大肠杆菌抗药性质粒pFD3和pFD11的研究

从人的粪水中分离到大肠杆菌A2和B5,经药物敏感度测定,大肠杆菌A2抗链霉素,四环素、氯霉素、氨苄青霉素和磺胺药;大肠杆菌B5抗链霉素、四环素、磺胺药。通过接触转移实验证明,这些抗性决定因子分别位于质粒pFD3和pFD11上。     

大肠杆菌抗药性质粒pFD11温度敏感突变型的分离

温度敏感突变型一般可用于研究DNA复制的控制机制,而质粒温度敏感突变型更可用于测定质粒的拷贝数。我们已报道过从人的粪水中分离到带有抗药性质粒pFD11的大肠杆菌,为了研究pFD11质粒的拷贝数,进行了抗药性质粒pFD11的温度敏感突变型的分离工作。大肠杆菌K12W1485 hisyvl(F~-)(pFD11)的培养物经离心收集菌体,然后悬于pH6.0的磷酸缓冲液中,用NTG200微克/毫升37℃处理30分钟,用0.05M硫     

大肠杆菌抗药性质粒pFD3的链霉素抗性表达

Cohen等‘31研究大肠杆菌抗药性质粒R6 （此质粒携带卡那霉素、新霉素、氯霉素、四环 素、链霉素抗性）,发现在用卡那霉素抗性、新 霉素抗性或氯霉素抗性作为选择性标记进行转 化时,极少数转化子失掉链霉素抗性。本文报 道大肠杆菌抗药性质粒pFD 3（此质粒携带四 环素、链霉素、氯霉素、氨苇青霉素、磺胺抗性） 在经结合转移或转化途径传递给大肠杆菌C'₆₀₀ 时,所得的转移子、转化子中四环素、氯霉素、氨 苇青霉素及磺胺抗性都能正确表达,而链霉素 抗性则不能完全表达。     

大肠杆菌pFD7质粒DNA的分离纯化及分子特性的研究

我们研究了PFD7质粒DNA的抗变能力及其纯化方法。经试验,pFD7质粒DNA在100℃处理2—4分钟可保持85％以上的转化活性,处理10分钟转化活性降到50％以下,处理20分钟仅剩10％左右,而在pH12.5处理3—5分钟,转化活性没有下降。 经琼脂糖凝胶电泳鉴定,经上述热或碱处理后pFD7质粒DNA电泳带不变,而染色体DNA在100℃处理2分钟或pH12.5处理3—5分钟即发生变性并显著降解,原电泳带消失。从pFD7质粒DNA分别对热和碱的稳定性可推知它主要以CC-DNA形态存在。     

大肠杆菌R质粒接合转移到霍乱弧菌

个别类型的大肠杆菌能同霍乱弧菌接合配对,使不耐药的霍乱弧菌同时获得对链霉素、庆大霉素、卡那霉素、土霉素、四环素、红霉素、台霉素、氯霉素、金霉素、新霉素等多种抗生素的耐药性。研究了影响接合率的各种因素。讨论了大肠杆菌肠毒素基因有可能同R质粒一起通过接合转移给霍乱弧菌,从而使无毒霍乱弧菌转变成有毒霍乱弧菌。     

细菌的抗药性质粒

细菌的抗药性质粒胡焱（安徽省铜陵市第九中学２４４０１１）１９２９年Ａ．Ｆｌｅｍｉｎｇ偶然发现了青霉素,１９４０年Ｅ．Ｂ．Ｃｈａｉｎ等人从青霉菌的培养物中分离提纯出青霉素结晶。自此抗菌素得到了广泛的应用。然而某些致病菌随之出现了抗药性。在研究细菌抗药性...     

大肠杆菌抗药性质粒R144drd3温度敏感突变型的分离

温度敏感突变型可用于研究DNA复制的控制机制,也可用于测定质粒的拷贝数,还可作为遗传分析研究的工具。抗药性质粒R144drd3是去阻遏、抗卡那霉素、Ej-质粒,转移频率在10^-3-10^-1之间,是国内外实验室在分子遗传学研究中常用的抗药性质粒。 我们用整体诱变的方法,获得了抗药性质粒R144drd3温度敏感突变型。对其中一菌株进行温度敏感效应侧定,42℃ 表现温度敏感。进行温度敏感部位测定,结果证明,大肠杆菌抗药性质粒R144drd3经诱变剂亚硝基腮处理后产生的温度敏感突变型属于抗性基因温度敏感突变型。回复突变频率为4.5 X 10^-8.     

大肠杆菌抗药性质粒R144drd3温度敏感突变型的分离

温度敏感突变型可用于研究DNA复制的控制机制,也可用于测定质粒的拷贝数,还可作为遗传分析研究的工具。抗药性质粒R144drd3     

萘质粒转移到大肠杆菌中合成靛蓝的研究

利用含有萘降解质粒的假单胞菌,通过接合和转化,把这种质粒转移到大肠杆菌中,获得接合子和转化子。这种接合子和转化子不仅在L-培养基中能合成靛蓝,而且能在以萘作唯一碳源和能源的培养基中生长繁殖。因此,本工作不仅为微生物合成染料开拓新的途径,而且对研究环境有毒污染物降解菌的遗传工程也具有一定的意义。     

大肠杆菌质粒突变体(p#GTES)的特性分析

大肠杆菌(E.coli)RRI质粒(pGTE5)的β-内酰胺酶基因(β-lactamas gene)可以在E. coli与枯草杆菌(Bacillus subtilis)中复制和表达。但是,在E. coli细胞中向胞外分泌β-内酰胺酶量少,活力低,对氨苄青霉素(Ampicillin,简称Ap)的抗性也低。将该菌株用紫外线(30w,40cm,150s)和硫酸二乙酯双重诱变,在含Ap的LB平板上筛选到已．Coli质粒突变体(p#GTE5)。     

质粒在大肠杆菌和沼泽红细菌之间的接合转移

人们以光合细菌中的紫色非硫光合细菌如球形红细菌和荚膜红细菌等为模型,在阐明光合作用机制等方面取得了很多成果,但对于紫色非硫光合细菌中的沼泽红细菌报道较少。直到1988年Harwood等人发现沼泽红细菌可以利用多种芳香族化合物如木质素单体、苯甲酸和4—羟基苯甲酸等作为唯一碳源进行光照厌氧生长或好氧生长,使沼泽红细菌成为研究该类化合物降解机制的一个良好模型。近年来,沼泽红细菌降解苯甲酸的途径已基本搞清。目前,研究集中于两个方向,一是有关酶类的提纯及性质研究,二是有关基因的克隆。     

通过接合作用质粒从大肠杆菌到棒状杆菌的转移

构建了可接合转移的穿梭质粒pXZ911、pBZ51和pBZ52。这些质粒中含有具转移功能的Mob片段和在棒状杆菌中复制的复制区。以大肠杆菌S17—1为供体菌,通过接合转移作用,可将这些质粒转移到谷氨酸棒杆菌ATCCl3032、谷氨酸棒杆菌ATCC21543、北京棒杆菌B3、北京棒杆菌1．299、裂氏棒杆菌B43、黄色短杆菌ATCC 14067等棒状杆菌苗株,接合转移频率分别为：9X10^-5,1X10^-4,8．5x10,2．3X10^-4×10^-5,2．9X10^-5。本文还探索了大肠杆菌和几种革兰氏阳性棒状杆菌问基因转移的方法、转移频率、影响转移频率的因素、宿主范围等问题。     

大肠杆菌噬菌体C2的一些物理化学特性

大肠杆菌噬菌体C2是含RNA的微球形噬菌体,直径约22毫微米。提纯的噬菌体在SSC缓冲液中沉降系数为79 S,在260毫微米比吸收值为7．8／毫克／毫升。纸层析分析表明其核酸碱基组成的克分子百分数为：A22．0、U 27．0、G 26．1和C 24．8。其解链温度为5 7．5℃。聚丙烯酰胺凝胶电泳测得RNA分子量为11×106。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测得外壳蛋白和A蛋白的分子量分别是13,200和42,000。     

大肠杆菌质粒的快速提取

质粒的提取是生物学中的常规技术之一 ,但常规法提取质粒十分复杂 ,繁琐并且费时。国外公司的试剂盒大大简化了此过程。但价格使国内大多数实验室难以承受。我们利用自制的玻璃粉提取质粒 ,大大简化了提取过程 ,同时相对于进口试剂盒而言 ,实验成本也大大降低     

邯郸地区棉铃虫抗药性的一些生物化学特性(英文)

对河北邯郸地区的抗性棉铃虫(Helicovrpa armigera H(?)bner)种群不同发育阶段乙酰胆碱酯酶(AChE)对灭多威和对氧磷的敏感磷的敏感度结果表明:4-5龄幼虫的AChE在棉铃虫整个发育期中敏感度是最低的,成虫期的AChE最敏感,蛹期AChE平均敏感度低于幼虫期。用甲基对硫磷和灭多威以LD_5的诱导剂量和LD_(50)的选择剂量处理棉铃虫幼虫后,AChE对底物的亲和力和对抑制剂的敏感度发生了明显的变化,水解β-乙酸萘酯的羧酸酯酶对底物的亲和力明显提高,而水解α-乙酸萘酯的羧酸酯酶对底物的亲和力在处理后24小时无明显改变。谷胱甘肽-S-转移酶活性,低剂量诱导组最高降低至78％和43％,而高剂量选择组提高15％,诱导组和选择组对底物的亲和力均明显降低,处理的剂量和处理后时间明显地影响棉铃虫磷酸酯酶的活性及其对底物的亲和力。     

枯草杆菌和大肠杆菌间通过原生质体融合的质粒pHV33的转移

用带有质粒pHV 33(Ap~R Tc~R Cm~R,由大肠杆菌质粒pBR 322片段和金黄色葡萄球菌质粒pC194片段联接成的嵌合质粒)的大肠杆菌SK1592和枯草杆菌FD1980(trp~- Sm~R Rif~R)作为亲本,在DNase1始终存在的条件下制备原生质体,并经PEG诱导融合,在含Sm、Rif、Cm的高渗培养基上获得融合子。融合子在菌落形态、产芽孢、染色标记等十几项特征上都和枯草杆菌亲本相同,唯一相同于大肠杆菌亲本的便是质粒pHV33的Cm~R特征。用融合子的DNA抽提物转化大肠杆菌,获得Ap~R、Tc~R、Cm~R转化子。相反方向的转移没有成功。质粒pHV33在融合子和枯草杆菌中都较不稳定。和有关文献报道一致,质粒有关的抗性Ap~R、Tc~R和Cm~R在大肠杆菌中都能表达,但是在枯草杆菌中则只有Cm~R得以表达。     

提取质粒的一些经验

在质粒DNA的提取过程中,尤其是那些不能扩增的质粒,常因拷贝数低而提取困难,收率不高,甚至发生质粒完全丢失的现象。而放线菌质粒的提取条件更是因菌而异,难度较大,现仅将我们试验中的一些经验介绍如下。1.培养基对质粒提取收率的影响一般来说微生物的遗传性是稳定的,有无质粒也是一种固有的属性,除了诱变剂之外培养基的改变不会对此有何重大的影响。但是,有的菌则不然,如创新霉素产生菌Actinophanes jinanesis R_4,斜面培养基中所用琼脂有较大的关系。当用青岛产海燕牌条状琼脂时,培养的菌可以提取到质粒,如用粉末状琼脂就不     

脂肪嗜热芽孢杆菌质粒pFD101的限制性内切酶图谱

从脂肪嗜热芽孢杆菌T525中抽提得到的隐蔽性质粒pFD101,经纯化后通过琼脂糖凝胶电泳和电镜观察,确证为cccDNA。经测定,pFD101的分子量为3.83×10~6道尔顿。具有限制酶HindⅢ切点1个、SalⅠ和HpaⅡ切点各2个,没有EcoRI、BamHI和PstⅠ切点。根据限制酶片段的分子量作出了pFD101的简单酶切图。     

肠聚集性大肠杆菌质粒的研究

本文介绍了肠聚集大肠杆菌（ＥＡｇｇＥＣ）质粒的同源性与质粒ＤＮＡ探针,质粒对粘附等特性的介导以及质粒ＤＮＡ的基因结构等的研究现状。