天然高分子吸附剂研究Ⅲ.改性壳聚糖的制备及其特性

以一缩二乙二醇双环氧丙基醚为交联剂,合成了以壳聚糖为母体的凝胶型螯合树脂,并研究了其对金属离子Cu(Ⅱ)、Ni(Ⅱ)、Co(Ⅱ)的吸附性能。结果表明,该树脂能在Cu(Ⅱ)、Ni(Ⅱ)、Co(Ⅱ)三种离子共存时,选择吸附Cu(Ⅱ)离子,其选择性系数分别为KCu(Ⅱ)/Ni(Ⅱ)=6.28和KCu(Ⅱ)/Co(Ⅱ)=4.23。     

我国高β脂蛋白血症的分型及其与冠心病发病的关系的探讨

本文对正常、冠心病及心肌梗塞病人共247例的血清进行了琼脂糖电泳和胆固醇、甘油三酯及β脂蛋白的含量测定。主要根据βLP 电泳图象的类型,必要时参考血清脂质含量将247例被检人员分为Ⅱ-1、Ⅱ_2、Ⅱ_3、Ⅱ_4、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ七种不同的类型。按其在每种类型中分布多少排列次序如下:Ⅱ_4>Ⅱ_3>Ⅳ>Ⅱ-1>Ⅱ_2>Ⅲ>Ⅴ。以Ⅱ_4最多,88例,Ⅴ型最少,仅2例。247例中118例有高脂蛋白血症。他们在各型中的分布情况亦以Ⅱ_4型为最多,Ⅴ型最少。排列次序与上述情况类似;为Ⅱ_4>Ⅳ>Ⅱ_3>Ⅱ_2>Ⅱ-1>Ⅱ>Ⅴ型。118例高脂蛋白血症者中67例有冠心病,34例有高血压,20人有 MI。冠心病的分 布以Ⅱ_4,Ⅳ及Ⅱ_3型较多,Ⅱ_1型中最少,Ⅲ、Ⅴ型中无,但以本型计则发病率以Ⅱ_2、Ⅱ_1和Ⅱ_3较多,Ⅱ_4及Ⅳ型中较少,MI 多集中于Ⅳ、Ⅱ_4及Ⅱ_3型中。说明Ⅱ及Ⅳ型与冠心病的关系较为密切。此外,还观察了104例冠心病和42例高血压在各型中的分布,发现二者均较集中地分布于Ⅱ_4Ⅳ及Ⅱ_3型中。比较了它们在高 Tg、高 Ch 及高脂蛋白血症中的发生率。发现冠心病和高血压与高脂蛋白血症的关系比高 Ch 及高 Tg 血症更为密切。以上结果均说明Ⅱ、Ⅳ型与冠心病、高血压有密切关系,因此对该二型高脂蛋白血症的早期发现和治疗对冠心病的防治看重要意义     

海洋浮游古菌MGII的研究进展

海洋浮游古菌MGⅡ是海洋表层水体中最丰富的古菌类群。自1992年被发现以来,如今依然没有被成功分离纯化。前人基于16S rRNA基因的研究认为MGⅡ可以被分为MGⅡa、MGⅡb和MGⅡc三个亚类。近年来,对大量的宏基因组测序数据的分析表明,MGⅡ在分类学上属于广古菌门热源体纲下的一个目,包含MGⅡa和MGⅡb两个科。以前通过16S rRNA基因高通量测序结果得出的少量MGⅡc,在宏基因组测序的数据中并没有找到,因此最近两年的研究认为MGⅡ主要由MGⅡa和MGⅡb组成。本文综述了海洋浮游古菌MGⅡ的丰度和多样性分布特征、潜在的生态功能、生态关系以及培养等方面的研究进展,比较了MGⅡa和MGⅡb的异同点,并对当前的研究热点和趋势进行了讨论和展望。     

大连地区食源性腹泻病例中诺如病毒基因特征分析

目的了解大连地区食源性腹泻病例中诺如病毒的基因特征。方法采用荧光定量RT-PCR对2016年大连市食源性疾病监测哨点医院采集的1 900份粪便标本进行诺如病毒核酸检测,用逆转录PCR对阳性毒株的ORF1-ORF2连接区扩增并测序,分析其基因亚型和同源性。结果 1 900份标本中,检出诺如病毒核酸阳性25份,阳性率1.32%,其中GⅠ型阳性3份,GⅡ型阳性19份,GⅠ型和GⅡ型均阳性3份。26株病毒基因序列比对,发现3株为GⅠ.3,2株为GⅠ.6,9株为GⅡ.17,5株为GⅡ.4,2株为GⅡ.2,GⅡ.3、GⅡ.6、GⅡ.13、GⅡ.14、GⅡ.15各1株。结论大连地区食源性腹泻病例中诺如病毒呈基因多样性,2016年流行优势株为GⅡ.17。GⅡ.2、GⅡ.3、GⅡ.6、GⅡ.13、GⅡ.14、GⅡ.15在大连地区首次检出。     

玉米大斑病菌特异性毒素组分分离条件的优化研究*

把从玉米大斑病菌的1号小种菌株（99．2）中提取的粗毒素进行硅胶TL层析,分离到Ⅰ（Rf0．06）、Ⅱ（Rf0．21）、Ⅲ（Rf0．d5）、Ⅳ（R,0．60）、Ⅴ（Rf0．75）5种组分,分别对此5组分进行生物测定,发现组分Ⅱ对带Ht1基因的玉米具有较强的特异性。经对组分Ⅱ进行HPLC的进一步纯化,又可得到3种组分Ⅱ-1、Ⅱ-2、Ⅱ-3,其中只有Ⅱ-3具有特异致病活性。对Ⅱ-1、Ⅱ-2、Ⅱ-3进行紫外．可见全波长扫描,发现只有Ⅱ-3在300nm处有吸收峰,Ⅱ-1和Ⅱ-2的峰形相似,可能为类似物。     

DNA拓扑异构酶Ⅱ与ⅠA的进化分析

DNA拓扑异构酶与断开DNA链和改变其拓扑结构有关。先前的研究认为,拓扑异构酶TypeⅡB是由TypeⅡA通过基因的复制、重组和缺失所造成。然而,本研究结果则显示,TypeⅠA与TypeⅡB的进化关系较近,而TypeⅡA与TypeⅡB的关系较远。因此,TypeⅡB可能是由TypeⅠA演化而来,或者说,TypeⅡB是TypeⅠA在古细菌中的特化形式;TypeⅡB可能是由TypeⅡA通过形成TypeⅠA后演化而成的,而不是由TypeⅡA直接通过基因的复制、重组和缺失所造成。在由TypeⅡA演化成为TypeⅠA,最后演化为TypeⅡB的过程中,DNA拓扑异构酶的催化机制也发生了变化从需要金属离子的协助,演化到了不需要镁离子的存在协助其催化。     

尾加压素Ⅱ相关肽--新发现的尾加压素Ⅱ受体的内源性配体

尾加压素Ⅱ(urotensinⅡ,UⅡ)最早是从鱼的脊髓中分离出来的生长抑素样环肽,是目前所知最强的缩血管活性物质。随后,Ames等发现人体内一种孤立的G蛋白偶联受体GPR14是UⅡ的特异性受体。2003年Sugo T等在大鼠脑组织提取物中监测UⅡ的免疫反应性时,分离出一种新的活性多肽并命名为尾加压素Ⅱ相关肽(urotensin Ⅱrelated peptide,URP),其氨基酸序列为ACFWKYCV,在半胱氨酸之间由二硫键连接,与UⅡ有着相同的CFWKYC结构。     

骨形态发生蛋白9诱导成骨相关TGFβⅡ型受体的鉴定分析

前期研究发现骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic protein 9,BMP9)具有较强的诱导骨形成的能力,但目前对其诱导骨形成相关的分子机制了解甚少．采用重组腺病毒的方法成功构建显性负性突变的转化生长因子(TGF)βⅡ型受体的腺病毒,将其与BMP9共同导入靶细胞,通过体外细胞实验和体内动物实验,初步鉴定分析与BMP9诱导成骨密切相关的TGFβⅡ型受体．体外细胞实验发现：三种显性负性突变的TGFβⅡ型受体,即dnBMPRⅡ、dnActRⅡ和dnActRⅡB在体外能抑制由BMP9诱导的碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)表达和钙盐沉积,并可抑制BMP9诱导的Smad信号途径的激活．动物实验也显示,dnBMPRⅡ、dnActRⅡ和dnActRⅡB可抑制BMP9诱导的异位成骨,提示相应的野生型TGFβⅡ型受体即BMPRⅡ、ActRⅡ和ActRⅡB很可能与BMP9诱导成骨有关．而靶细胞中均只表达BMPRⅡ和ActRⅡ,并不表达ActRⅡB.随后,采用RNA干扰(RNA interference,RNAi)对BMPRⅡ和ActRⅡ进行基因沉默,结果发现BMPRⅡ和ActRⅡ的表达受到抑制后,由BMP9诱导的荧光素酶活性和ALP活性也相应受到抑制．因此,BMPRⅡ和ActRⅡ是与BMP9诱导成骨分化相关的TGFβⅡ型受体．     

硫脲壳聚糖金属配合物的抗氧化活性研究

通过测定对羟自由基、超氧负离子自由基的清除率和还原能力,研究了壳聚糖、硫脲壳聚糖及5种硫脲壳聚糖金属配合物的抗氧化活性。结果表明:在实验设置的浓度范围内,对羟自由基的清除能力依次为硫脲壳聚糖Cu(Ⅱ)>硫脲壳聚糖Fe(Ⅱ)>硫脲壳聚糖Co(Ⅱ)>硫脲壳聚糖Ni(Ⅱ)>硫脲壳聚糖Zn(Ⅱ),且清除能力随着浓度的增加而增强;对超氧负离子自由基清除能力依次为硫脲壳聚糖Ni(Ⅱ)>硫脲壳聚糖Zn(Ⅱ)>硫脲壳聚糖Co(Ⅱ)>硫脲壳聚糖Cu(Ⅱ)>硫脲壳聚糖Fe(Ⅱ),且清除能力随着浓度的增加而增强;还原能力依次为硫脲壳聚糖Co(Ⅱ)>硫脲壳聚糖Cu(Ⅱ)>硫脲壳聚糖Fe(Ⅱ)>硫脲壳聚糖Ni(Ⅱ)>硫脲壳聚糖Zn(Ⅱ)。     

光系统Ⅱ超分子复合物的放氧活性分析

以高等植物大量捕光色素蛋白复合物(major light harvesting complex Ⅱ,LHCⅡb)对光系统Ⅱ(photosystem Ⅱ,PSⅡ)放氧活性的影响为研究对象,从豌豆类囊体膜中分步提取出三种PSⅡ蛋白复合物,结合电泳和光谱分析,鉴定出三种复合物的主要区别是LHCⅡb含量不同.对于三种PSⅡ色素...     

RNA干扰抑制TGF-βⅡ型受体的表达

目的:观察针对TGF-βRⅡ的干扰RNA对TGF-βRⅡ表达的抑制作用,探讨RNA干扰TGF-βRⅡ的方法对肾问质纤维化的抑制作用.方法:PCR方法扩增TGF-βRⅡ的cDNA序列,将全长的TGF-βRⅡ cDNA插入pcDNA3中,构建TGF-βRⅡ的真核表达栽体,酶切、测序及间接免疫荧光鉴定;根据TGF-βRⅡ的设计针对TGF-βRⅡ的干扰RNA,构建针对TGF-βRⅡ的RNA干扰质粒pSUPER-TGF-βR Ⅱ并进行酶切及测序鉴定;脂质体介导针对TGF-βR Ⅱ的RNA干扰质粒和TGF-β RⅡ的真核表达载体共转染293T细胞,western-blot检测293细胞内TGF-β R Ⅱ的表达.结果:pcDNA3-TGF-βRⅡ测序结果显示TGF-βRⅡ基因未发生突变.间接免疫荧光检测TGF-βRⅡ在293T细胞内的表达;测序显示RNA干扰质粒pSUPER-TGF-βRⅡ序列正确,RNA干扰质粒明显抑制293T细胞内TGF-βRⅡ的表达.结论:成功构建了TGF-βRⅡ的真核表达载体及针对TGF-βRⅡ的RNA干扰质粒,RNA干扰质粒能够抑制TGF-βRⅡ的表达,为进一步研究针对TGF-βRⅡ的RNA干扰对肾纤维化的预防及治疗作用提供有用工具.     

细菌Ⅱ组内含子（GroupⅡintron）的转移机制

摘要: 约14年前在真核生物中发现的Ⅱ组内含子不仅具有催化功能,而且是可移动的逆转录元件。近年来研究发现细菌中也有可移动的Ⅱ组内含子,它们能够逆转录归巢进入同源无内含子的等位基因位点或者逆转录转座进入非等位基因位点。本文试图从细菌Ⅱ组内含子编码蛋白的活性功能域的组成与Ⅱ组内含子转移发生途径之间的联系,综述已知细菌Ⅱ组内含子主要的移动机制。同时,依据作者多年来研究海洋蓝细菌Ⅱ组内含子编码蛋白对Ⅱ组内含子剪接机理的结果,探讨了海洋蓝细菌Ⅱ组内含子是否会发生转移以及可能的转移方式,探讨了Ⅱ组内含子在生物基因组中发生转移的生物学意义。     

一种新型的截短型转化生长因子βⅡ型受体在大肠杆菌中的表达及活性鉴定

克隆人源的截短型转化生长因子βⅡ型受体（tTGF-βRⅡ）,成功构建高效稳定的大肠杆菌表达菌株。采用PCR技术扩增得到目的基因tTGF-βRⅡ,插入原核表达载体pGEX4T3的相应位点,并在大肠杆菌BL21（DE3）中获得高可溶性表达的重组蛋白,重组蛋白GST-tTGF-βRⅡ经Glutathione-Sepharose 4B亲和层析纯化后,再经凝血酶酶切,然后经Glutathione-Sepharose 4B纯化获得目的蛋白tTGF-βRⅡ,SDS-PAGE分析表明：可以通过Glutathione-Sepharose 4B亲和层析纯化得到GST-tTGF-βRⅡ,其分子量约37.0 KDa,和目的蛋白tTGF-βRⅡ,分子量为11.0 KDa。Western blot结果显示GST-tTGF-βRⅡ和tTGF-βRⅡ为特异性蛋白。运用基因工程的方法获得tTGF-βRⅡ目的蛋白,对瘢痕成纤维细胞增殖具有很好抑制作用。     

大鼠与家兔生后各年龄阶段跖肌纤维的比较

应用建立在肌球蛋白重链异构体基础上的标准肌动球蛋白ATP酶和琥珀酸脱氢酶组织化学方法,分析大鼠和家兔出生后发育各年龄阶段跖肌纤维型分布。在生后2周至24周龄的大鼠和家兔Ⅰ、ⅡX型肌纤维百分比例减少,而ⅡA、ⅡB型纤维则增加。进行大量单肌纤维的组织化学特征的比较和相关性探讨。结果显示动物平均体重与跖肌的平均湿重随生后发育逐渐增加,Ⅰ、ⅡX、ⅡA及ⅡB型纤维均在生后各年龄组的全部肌肉内被发现,但出生后2日龄组是个例外。在生后发育期间,雄性大鼠和家兔ⅡB型纤维的平均肌纤维型构成要大于雌性大鼠和家兔,而雄性大鼠和家兔Ⅰ、ⅡX、ⅡA型三种氧化组织化学分类的肌纤维型构成均小于雌性大鼠和家兔。大鼠Ⅰ、ⅡX、ⅡA和ⅡB型纤维的平均横切面积显然要比家兔的同类型肌纤维要小。在大鼠和家兔可见明显的性别差异。大鼠和家兔的ⅡX型纤维横切面积是最小的,Ⅰ、ⅡA型纤维呈中等大小,ⅡB型纤维最大。该重要的测试有助于我们深入研究啮齿类动物快肌纤维生理特征的适应。     

家蚕素Ⅱ基因原核表达及蛋白纯化

【目的】建立一种简便、 快速且能大量获得家蚕素Ⅱ （bombyxin-Ⅱ, BBXⅡ）的有效方法。【方法】运用RT PCR技术得到bombyxin-Ⅱ基因全长cDNA序列, 采用原核表达技术对该基因进行异源表达, 并利用亲和层析的方法得到纯化的BBXⅡ蛋白。【结果】从家蚕Bombyx mori头部mRNA中经过反转录获得bombyxin-Ⅱ基因的cDNA, 并构建了原核表达载体pET28a-BBXⅡ, 经过异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）诱导, 使BBXⅡ获得了大量表达, 进一步用HisTrap HP亲和层析, 成功得到大量纯化的BBXⅡ。【结论】本实验建立的原核表达方法和蛋白纯化技术, 是大量制备BBXⅡ的一种简易而有效的方法, 为进一步开展BBX的分泌机制和作用机理研究, 以及利用原核表达系统研发BBX降血糖药物奠定了基础。     

骨骼肌特异性敲除TβRⅡ小鼠模型的建立

目的:建立骨骼肌特异性敲除转化生长因子受体Ⅱ(TβRⅡ)小鼠模型,为进一步研究TβRⅡ在骨骼肌发育和分化中的作用奠定基础。方法:首先将TβRⅡflox/flox转基因小鼠与上游携带肌酸激酶(MCK)启动子的MCK-Cre转基因小鼠进行杂交,培育繁殖出TβRⅡflox/wt/MCK-Cre(+)双转基因小鼠。然后利用TβRⅡflox/wt/MCK-Cre(+)双转基因小鼠与TβRⅡflox/flox转基因小鼠进行杂交,繁殖培育出在骨骼肌内特异敲除TβRⅡ基因的TβRⅡflox/flox/MCK-Cre(+)小鼠。结果:利用Cre/loxP技术世界上首次成功繁殖培育出有活力的且发育正常的TβRⅡ基因敲除小鼠。     

高等植物光系统Ⅱ对高温的响应

光系统Ⅱ(PSⅡ)是位于类囊体膜上的高度组织的色素蛋白复合体,主要由反应中心复合体、捕光天线复合体等亚单位组成。主要介绍PSⅡ的结构和功能、高温对PSⅡ的影响以及PSⅡ对高温胁迫的防御机制。     

GⅡ.17型诺如病毒多克隆抗体的制备及应用

目的制备兔抗GⅡ.17型诺如病毒(GⅡ.17norovirus,GⅡ.17 NoV)病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)多克隆抗体(兔抗GⅡ.17 NoV VLPs多克隆抗体),用其建立组织血型抗原(histo-blood group antigen,HBGA)-GⅡ.17 NoV VLPs阻断试验,并对其进行初步应用。方法制备并纯化GⅡ.17 NoV VLPs,采用SDS-PAGE、电镜观察和粒径检测方法对其进行鉴定。将其免疫家兔制备兔抗GⅡ.17 NoV VLPs多克隆抗体,经Western blot对其进行鉴定,并用ELISA检测其效价及特异性。筛选与GⅡ.17 NoV VLPs结合力强的唾液HBGA受体类型,优化GⅡ.17NoV VLPs质量浓度及多克隆抗体稀释度,用兔抗GⅡ.17 NoV VLPs多克隆抗体建立HBGA-GⅡ.17 NoV VLPs阻断试验,并进行特异性验证及初步应用。结果 GⅡ.17 NoV VLPs经检测纯度为95%,且颗粒形态完整,粒径均一。制备的多克隆抗体在Western blot可见特异性条带,效价可达1∶25 600 000,并对其他基因型(GⅠ.2、GⅠ.7、GⅡ.3、GⅡ.4、GⅡ.7)VLPs的交叉反应较弱。GⅡ.17 NoV VLPs和A、B、O和AB 4种血型的唾液HBGA均能结合,差异无统计学意义(P0.05);以GⅡ.17 NoV VLPs质量浓度为0.25μg/m L,多克隆抗体的稀释度为1∶160 000建立了HBGA-GⅡ.17 NoV VLPs阻断试验,并应用该方法对不同剂量GⅡ.17 NoV VLPs免疫的小鼠血清进行了半数阻断滴度检测。结论成功制备了高效价兔抗GⅡ.17 NoV VLPs多克隆抗体,建立了HBGA-GⅡ.17NoV VLPs阻断试验,且该方法特异性良好,可用于GⅡ.17 NoV VLPs免疫效果的评价。     

DNA拓扑异构酶Ⅱ研究进展

TopoⅡ不仅对细胞的正常生命活动至关重要,而且在肿瘤发生、发展以及疗效等方面均扮演重要 角色。关于TopoⅡα表达调控及其影响因素大致可以分为三个方面。其一,蛋白激酶类成分多直接作用于TopoⅡα蛋白质,影响其生物活性,并且与TopoⅡα活性的周期性特点有关,其二,既能作用于基因水平又能从蛋白质水平影响TopoⅡα的物质,主要包括p53和Rb蛋白等。最后,转录调节因子类成分则主要是从基因水平调控TopoⅡα的表达。针对TopoⅡα和β异同,二者不仅在结构和分布方面有所差别,而且在功能上也各有侧重。特别是在药物敏感性与抗药性方面TopoⅡα与β也有一定的区别。因此,加强对TopoⅡα表达调控的研究,特别是开展对TopoⅡβ表达调控研究,以及深入探讨TopoⅡα和β结构和功能特点,不但对于了解相关作用机制,而且对提高肿瘤诊断、治疗效果具有重要意义。     

金针菇Ⅱ类过氧化物酶基因在子实体发育与胁迫应答过程的表达特征

Ⅱ类过氧化物酶（Class Ⅱ peroxidase,CⅡp）是活性氧代谢的重要抗氧化物酶，参与机体氧化应答过程。基于金针菇全基因组数据鉴定到两个Ⅱ类过氧化物酶基因，并分别命名为FfCⅡp1、FfCⅡp2，采用在线网站软件对基因进行生物信息学分析，利用实时荧光定量PCR技术分析基因在金针菇不同子实体组织和胁迫应答中的表达模式。结果显示，FfCⅡp1全长1 638 bp，包含一个1 131 bp的完整开放阅读框，编码376个氨基酸。FfCⅡp2全长1 410 bp，包含一个1 032 bp的完整开放阅读框，编码343个氨基酸。保守结构域及进化树分析表明，FfCⅡp1和FfCⅡp2分别归属于锰过氧化物酶和通用过氧化物酶家族。RT-qPCR结果表明，两个FfCⅡp基因均在伸长期菌柄中高表达，且在快速伸长区段显著上调；损伤和氧化胁迫处理均能诱导FfCⅡp1和FfCⅡp2上调表达，FfCⅡp2的上调幅度明显高于FfCⅡp1。以上结果表明，金针菇两个CⅡp家族基因参与菌柄伸长与胁迫应答过程，且FfCⅡp2对损伤和氧化胁迫更为敏感。