用于鱼类脑垂体内分泌研究的离体灌流培育系统

本实验建立了研究鲤鱼脑垂体碎片促性腺激素（ＧｔＨ）和生长激素（ＧＨ）分泌反应的离体灌流系统。性腺退化鲤鱼的脑垂体碎片可产生稳定和可测的ＧｔＨ和ＧＨ基础分泌;引入２ｍｉｎ脉冲式鲑鱼促性腺激素释放激素类似物（ｓＧｎＲＨＡ）可产生敏感的、恢复迅速和可再现的ＧｔＨ和ＧＨ分泌峰。该系统为鱼类脑垂体激素（ＧｔＨ和ＧＨ）分泌动力学和分泌调节机理的离体研究提供了可靠的手段。     

半胱胺对草鱼下丘脑-脑垂体组织共孵育中生长激素分泌的影响

采用静态孵育和放射免疫测定技术,研究了生长抑素抑制剂半胱胺盐酸盐对草鱼脑垂体组织单独孵育或下丘脑脑垂体组织共孵育中生长激素分泌的影响。结果表明：脑垂体组织单独孵育时,半胱胺盐酸盐(0．1、1和10mmol／L)对基础生长激素分泌无影响;而下丘脑脑垂体组织共孵育时,半胱胺盐酸盐(0．1、1和10mmol／L)对基础生长激素分泌有明显影响,且是剂量依存的。神经肽hGHRH、sGnRH—A和LHRH—A对CSH影响的下丘脑脑垂体组织共孵育中生长激素分泌均无协同作用。我们认为,半胱胺盐酸盐可在下丘脑水平调节生长激素释放,半胱胺盐酸盐调节草鱼离体生长激素分泌是由下丘脑途径介导的。     

Cd^2＋对离体的鲤鱼脑垂体分泌促性腺激素的影响

采用离体的鲤鱼脑垂体灌流孵育系统,研究重金属镉离子对脑垂体分泌促性腺激素的害影响。发现Ｃｄ＾２＋既能直接刺激ＧｔＨ分泌,又抑制鲑鱼促性腺激素类似物释放激素刺激脑垂体分泌ＧｔＨ作用。实验结果提示,Ｃｄ＾２＋对鲤鱼脑垂体ＧｔＨ分泌细胞的毒定机制之一可能是它干扰了Ｃａ＾２＋的正常生理作用。     

施氏鲟不同组织来源细胞离体培养的初步研究

采用组织块移植培养技术,对来源于施氏鲟(Amursturgeon,Acipenser schrencki Brandt)肝脏、脾脏、肾脏、鳍条和心脏组织的细胞进行了原代培养,2～3天左右可见组织块周围有成纤维样细胞迁出,10天左右组织块周围形成单层细胞。对原代培养的单层细胞用胰蛋白酶-EDTA消化后传代培养,建立了可连续传代的施氏鲟肝脏、脾脏、肾脏、心脏组织细胞系。初步确立施氏鲟细胞培养的条件,培养基为MEME,培养温度为25℃,血清浓度为20%。对传代培养细胞以二甲基亚砜为保护剂在液氮冷冻保存,细胞复苏后可连续传代培养。施氏鲟细胞离体培养为开展鲟鱼病毒病和遗传资源保存研究提供了重要试验材料。     

介绍一种LHRH调节LH分泌的离体模型—分散垂体细胞灌流技术

成年雄性 SD 大鼠断头后分离出垂体前叶(anterior pituitary,AP)。用胰蛋白酶消化和机械分散制备 AP 细胞(成活率大于95%)。分散的细胞悬液与生物凝胶混合后装上灌流柱,然后用 M199溶液连续灌流24h 以上。每间隔1~h 给予一次6min 的 LHRH 脉冲式刺激。细胞在此灌流过程中有一个稳定的基础 LH 分泌水平。LHRH 刺激能迅速引起 LH 分泌。对同一剂量 LHRH 的多次刺激可产生相同的 LH 脉冲。在一定的 LHRH 浓度范围内(1×10~(-10)_1×10~(-7)mol/L),LH 分泌与 LHRH 的剂量-效应曲线呈线性。实验结果表明,连续灌流分散的 AP 细胞的技术,优于单层细胞培养和组织块灌流等其他方法,是一种较为理想的研究LHRH 调节 LH 分泌机理的体外模型。     

条叶龙胆离体根培养条件的初步研究

本试验对条叶龙胆(Gentiana manshurica)离体根生长的培养基种类、光、通气进行了试验,并在此基础上用正交试验法对影响离体根生长的7个主要成分进行了试验。找出了适合条叶龙胆离体根生长和鲜重增加的培养基是white+CH 50 mg/l,IBA 0.1 mg/l,基本培养中相应的VB_1改为0.5 mg/l,蔗糖30 g/l,pH4。     

党参的离体培养及植株再生的研究

在附加激素的MS培养基上,培养党参下胚轴和无菌芽切段,诱导产生愈伤组织并且再生植株。经过两年多(15个世代)的继代培养,建立了党参体细胞无性系。实验结果表明:(1)培养基MS 0.4mg/L 2,4-D 0.8mg/L Kt 2.0mg/L IAA对愈伤组织诱导及继代培养,MS 0.2mg/L 6-BA诱导外植体产生丛芽和愈伤组织再分化,MS 0.5mg/L NAA 0.2mg/L 6-BA及MS 0.2mg/L NAA诱导生根效果最好。(2)愈伤组织再分化经过胚状体途径。     

多巴胺、雌二醇及睾酮对虎纹蛙离体脑垂体促性腺激素分泌的影响

为了解虎纹蛙促性腺激素分泌的调节机理,用离体静态培育系统和放射免疫测定法,研究了多巴胺（ＤＡ）、雌二醇（Ｅ２）和睾酮（Ｔ）对雌性虎纹蛙离体脑垂体薄片促黄体激素（ＬＨ）和促卵泡激素（ＦＳＨ）分泌活动的影响。结果表明：０．１～１０μｍｏｌ／Ｌ的ＤＡ对成熟前期和冬眠期虎纹蛙离体脑垂体型薄片的ＬＨ及ＦＳＨ的释放都有抑制作用,并且随着ＤＡ浓度的增加,抑制作用逐渐增强。１和１０μｍｏｌ／Ｌ的Ｅ２显著刺激成熟前     

提高西瓜离体培养植株再生效率的研究

本文以"京欣1号"母本和"伊选"西瓜4天苗龄子叶为外植体,研究离体培养植株高频率再生体系.结果表明"伊选"子叶远轴端外植体的再生频率仅为10%,子叶近轴端外植体在5mg/LBA+0.1mg/L IAA的激素组合下植株再生频率为100%,平均每个外植体的丛生芽数在所有组合中最多,为10.3个;"京欣1号"母本子叶近轴端外植体在2mg/L BA+0.5mg/L IAA激素组合下植株再生频率为100%,平均每个外植体的丛生芽数在所有组合中最多,达6.9个.本试验条件下,子叶近轴端外植体接种4天即分化出不定芽,至再生苗的移栽仅需40天,在MS+0.1mg/L NAA的生根培养基上的生根率为97.3%,移栽成活率达98.5%.     

LHRH-A缓释剂对雌性赤点石斑鱼卵巢发育、性类固醇激素分泌及脑垂体GTH细胞超微结构的影响

取75尾网箱养殖的2～3龄雌性赤点石斑鱼,分为3组（高、低剂量组和对照组）,各25尾。高剂量组埋植促黄体生成索释放激素类似物（LHRH—A）缓释剂,剂量为300μg／kg体重,低剂量组为100μg／kg体重,对照组埋植不含LHRH—A的药丸。分别在实验开始和埋植药丸后0、10、20、30、40天抽血,用放射免疫测定血清类固醇激素（E2、T）;解剖鱼体测定相关指标,计算性腺成熟系数;取性腺和肝脏组织常规组织学切片并透射电镜观察。埋植后第10-30天,两种剂量处理组的排卵率均高于对照组,高剂量组显著高于低剂量组。在第10天性腺成熟系数高剂量组为1．055％,卵母细胞已有部分迅速发育到Ⅳ期末（核偏位）;低剂量组相对缓慢。第20天性腺成熟系数高剂量组达1．858％,低剂量组为0．987％;处理组卵母细胞基本发育成熟。埋植后第10天,两处理组血清E2和T水平显著升高;第20天显著下降;此后E2保持在较低的水平,T显著低于对照组水平。超微结构的观察证实脑垂体GTH细胞在LHRH—A缓释剂诱导性腺发育成熟和排卵过程中处于活跃的合成与分泌状态。LHRH—A缓释剂能有效诱导赤点石斑鱼卵巢发育成熟和排卵,而性类固醇激素（E2、T）只与卵黄生成有关,与排卵无关。     

人工合成草鱼生长激素cDNA在大肠杆菌中的表达

经密码子优化的人工合成草鱼生长激素cDNA与表达载体pET-28a( )重组,构建重组表达质粒PET－GH。转化在肠杆菌BL21（DE3）,筛选阳性克隆,IPTG诱导表达,12．5％的SDS－PAGE分析显示,大肠杆菌表达产物中含有与草鱼生长激素分子量一致的新增蛋白带,激光密度扫描,其产量约占菌体总蛋白的40％,金属离子螯合层析柱亲和纯化,获得电泳纯的重组蛋白。Western-blotting和酶联免疫吸附受体法检测证实,重组蛋白与抗草鱼生长激素的多克隆抗体发生特异性结合;复性合的重组蛋白有与天然草鱼生长激素一致的生物学活性。     

草鱼生长激素基因在毕赤酵母中的表达

将草鱼生长激素基因（cGH）的cDNA亚克隆到酵母表达载体pPIC9K中,经电击转化导入毕赤巴斯德酵母GS115菌株,获得转化子。菌落PCR技术筛选证实cGH已经整合到了酵母染色体上。对重组酵母进行诱导表达,SDS-PAGE和Western印迹分析,结果表明cGH的毕赤巴斯德酵母GS115菌株中获得了高效表达。     

草鱼生长激素在毕赤酵母中的高效分泌表达

为大量获得具有生物学活性的草鱼生长激素,对草鱼生长激素cDNA在毕赤酵母中的表达进行了研究。将草鱼生长激素cDNA克隆入毕赤酵母表达载体pGAPZ-α-B,构建表达载体pGAPZ-α-B-GH。在三磷酸甘油醛脱氢酶（GAP）启动子的调控作用下,一个类似于天然生长激素大小、分子量约22kD的蛋白获得表达,其表达量约50mg/L。Western杂交表明：表达的蛋白与兔抗草鱼生长激素的多克隆抗体特异结合,证实该表达蛋白为草鱼生长激素;受体夹心式ELISA检测表明：表达的草鱼生长激素具生物学活性,能与不同种鱼来源的肝膜受体特异结合。     

鲤鱼（Cyprinus carpio）生长激素基因的亚克隆及其序列分析

本文对ＰＣＲ扩增的６６８ｂｐ的ＤＮＡ片段进行了亚克隆,然后以Ｓａｎｇｅｒ双脱氧中止法为原理,利用美国ＡＢＩ公司３７０Ａ自动核酸序列分析仪,确定了６６８ｂｐ的核苷酸序列。序列分析表明鲤鱼生长激素基因的开放读框含有６３０ｂｐ,并推测其中包括２２个氨基酸的信号肽和１８８个氨基酸的成熟多肽。鲤鱼生长激素基因的酶切图谱和序列分析的结果都证明我们已获得了全长的鲤鱼生长激素基因。     

Effect of Corticotropin Releasing Factor Injected Into the Median Eminence on Growth Hormone Secretion in Male Rats

We determined the dose-response relationship and examined the time-related effect of CRF (corticotropin releasing factor) injected directly into the Median Eminence (ME) on GH (growth hormone) secretion in conscious intact and castrated male rats. Doses of 0.25, 0.75, 1, and 1.5 nmol CRF dissolved in 1 l of saline, or saline alone in the controls, were injected into the ME, and blood samples collected through indweling catheters implanted in the jugular vein, 30, 60, 90, and 120 min post-injection to determine plasma GH levels by RIA. After 120 min the animals were decapitated. Trunk blood of decapitated animals was used to determine plasma testosterone and glucose levels. CRF at all the doses studied significantly decreased plasma GH in castrated and intact animals. The results suggest that in male as in female rats, CRF inhibits by itself GH secretion, at least in part, by a central action in the ME; all the doses of CRF studied suppressed GH secretion in castrated and intact males; finally, CRF at ME levels may participate in a variety of stress-related responses, including growth inhibition, through GH suppression.     

细胞因子对GH3细胞中人生长激素基因表达的影响

为了研究细胞因子IL 11、睫状神经营养因子 (CNTF)和转化生长因子 (TGF β)对大鼠垂体GH3 细胞中人生长激素 (hGH)的基因启动子活性的影响及其与垂体特异性转录因子Pit 1蛋白的关系 ,首先建立含hGH基因启动子 (- 4 84～ 30bp)和荧光素酶融合基因的稳定转化GH3 细胞系 ,然后用细胞因子刺激 ,检测细胞培养液和细胞裂解液中GH的含量 ,反映它们对GH分泌和合成的影响 ;检测GH3 细胞内荧光素酶的变化 ,说明细胞因子对hGH基因启动子活性的作用。将Pit 1蛋白表达质粒 (pcDNA pit 1 cDNA)单独转染或与Pit 1反义寡核苷酸 (Pit 1OND)共转染于稳定转化的GH3 细胞中 ,观察加入细胞因子后荧光素酶的变化 ,探讨细胞因子的作用与Pit 1蛋白的关系。结果表明 ,IL 11(2 0nmol/L)、CNTF(10nmol/L)能刺激大鼠垂体GH3 细胞中GH的分泌和合成 ,增强GH3 细胞中荧光素酶的表达 ,分别增加到对照组的 12 6 %、136 %。TGF β(5nmol/L)能减少GH的分泌和合成 ,抑制荧光素酶的表达到对照组的 77%。Pit 1蛋白过表达和表达被抑制对细胞因子的调节作用没有影响。这说明IL 11、CNTF和TGF β可通过调节大鼠垂体GH3 细胞中hGH基因启动子活性影响GH的合成 ,Pit 1蛋白可能不参与这些调节作用。     

Substance P stimulates Growth Hormone (GH) and GH-Releasing Hormone (GHRH) secretions through tachykinin NK2 receptors in sheep

Substance P is ubiquitous undecapeptide belonging to the tachykinins family. It has been found in the hypothalamus and is involved in the hypothalamo-hypophysial axis in several mammals, including human. Previous studies have shown that substance P increases GH secretions in rats and human. In this study, we have shown that intravenously infused substance P in sheep caused an increased level of Growth Hormone (GH) and GH-Releasing Hormone (GHRH), and decreased Somatotropin Release Inhibiting Hormone (SRIH) secretions. GH was obtained from peripheral blood. GHRH and SRIH were directly collected from hypophysial portal blood, using a trans-nasal surgery technique in a vigil sheep that allowed accessing to hypothalamo-hypophysial portal vessels. Hormones assays were performed by radioimmunoassay (RIA). Moreover, we showed that substance P-induced GH and GHRH secretion appears to be mediated by NK2 tachykinin receptors, since it is specifically blocked by a non peptidic tachykinin NK2 receptor antagonist (SR48968, Sanofi, Montpellier, France) whereas a non peptidic tachykinin NK1 antagonist (SR140333, Sanofi, Montpellier, France) failed to modify GH and GHRH hormones secretions.     

生长激素基因(GH2)多态性与猪部分生产性能的关系

采用PCR -RFLP对南昌白猪 (117头 )和大约克夏猪 (36 1头 )的GH 2基因 - 119～ +486bp的片段进行了扩增 ,并用ApaⅠ酶切 ,产生了 2个等位基因A(44 9+10 1+5 5bp)和B(316 +133+10 1+5 5bp)。分析了不同基因型对个体初生重、2月龄重、4月龄重、6月龄重、校正背膘厚、平均背膘厚、瘦肉率和料重比等生产性能的影响。结果表明 ,在南昌白猪中 ,不同GH 2基因型间在所测的生产性能上差异不显著 (P >0 0 5 ) ;在大约克夏猪中 ,AA型猪的瘦肉率最低、与BB型猪相比 ,差异显著 (P <0 0 5 )。     

水环境中K+、Ca2+对中国明对虾幼虾生存的影响

通过静态急性毒性试验和正交设计,研究K 、Ca2 及其相互作用对中国明对虾幼虾生存的影响。结果表明:在盐度为6的水环境中,K 和Ca2 浓度与幼虾存活率均呈双相剂量-反应关系;在低离子浓度中,Ca2 浓度变化对中国明对虾幼虾存活的影响略大于K ,K 的LC50为11.56mg.L-1,Ca2 的LC50为22.43mg.L-1;在高离子浓度中,K 浓度变化对中国明对虾幼虾存活的影响明显大于Ca2 ,K 的LC50为176.93mg.L-1,Ca2 的LC50为956.99mg.L-1;在正交试验范围内,K 、Ca2 /K 及其相互作用均存在显著影响,影响程度依次为K >Ca2 /K >K 和Ca2 /K 间的相互作用;在高K 、Ca2 水环境中,高K 、高Ca2 之间存在拮抗作用,具体表现为高钙可以提高中国明对虾幼虾在高K 浓度水环境中的存活率,当Ca2 /K 为4时K 、Ca2 之间的拮抗作用最为显著。