递载体,并将可能在基因表达与功能研究及基因治疗等领域发挥重要作用 。     

甲壳胺影响变形链球菌粘附力的研究

目的：研究甲壳胺对变形链球菌的附着力的影响。方法：通过变链菌粘附实验和细菌平皿计数法,观察变链菌在有或无甲壳胺的培养基中的粘附和生长情况,结果：1．甲壳胺对变链菌的附着有抑制作用。2．甲壳胺能使已附着的变链菌脱落。0．5％浓度的甲壳胺作用强于0．25％。3．甲壳胺对变链菌的生长数量及形态无影响。结论：甲壳胺的防龋性是由于它减弱了变链菌的粘附力,而不是通过减少变链菌的数量来实现的。     

甲壳胺诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的实验研究

目的:通过体外实验探讨甲壳胺是否对人肝癌细胞HepG2具有生长抑制及诱导凋亡作用.方法:在HepG2细胞培养液中加入不同浓度的甲壳胺,培养48 h,于倒置相差显微镜下观察甲壳胺处理组及对照组细胞形态学变化;用流武细胞术(FCM)检测HepG2细胞的凋亡率,Western印迹检测甲壳胺处理组及对照组Bcl-2和p53蛋白...     

胍乙酸壳聚糖的合成及其对黄瓜的保鲜研究

以自制的不同脱乙酰度的壳聚糖和1-氯胍乙酸为原料合成了胍乙酸壳聚糖,研究了胍乙酸壳聚糖对黄瓜的保鲜效果。结果表明,由脱乙酰度为96%的壳聚糖制得的胍乙酸壳聚糖平均分子量为5287。随着脱乙酰度的增加,黄瓜失重率的增加逐渐减缓,随着贮存时间延长总叶绿素含量先升高然后缓慢下降,而维生素C含量则一直缓慢下降;脱乙酰度为96%的壳聚糖制得的胍乙酸壳聚糖贮存35 d后,黄瓜的质量损失为0.7%;贮存20 d后,总叶绿素含量仍然可达1.34 mg/g;贮存时间20 d后,维生素C含量可达0.18 mg/g。     

甲壳胺对HepG2细胞蛋白酪氨酸激酶和磷酸酶活性的影响

目的:初步探讨甲壳胺诱导人肝癌Hep G2细胞凋亡的信号转导机制。方法:采用酶联免疫法,动态检测甲壳胺作用于Hep G2细胞后,细胞膜相及胞浆内的蛋白酪氨酸激酶(PTK)及蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP)活性的变化。结果:甲壳胺可以抑制Hep G2细胞内的PTK活性,并呈一定的浓度依赖性;甲壳胺作用Hep G2细胞后,随着PTK活性的减弱,PTP的活性也短暂下降。结论:甲壳胺诱导Hep G2细胞凋亡时,涉及到PTK的活性改变。观察到膜相蛋白中PTK的活性改变早于胞浆蛋白,提示可能存在一个信号的跨膜转运过程;同时伴有PTP的活性变化,可能反映了胞内蛋白酪氨酸残基的磷酸化与去磷酸化即时调节机制。     

不同反应条件对壳聚糖性能的影响

本文研究了不同脱乙酰化条件,如碱浓度、反应温度及时间和不同处理方法对壳聚糖的脱乙酰程度及粘度的影响。结果表明：50％的碱浓度、反应温度为90℃并采用间歇法可制得高脱乙酰度及高粘度的壳聚糖。     

快速膨胀片层多孔壳聚糖止血海绵的制备及生物相容性研究

目的:探索快速膨胀片层多孔壳聚糖止血海绵的制备工艺,评价止血海绵的理化性能及生物相容性,并探讨原料脱乙酰度对止血海绵性能的影响。方法:考察止血海绵的理化性质,包括扫描电子显微镜(SEM)观察表观形貌,检测力学性能、吸水率、快速吸水膨胀时间和膨胀率,研究其体内外的生物相容性,包括体外细胞毒性实验、动物皮内刺激实验和皮下植入实验。结果:确定了止血海绵的制备工艺,采用该工艺制备的止血海绵均具有片层多孔结构,且具有较高的力学强度和快速膨胀的特点。证实高脱乙酰度原料(DD=95.14%)制备的止血海绵力学性能、吸水率、膨胀率均优于低脱乙酰度原料(DD=69.70%)制备的止血海绵。脱乙酰度69.70%和脱乙酰度95.14%的壳聚糖止血海绵,拉伸强度分别为10.1 N和15.4 N,吸水率分别为1904%和2131%,吸水膨胀时间分别为13.4 s和14.0 s,膨胀率分别为8.4倍和10.8倍。体外细胞毒性实验表明脱乙酰度为95.14%的壳聚糖止血海绵更有利于细胞的增殖,皮内刺激和皮下植入实验结果表明脱乙酰度为95.14%的壳聚糖海止血海绵表现出更小的组织炎性反应。结论:脱乙酰度为95.14%的壳聚糖止血海绵具有优良的力学性能、优异的吸水膨胀能力以及良好的生物相容性,在临床止血特别是腔隙止血方面具有广阔的应用前景。     

微波法制备壳聚糖研究

采用微波炉加热,在敞口容器中,进行甲壳素脱乙酰反应,制备壳聚糖。考察了碱溶液浓度和微波加热时间对壳聚糖脱乙酰度的影响。固定微波加热时间30min,随NaOH溶液浓度增加,脱乙酰度先增加,后减小;NaOH溶液浓度为45％时,壳聚糖的脱乙酰度最高。固定NaOH溶液浓度为45％,随着微波加热时间延长,壳聚糖的脱乙酰度增加。微波加热的最佳时间为30min。加热时间继续延长,壳聚糖变黑。碱溶液浓度和微波加热时间对壳聚糖的粘均分子量影响都不大。本文试图从微波场的能量分布和微波加热机理方面解释实验结果。     

从拟康氏木霉中提取壳聚糖的初步研究

本实验以拟康氏木霉菌丝为原料,采用碱法提取壳聚糖,通过正交实验分析碱浓度和反应时间对壳聚糖产率、脱乙酰度和分子量的影响.结果表明:随着碱浓度的增加和反应时间的延长,产率在一定范围呈先上升后下降的趋势,而壳聚糖的脱乙酰度均增加;碱浓度一定时,壳聚糖的分子量随着反应时间的延长呈先上升后下降的趋势.壳聚糖产率占菌丝体干重达14.4%,纯度为90.2%,脱乙酰度达95.2%.     

半干法微波处理制备壳聚糖

本文报导了采用微波处理半干法由甲壳素脱乙酰制备壳聚糖。与传统方法相比,反应时间大大缩短,降低了生产成本。并讨论了影响壳聚糖脱乙酰度和粘度的因素,例如,反应时间,碱浓度,料比。在较适宜的条件下,7分钟内脱乙酰度可大于75％。     

N-乙酰化反应制备水溶性壳聚糖研究

将高度脱乙酰化的壳聚糖在均相介质中进行N-乙酰化反应,制备水溶性壳聚糖。研究了制备工艺条件对脱乙酰度及水溶性的影响。结果表明,在乙酸—乙醇均相体系中进行乙酰化反应时,壳聚糖与乙酸酐的质量比为1∶0.6,反应温度控制在20℃,反应时间为8 h时,产品的脱乙酰度在50%左右,获得了水溶性良好的N-乙酰化壳聚糖。     

从蝉壳制备壳聚糖

以蝉壳为原料制备甲壳素和壳聚糖,研究并提出了适合蝉壳的脱色条件,所得产物为白色片状,脱乙酰度大于９０％。     

壳聚糖的特性对吲哚美辛微囊性能的影响

本研究利用自制的壳聚糖与阿拉伯胶为壁材,以戊二醛为固化交联剂,通过复凝法制备吲哚美辛载药微囊;研究了不同分子量、不同脱乙酰度的壁材壳聚糖对所形成微囊的性能的影响.结果表明:不同脱乙酰度与不同分子量的壳聚糖所制的载药微囊包封率、载药量、粒径、吸水溶胀性能等都有一定差别,体外溶出实验表明他们缓释与控释性能也有不同.     

枯草芽孢杆菌壳聚糖酶水解制备低脱乙酰度壳寡糖及其组分分析

对来源于枯草芽孢杆菌菌株168(Bacillus subtilis 168)的壳聚糖酶编码基因进行了序列优化及全合成,并在毕赤酵母(Pichia pastoris)中实现了分泌表达,表达产物的蛋白质浓度达到0.30mg/ml。表达的壳聚糖酶最适p H为5.6,最适温度为55℃,比酶活达84.54U/ml。该酶在50℃及以下较稳定。利用该酶水解低脱乙酰度壳聚糖并使用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱(ultra-performance liquid chromatography quadrupole time-of-flight mass spectrometry,UPLC-QTOF MS)对产物的组分进行了分离及鉴定。根据一级质谱信息,推测酶解产物中包含至少37种聚合度2~18,不同脱乙酰度的壳寡糖组分。综上,利用毕赤酵母分泌表达了来源于枯草芽孢杆菌菌株168的壳聚糖酶基因,利用表达产物水解制备了低脱乙酰度壳寡糖并对其组分进行了分析,可为后续壳寡糖结构与功能关系的研究提供参考。     

里氏木霉几丁质酶表达及其水解产物组成与结构分析

优化并全合成里氏木霉几丁质酶基因,在毕赤酵母中实现分泌表达。产物几丁质酶的蛋白浓度达0. 17mg/ml,最适pH为5. 6,最适温度为65℃,酶活为0. 52U/ml。该酶在50℃及以下较稳定。利用该酶水解低脱乙酰度壳聚糖并对产物的组成及结构进行分析。超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱(ultra-performance liquid chromatography quadrupole time-of-flight mass spectrometry,UPLC-QTOF MS)检测及分析结果显示,酶解产物中包含至少41种聚合度2～18,不同脱乙酰度的壳寡糖组分;核磁共振(nuclear magnetic resonance,NMR)检测及分析结果显示,产物壳寡糖的还原端主要为N-乙酰氨基葡萄糖,非还原端则同时含有N-乙酰氨基葡萄糖及氨基葡萄糖。相关结果可为壳寡糖的结构与功能关系研究提供参考。     

壳寡糖对大肠杆菌抑菌活性研究

分析壳寡糖对大肠杆菌抑菌效果的影响因素.采用摇瓶法和ELISA板法对不同浓度的壳寡糖进行抑菌试验;比较不同pH、不同脱乙酰度的壳寡糖对大肠杆菌抑菌效果的差异;比较不同聚合度的单一聚合度壳寡糖抑菌效果的差异.壳寡糖浓度大于5 mg/mL时抑菌效果与同浓度苯甲酸钠相近;pH为4时,0.156 mg/mL的壳寡糖溶液抑菌活性即能超过90%;pH为7时,5 mg/mL的壳寡糖才能达到90%抑菌活性.脱乙酰度为95%时,5 mg/mL的壳寡糖溶液抑菌活性能超过97%;脱乙酰度为45%时,40 mg/mL的壳寡糖溶液抑菌活性仅有56%;聚合度大于4的单一聚合度壳寡糖40 mg/mL时抑菌活性能达到99%.结果表明:提高壳寡糖溶液浓度、降低pH、提高脱乙酰度,能提高壳寡糖的抑菌活性,单一聚合度壳寡糖聚合度越高,对大肠杆菌的抑制作用越强.此外,采用ELISA板的方法进行实验,即节省试药又方便快捷.     

添加壳聚糖的藻酸盐印模材料抗菌性能研究

目的:对添加壳聚糖的藻酸盐印模材料的抗菌性进行测试,为口腔抗茵印模材的研究奠定基础.方法:分别以不同的添加比将不同分子量和脱乙酰度的壳聚糖加入藻酸盐印模材料中,采用薄膜密着法分别测试添加抗菌成分后印模材料对大肠杆菌,金黄色葡萄球菌的抗茵活性.结果:壳聚糖分别以1%和1.4%的添加比添加到藻酸盐印模材料中,对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌有最好的抗菌性.随着脱乙酰度的提高,抑菌率均可达到100%.结论:添加壳聚糖的藻酸盐印模材料具有良好的抗茵效果.     

变功率微波法制备壳聚糖絮凝剂的研究

研究了变功率下微波加热对甲壳素脱乙酰化反应和粘度的影响。结果表明:在4 80W下反应4min、然后在16 0W下反应6min的最佳功率组合下,可制得脱乙酰度77.3%、粘度4 6mPa·s的壳聚糖产品;与恒功率微波法相比,变功率微波法制备壳聚糖的脱乙酰度稍低,但粘度高出31% ,反应时间缩短三分之一,能耗降低6 0 %     

壳聚糖对植物病原细菌的抑制作用研究

本文通过测定最小抑制浓度和相对抑制率,观察了分子量和脱乙酰度对壳聚糖抑制植物病原细菌(胡萝卜软腐欧文氏菌Erwinia cartovara Var carotovara、油菜黄单孢菌绒毛草致病菌Xanthamonas campestris Pv holcicola、丁香假单孢菌黍致病变种Pseudomonas spyings Pv panici)作用的影响。结果表明：在一定范围内,随分子量和脱乙酰度的增大,壳聚糖的抑菌效果相应降低,而且各种病原细菌对不同,壳聚糖的敏感性也有很大差异。