氨基酸显色剂茚三酮试剂的研究（二）──不同浓度显色剂对氨基酸含量的影响

氨基酸显色剂是氨基酸分析的重要试剂之一。主要成份是茚三酮、二甲亚砜、还原剂、氢氧化锂等有机试剂合成的氨基酸显色剂（以下称显色剂）。目前这种显色剂依赖从国外进口,由于受价格、进口周期及有效期限等诸多因素的影响,使之远远不能满足国内用户的需要,为适应国内用户的需要,进一步论证自制显色剂的可行性和可靠性,确定显色剂的最佳配方,本项目对自制显色剂的存放时间［１］、不同浓度显色剂、以及显色剂光学试验等项指标进行了全面系统地分析比较,本研究观察了１００ｍｌ溶液中显色剂含量分别为５ｍｇ、１０ｍｇ、１５ｍｇ、２０ｍｇ、２５ｍｇ等不同浓度的自制和进口显色剂对氨基酸含量的影响,结果表明,当显色剂的浓度为１５ｍｇ／１００ｍｌ时,氨基酸可出现最大峰值、测定所得氨基酸浓度显著高于２０、２５ｍｇ／１００ｍｌ和５、１０ｍｇ／１００ｍｌ所得的结果。提示氨基酸显色剂不但与存放时间有关,而且与其浓度关系密切的有关理论：     

氨基酸显色剂茚三酮试剂的研究（三）──自制显色剂与进口显色剂效果比较实验

目前国内引进的大多数氨基酸分析仪,所用的显色剂不但进口周期长,价格昂贵,而且长时间保存后易造成分离效果差和灵敏度下降等问题;因此,我们于一九八０年的开始对自制显色剂进行了存放时间、不同浓度等诸多因素对氨基酸含量影响进行了系统研究,取得了令人满意的结果￣［１,２］,在此基础上,我们还对自制显色剂与进口显色剂的效果进行了比较分析,分别观察了２４ｈ及１—４周内自制显色剂与进口显色剂对３８种标准氨基酸的影响,实验结果表明,自制显色剂的灵敏度显著高于进口显色剂,Ｐ＜０．０１。氨基酸总量的检测灵敏度,（２４ｈ）高于进口２０％,（第一周）提高了２７．４５％（第二周）提高了２１．３９％,（第三周）提高２１．３９％,（第四周）提高２８．１８％。     

氨基酸显色剂茚三酮试剂的研究（三）：自制显色剂与进口显色…

目前国内引直的大多数氨基酸分析仪,所用的显色剂不但进口周期长,价格昂贵,而且长时间保存后易造成分离效果差和灵敏度下降等问题;因此,我们于一九八０年的开始对自制显色剂进行了存放时间、不同浓度等诸多因素对氨基酸含量影响进行了系统研究,取得了令人满意的结果,在此基础上,我们还对自制显色剂与进口显色剂的效果进行了比较分析,分别观察了２４ｈ及１－４周内自制显色剂与进口显色剂对３８种标准氨基酸的影响,实验结果     

氨基酸显色剂茚三酮试剂的研究（二）：不同浓度显色剂对氨基…

氨基酸显色剂是氨基酸分析的的重要试剂之一,主要成份是茚三酮、二甲亚砜、还原剂、氢氧化锂等有机试剂氨基酸显色剂（以下称显色剂）。目前这种显色剂依赖从国外进口,由于受价格、进口周期及有效期限等诸多因素的影响,使之远远不能满足国内用户的需要,为适应国内用户的需要,进一步认自制显色剂的可行性和可靠性,确定显色剂的最佳配方,本项目对自制显色剂的存放时间、不同浓度显色剂、以及显色剂光学试验等项指标进行了全面系     

混合醇体系中测定氨基酸的茚三酮光度法

氨基酸一般利用自动分析仪定量测定,但需高精密仪器,而基层研究单位一般难以采用,而且分析也不需要如此精密。利用茚三酮能够定量测定氨基酸,除脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮形成黄色化合物外,其它所有氨基酸均与茚三酮反应形成蓝紫色物质,溶液颜色深浅与氨基酸含量成正比。据此本文对氨基酸的茚三酮光度法测定进行了研究和改进。在混合醇体系中以醋酸钠-醋酸为缓冲溶液,加入抗坏血酸以增加反应的灵敏度,100℃水浴20分钟完成显色反应。并对酸度、试剂用量、反应时间等因素进行了研究,拟定了用于混合氨基酸总量测定的操作程序。     

三氯化钛对氨基酸茚三酮显色的影响

在氨基酸的分析中,常用茚三酮显色法进行定性定量测定。无论用离子交换柱层析和液体色谱法还是用氨基酸自动分析仪分析氨基酸,常在茚三酮显色剂中加入二氯化锡还原剂作为增色剂,但由于二氯化锡不稳定,配制茚三酮时加入255毫克/升的三氯化钛代     

二甲亚砜作为氨基酸分析中茚三酮试剂的溶解剂

乙二醇甲醚已广泛作为氨基酸分析中茚三酮试剂的有机溶剂。然而,经常使用一种试剂有许多不利,乙二醇甲醚有毒性,易产生过氧化物。二甲亚砜试验就是在为得到一种化学性质更好,相对乙二醇甲醚无毒代用品的情况下,经过连续试验产生的。该试验证明:二甲亚砜较之乙二醇甲醚对还原性茚三酮是一种更好的溶剂。它能以等体积替换乙二醇甲醚,在茚三酮试剂的混合液中能产生和乙二醇甲醚相等的效应,同时还可增强稳定性。本结果采用75％二甲亚砜、25％、4M、pH5.2的醋酸锂缓冲溶液配成茚三酮和还原性茚三酮溶液。这类含有一定量还原性茚三酮的混合溶液用来代替原含有乙二醇甲醚的茚三酮溶液在氨基酸自动分析仪和人工茚三酮法的氨基酸定量测定中已受到人们的欢迎。     

茚三酮与氨基酸显色反应再探

<正> 一、前言迄今为止,茚三酮与氨基酸显色反应的机理仍不十分清楚。尤其已报道的操作中,该反应对各种氨基酸选择性极低,因而使本法的应用受到了一定限制。此外,据文献报道:茚三酮与氨基酸显色反应不仅仅发生于α-氨基酸、对于β氨基酸、伯胺类等亦能进行;金属离子会干扰显色反应等。对茚三酮与氨基酸显色反应进行深     

关于茚三酮法测定脯氨酸含量中脯氨酸与茚三酮反应之探讨

测定脯氨酸含量的方法通常用磺基水杨酸或酒精提取再与酸性茚三酮反应生成稳定的红色产物,然后于波长520 nm处比色,通过标准曲线或回归方程计算脯氨酸的含量.关于其测定原理,一些植物生理学实验指导明确指出:"在酸性条件下,脯氨酸和茚三酮反应生成稳定的红色产物,用比色法于520 nm波长下测定脯氨酸的含量."[1,2]然而,在各种生物化学教科书[3～6]中描述氨基酸茚三酮反应时,则为:"在弱酸性条件下,2个亚氨基酸--脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反应并不释放NH3,而直接生成黄色化合物,其结构式如图1,最大光吸收在440 nm."为了对两种教材中不同的说法进行比较,我们查阅了各种文献,设计一些试验并进行了验证.     

氨基酸纸层析中茚三酮显色改良法

本文报道氨基酸纸层析中茚三酮显色与展层同时进行的改良方法,此方法克服了以前操作上的烦琐和斑点模糊等不足点。自1944年Consdon、Gordon和Mortain提出用滤纸来分离氨基酸、糖、肽类等物质以来,在国内外均用茚三酮喷雾法和浸湿法来显色,作为定性、定量的检测方法之一。目前国内在氨基酸研制和生产方面大多数还是采用纸层析法、而层析法中其重要的环节是显色,显色主要采用茚三酮喷雾和浸湿二法,此法不易掌握,我们根据目前生产上和氨基酸研制工作上急需解决的问题,提出了一个改良的显色法,即展层和显色同时进行,达到了较满意的效果。     

茚三酮直接加入展开剂显色的探索

在纸层析和薄层层析中,经典显色法是用显色剂对晾干后的层析谱进行喷显。1984年,朱婉华用微晶纤维素薄层层析法分析氨基酸,将茚三酮直接加进展开剂内,在展开过程中显色,获得成功。最近,我们用纸层析     

氨基酸的离子交换色谱(理论原理和实践)(续)

<正> 五、洗脱液中氨基酸的定量测定洗脱液中氨基酸的定量测定是根据洗脱液中各组分与各种显色试剂(见第一章)反应时产生的颜色强度借助光电比色计进行测量的。适合于此目的所有显色试剂中,象上面指出的最有效的是茚三酮。这种制备简单,使用方便,重复性好的茚三酮试剂由Moore 和Stein 首先提出。作为这种方法的还原剂采用氢化茚三酮—茚三酮的还原形。如所周知,在与氨基酸相互作用时茚三酮形成带颜色的物质—双配位茚酮胺(Ⅲ)和醛     

稻米赖氨酸快速测定条件的探讨

以氨基酸自动分析仪测定稻米赖氨酸含量为参照标准。在“茚三酮测定赖氨酸含量”(A法)的基础上,对该法中大米蛋白质的提取温度和时间、色温度和时间及茚三酮用量等条件进行了探讨,提出了稻米赖氨酸含量快速测(B法)。提取条件为90℃5分钟,显色条件为90℃20分钟;茚三酮试剂用1 ml。用B法对10个大米样品进行测定,赖氨酸含量与氨基酸分析仪测得的赖含量基本上一致,无显著差异(P>0.05)。     

日立835—50型氨基酸自动分析仪标准分析程序的改进

<正> 日立835—50型氨基酸自动分析仪标准分析法(柱2.6mmID×150mm),目前尚存在二点不足之处,一是当检测样品的含量为30NHOL/50μ1或更高时,氨基酸和茚三酮显色剂作用后,生成大量的双二酮茚亚胺(DYDA)兰紫色复合物,或当样     

贝克曼6300型氨基酸仪蛋白质水解氨基酸分析用试剂的研究

<正> 近十年来,我国进口了多种类型的氨基酸分析仪。与其它厂家的比较,贝克曼6300型氨基酸分析仪在分析灵敏度、分析速度、准确度等方面具有一定优点。但用户也感到有困难之处,那就是试剂需要从美国进口,不但价格较贵,外汇困难,而且千里迢迢,运来的试剂有变质品。为了满足本单位和国内其他用户的需要,我们开展了试剂国产化的研制。经过两年的努力,已取得较好的结果。经最近鉴定,蛋白质水解氨基酸分析所需试剂的主要性能指标已达到进口试剂水平。     

LC-8A氨基酸分析仪检修

<正> LC—8A氨基酸分析仪是日本柳本株式会社80年代初的产品,可以满足一般氨基酸分析的要求。它采用三元缓冲液为流动相,以磺酸离子交换树脂为分离柱(φ4×125mm)的固定相,茚三酮显色剂与氨基酸柱后衍生化,570和440nm二波长检测,SYSTEM—1100微机程序控制和信号处理。LC—8A氨基酸分析仪与其它氨基酸仪在结构上有相似之处,输液泵和检测器等基本一致。许多部件在国内买不到,维修有一定难度。在实践中,我根据现有条件,对其曾出现的故障进行了检修。实践证明效果很好。     

PICO-TAG方法测定氨基酸的研究

详细讨论了用异硫氰酸苯酯（ＰＩＴＣ）柱前衍生,反相色谱法测定氨基酸（即ＰＩＣＯ－ＴＡＧ法）的最佳条件。研究了流动相配制时溶液ｐＨ值、乙腈含量等对色谱分析的影响,并且对色谱柱的退化与再生进行了说明。氨基酸含量在１．２５～１５００ｐｍｏｌ范围内线性良好,相关系数大于０．９９９,且大多数氨基酸保留时间的变异系数小于０．５％。氨基酸采用峰面积定量,测定变异系数为０．１～１．５％。     

羊肚菌氨基酸含量变化及酯酶同工酶研究

本文对羊肚菌氨基酸含量及酯酶同工酶进行了研究,结果表明不同生长时期菌丝体的氨基酸含量变化较大,在4一10天内逐渐升高,15天达到高峰,尔后又有所降低。与此同时酯酶同工酶活性亦呈现相应的变化规律,由此可推测羊肚菌菌丝体生长过程中酯酶同工酶活性跟氨基酸代谢之间存在一定相关性。同工酶分析还发现不同子实体菌株及同一子实体不同单孢菌株间的酯酶同工酶谱基本相同,子实体与菌丝体均具有稳定的9条酶带。     

黑龙江林蛙不同部位中氨基酸的含量分析

采用茚三酮柱后衍生-氨基酸分析法,对黑龙江林蛙油、卵、皮中17种氨基酸的组成和含量进行测定。结果显示黑龙江林蛙油、卵、皮均含有17种氨基酸,氨基酸总量分别为356.5 mg.g-1,525.1 mg.g-1,752.5 mg.g-1,其中必需氨基酸分别占氨基酸总量的46.06%,38.89%,33.33%。通过对黑龙江林蛙油、卵、皮中氨基酸含量的对比分析,表明林蛙油中氨基酸的营养价值最高。     

乌梢蛇氨基酸图谱研究

目的建立乌梢蛇的氨基酸指纹图谱。方法采用L-8800型全自动氨基酸分析仪提取乌梢蛇水解氨基酸。色谱条件:分离柱直径4.6mm×40mm,离子交换树脂型,缓冲液流速0.4ml/min,茚三酮流速0.3ml/min;缓冲液泵压力茚三酮泵压力8~11.5Pa;柱温56℃。结果建立16个共有特征峰的水解氨基酸指纹图谱。结论本研究有助于提高乌梢蛇药材的质量控制水平。