m6A甲基化修饰识别蛋白YTHDF2在肝癌组织中的表达及临床意义

摘要 目的：探讨m6A甲基化修饰结合蛋白YTHDF2(YTH domain-containing family protein 2)在肝癌（Hepatocellular carcinoma, HCC）组织中的表达及临床意义。方法：1）采用Western blot和实时荧光定量PCR（Quantitative Real Time PCR, qRT-PCR）检测20对肝癌和癌旁组织中YTHDF2在蛋白和mRNA水平的表达情况。2）通过免疫组织化学（Immunochemistry, IHC）检测40对肝癌和癌旁组织芯片YTHDF2的表达情况,并以H-score评分法进行半定量分析。3）通过基因表达谱数据动态分析数据库GEPIA（http://gepia.cancer-pku.cn/）分析YTHDF2在肝癌组织中的表达及对患者生存预后的影响;通过肿瘤免疫评估资源数据库TIMER(https://cistrome.shinyapps.io/timer/)分析YTHDF2与肝癌免疫微环境的相关性。结果：相比于癌旁肝组织,YTHDF2在肝癌组织中蛋白和mRNA水平均显著高表达（P＜0.05）;GEPIA数据库分析验证：YTHDF2肝癌组织表达水平高于正常肝组织,且YTHDF2在肝癌不同分期中表达水平均高于正常肝组织（P=0.0206）,Stage III期最为明显;YTHDF2高表达患者的总体生存率（Overall Survival,OS）和无复发生存率（Disease Free Survival, DFS）均较差（P=0.00027和P=0.013）;TIMER数据库分析表明：YTHDF2在肝癌免疫微环境中与各类免疫细胞呈正相关（P＜0.05）,但肝癌患者的累积存活率不受免疫细胞的影响（P＞0.05）,YTHDF2高表达对患者的生存预后具有不良影响（P=0.007）。结论：YTHDF2在肝癌组织中显著高表达,且YTHDF2高表达水平对肝癌患者生存预后具有不良影响,YTHDF2可作为肝癌临床预后判断的分子标志物,为今后肝癌治疗靶点提供新的策略。     

原发性肝细胞癌组织中Beclin 1的表达及其意义

目的：探讨原发性肝细胞癌（HCC）组织中Beclin 1的表达及其在肝细胞癌发生发展中的作用。方法：应用免疫组化EnVision法检测54例肝细胞癌组织及其癌旁组织中Beclin 1的表达,分析其与肝细胞癌的病理分级、临床分期、侵袭及转移等临床病理因素的关系。结果：HCC组织中Beclin 1阳性表达率明显低于癌旁组织（X2=7.53,P〈0.01）。病理分级Ⅲ～Ⅳ、TNM分期Ⅲ～Ⅳ、存在静脉浸润和淋巴结转移的肝癌组织中的Beclin 1表达水平明显低于病理分级Ⅰ～Ⅱ、TNM分期Ⅰ～Ⅱ、无静脉浸润和淋巴结转移的肝癌组织（P〈0.01）。结论：HCC组织中存在Beclin 1表达缺失,可能与HCC的发生有着密切的关系,且对HCC的恶性生物学行为有重要影响。     

CD39的临床意义及其与肝癌浸润T细胞耗竭的相关性分析

摘要 目的：探索CD39分子（编码基因ENTPD1）在原发性肝细胞肝癌（Hepatocellular carcinoma, HCC）中的表达、临床意义及其与HCC中免疫浸润和T细胞耗竭的相关性。方法：TIMER、GEPIA、Kaplan-Meier Plotter、TCGA等数据库分析CD39在肝癌中的差异性表达、与免疫浸润的关系、相关基因的表达及其与肝癌患者预后的关系。免疫荧光染色、细胞测序和流式检测验证临床HCC患者的癌及癌旁组织中CD39的差异性表达及其和CD8⁺T细胞耗竭特性的相关性。结果：（1）生物信息学分析结果显示：CD39在多种肿瘤组织中表达上调（包括HCC）（P＜0.05）；且其表达水平与HCC的临床预后等显著相关（P＜0.05）；与CD39低表达组相比，HCC中CD39高表达组患者无复发生存期（relapse-free survival, RFS）（P=0.025）和无进展生存期（progression-free survival, PFS）（P=0.026）较短；CD39与HCC肿瘤微环境中CD8⁺T、CD4⁺T、巨噬细胞等免疫细胞浸润水平均有明显正相关。（2）临床HCC样本验证：免疫荧光和流式结果显示CD39在癌组织中的表达水平高于癌旁正常组织，与耗竭相关分子LAYN、TIM3、CTLA4等共表达，且在耗竭CD8⁺T细胞中表达比例显著高于非耗竭细胞。结论：CD39在HCC肿瘤组织及浸润的CD8⁺T细胞中高表达，与HCC的RFS、PFS、免疫细胞浸润等紧密相关，且参与CD8⁺T细胞耗竭。     

肝细胞癌中转录因子E2F7对Wnt/β-catenin信号通路活性的影响

探讨肝细胞癌(HCC)中非典型性E2F家族成员E2F7在肝癌细胞生长、分化中的作用及可能涉及的分子机制.本研究运用实时荧光定量PCR检测38例原发性肝细胞癌及对应的癌旁组织中E2F7基因mRNA的表达情况;分别通过基因过表达和RNA干扰技术上调或下调E2F7基因表达,并运用实时荧光定量PCR和Western印迹检测肝癌细胞株MHCC-H中β-catenin及其靶基因cmyc的表达情况;双荧光素酶报告基因系统检测E2F7对Wnt/β-catenin信号通路活性的影响;核浆分离实验检测过表达E2F7基因对β-catenin入核的影响;免疫共沉淀实验检测异位表达E2F7与内源β-catenin的相互作用.结果显示,肝细胞癌组织中E2F7基因的表达量显著高于相应的癌旁组织(P0.001);转录因子E2F7可与β-catenin相互作用并促进β-catenin进入细胞核.转录因子E2F7可以促进Wnt/β-catenin信号通路的活性.     

肝细胞癌中抑癌基因的发现与研究进展

肝细胞癌（HCC）的发病率高、治疗效果差。HCC的发病机制复杂,主要有2类：肝炎、酒精、黄曲霉素、代谢紊乱引起的肝损伤,进而导致的肝硬化;致癌基因和抑癌基因的突变或对应染色体区域的扩增或缺失。细胞内一些信号通路参与了HCC的发生发展,包括RAF／MEK／ERK、P13K／AKT／mTOR、WNT/β-catenin、胰岛素样生长因子、肝细胞生长因子／c-MET、生长因子调节的血管新生等6类信号通路。抑癌基因通过调节信号通路而调节细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡等对肿瘤的发生、发展起重要作用的过程。我们简要概述HCC相关的肿瘤抑制分子及其所在的信号通路及作用的分子机制。     

肝细胞肝癌组织GPSM2、GFPT2、SNORA51 mRNA表达与临床病理特征的关系及对预后的影响研究

摘要 目的：探讨肝细胞肝癌（HCC）组织G蛋白信号调节蛋白2（GPSM2）、谷氨酰胺果糖-6-磷酸转氨酶2（GFPT2）、核仁小RNA 51（SNORA51） mRNA表达与临床病理特征的关系及对预后的影响。方法：选择2017年1月～2018年12月于内蒙古医科大学附属医院诊断并经手术切除治疗的HCC患者60例。采用实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）检测HCC组织、癌旁组织中GPSM2 、GFPT2 、SNORA51 mRNA表达情况,分析GPSM2、GFPT2 、SNORA51的mRNA表达与HCC患者临床病理特征的关系。随访3年,应用Kaplan-Meier生存曲线分析不同分组HCC患者预后情况,并应用单因素和多因素Logistic回归分析HCC患者预后的影响因素。结果：HCC组织中GPSM2、GFPT2 、SNORA51 mRNA表达水平显著高于癌旁组织（P<0.05）。HCC组织中GPSM2 mRNA高表达组、GFPT2 mRNA高表达组、SNORA51mRNA高表达组血管侵犯、TNM分期Ⅲ期比例显著高于GPSM2 mRNA低表达组、GFPT2 mRNA低表达组、SNORA51mRNA低表达组（P<0.05）。Kaplan-Meier法分析显示GPSM2 mRNA低表达组、GFPT2 mRNA低表达组、SNORA51mRNA低表达组3年生存率显著高于GPSM2 mRNA高表达组、GFPT2 mRNA高表达组、SNORA51mRNA高表达组（P<0.05）。多因素Logistic回归分析模型结果显示,血管侵犯、TNM分期Ⅲ期、GPSM2 mRNA高表达、GFPT2 mRNA高表达、SNORA51 mRNA高表达是HCC患者死亡的危险因素（P＜0.05）。结论：GPSM2 、GFPT2、SNORA51在HCC组织中异常高表达,且与血管侵犯、TNM分期等临床病理特征有关,GPSM2 、GFPT2 、SNORA51高表达是HCC患者死亡的危险因素。     

肝细胞肝癌组织NTS、SPNS2、Mortalin表达与上皮间质转化标志物、临床病理特征和预后的关系

摘要 目的：探讨肝细胞癌（HCC）癌组织神经降压素（NTS）、鞘氨醇-1-磷酸转运体2（SPNS2）、热休克蛋白75（Mortalin）表达与上皮间质转化（EMT）标志物、临床病理特征和预后的关系。方法：选取2010年1月～2017年1月联勤保障部队第九〇〇医院仓山院区收治的90例HCC患者,采用免疫组化法检测患者癌组织和对应癌旁组织中NTS、SPNS2、Mortalin及EMT标志物N-钙粘蛋白（N-Cad）、E-钙粘蛋白（E-Cad）表达情况。分析NTS、SPNS2、Mortalin表达与HCC患者EMT标志物、临床病理特征和预后的关系。结果：HCC癌组织中NTS、SPNS2、Mortalin、N-Cad阳性表达率高于癌旁组织,E-Cad阳性表达率低于癌旁组织（P＜0.05）。Pearson相关性分析显示,HCC癌组织中NTS、SPNS2、Mortalin表达水平与N-Cad表达水平呈正相关,与E-Cad表达水平呈负相关（P＜0.05）。 HCC癌组织中NTS、SPNS2、Mortalin表达与Child-Pugh分级、血管侵犯、巴塞罗那临床肝癌（BCLC）分期、淋巴结转移、远处转移有关（P＜0.05）。90例HCC患者术后5年总生存率为48.89％（44/90）。Kaplan-Meier生存曲线分析显示,NTS、SPNS2、Mortalin阳性组总生存率分别低于NTS、SPNS2、Mortalin阴性组（P＜0.05）。结论：HCC癌组织中NTS、SPNS2、Mortalin表达上调,与EMT、Child-Pugh分级、血管侵犯、BCLC分期、淋巴结转移、远处转移和预后有关,可作为HCC病情及预后的辅助评估指标。     

大鼠肝癌模型中Piwil4、Mael和Ddx4基因mRNA和蛋白表达水平及其与肿瘤检测的关系

PIWI和piRNA的表达水平与肿瘤类型密切相关。Piwil2 mRNA在肝癌中的表达量比肿瘤周围的肝脏组织的表达量高。PIWI/piRNA通路基因Piwil4、Mael和Ddx4为候选癌基因,在多种癌组织中表达,而在肝癌组织中的研究尚无报道。为探讨Piwil4、Mael和Ddx4基因在肝癌组织中表达水平变化的影响,建立了大鼠肝癌模型,并提取血清用ELISA方法检测肿瘤标记物,采用实时荧光定量PCR、蛋白质免疫印迹方法和免疫组织化学方法检测正常肝组织与模型组肝组织中Piwil4、Mael和Ddx4基因mRNA转录和蛋白表达水平。结果表明,大鼠肝癌动物模型血清中肿瘤标记物含量明显升高。Piwil4、Mael和Ddx4基因mRNA及蛋白在肝癌模型组织中高表达。研究表明,肝癌模型组织中Piwil4、Mael和Ddx4基因表达水平有望作为肝癌检测的一种分子标志物。     

Bmi1在肝癌组织中的表达及其与细胞增殖和凋亡的关系

目的：探讨Bmi1在肝细胞肝癌（HCC）中的表达及与增殖和凋亡的关系。方法：收集HCC标本54例及相应的癌旁组织,10例正常肝组织标本,采用免疫组织化学EnVision二步法显示Bmi1的表达并结合增殖与凋亡特征进行分析。结果：在肝癌组织、癌旁组织细胞中Bmi1表达定位于胞核中,阳性表达率分别为79.6%（43/54）,31.2%（17/54）,10例正常肝组织未见表达,3组差异有统计学意义（P〈0.005）。HCC中Bmi1的高表达与年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤数目、临床TNM分期、是否有肝硬化及是否有HBsAg感染无显著相关（P〉0.05）,但与组织学分级有关,高、中分化组Bmi1表达率显著高于低分化组（P〈0.05）。肝癌Bmi1阳性组增殖指数（PI）（50.3±21.4）%显著高于阴性表达组（17.3±7.1）%（P〈0.05）,凋亡指数（AI）无明显差异（P〉0.05）。结论：Bmi1在HCC中高表达,其表达增高可能与HCC的进展相关。     

胰岛素样生长因子-1受体（IGF—IR）在乳腺癌组织中的表达及其临床意义初探

目的：检测分析胰岛素样生长因子-1受体（IGF-IR）在乳腺癌组织中的表达状况及其临床意义。方法：应用半运用半定量RT-PCR方法分析84例乳腺癌和癌旁正常乳腺组织中IGF—IR基因mRNA的表达水平,并分析其表达与患者临床病理特征及预后之间的关系。结果：乳腺癌组织中IGF-IR基因mRNA表达水平显著高于癌旁乳腺组织,二者具有统计学差别（P〈0．001）。乳腺癌组织中IGF-IR基因mRNA表达水平与肿瘤组织分化程度及乳腺癌患者的TNM分期和淋巴结转移情况显著相关（P值分别是0．005,0．025和0．041）。另外,高表达IGF-IR的乳腺癌患者的五年总体生存率（38．3％）显著高于低表达IGF-1R的患者（49．7％;P=0．009）。多因素COX模型分析结果表明：IGF-IR基因mRNA表达水平是乳腺癌患者的一个独立预后分子（HR=2．78,95％CI：1．94-3．94,P=0．041）。结论：IGF-IR基因表达水平上调在乳腺癌发展过程中起着重要的作用。IGF-IR基因mRNA表达水平有望成为临床乳腺癌患者预后判断的一个重要分子标志物。     

NHP2调控肝癌细胞衰老机制的生物信息学分析

为了探讨核糖核蛋白NHP2在肝细胞癌（hepatocellular carcinoma, HCC）中的表达情况,了解其与疾病进展与预后的关系,通过Quick Go、GEPIA 2在线数据库筛选HCC细胞衰老的差异表达基因并确定了研究对象基因NHP2;进一步使用STRING、TIMER 2.0、UALCAN数据库等生物信息学方法分析NHP2在泛癌中的差异表达以及在肝癌和其他泛癌中病理进展过程中的相关性,并预测预后生存关系;使用miRNet数据库分析其靶向miRNAs和lncRNAs,应用Cytoscape v3.8.0绘制可能的CeRNAs调控网络图。结果显示,在线数据库检索到细胞衰老相关生物学过程相关基因113个,HCC差异表达基因2 206个,共有19个差异表达基因参与了肝癌细胞衰老的生物学过程。其中,NHP2在包括HCC的多种癌症中显著高表达,NHP2高表达的肝癌人群预后较差,具有统计学差异。NHP2基因编码的互作蛋白有10个,主要参与了1个信号通路（KEGG信号通路）、6个分子功能（molecular function,MF）、11个细胞组分（cellular component...     

肝细胞癌及相关病变的计算机图像定量分析

为研究肝炎、肝硬变与肝细胞癌的关系,利用自动图像分析仪对６４例肝炎、肝硬变、癌旁肝硬变、肝细胞癌和正常肝组织进行了十三项参数的形态定量研究。结果：大多数参数随病变的发展而呈规律性变化,癌旁肝硬变的多数参数介于不伴肝癌的肝硬变与肝细胞癌之间。提示：（１）慢活肝、肝硬变与肝细胞癌密切相关;（２）癌旁肝硬变不同于不伴肝癌的肝硬变,与肝细胞癌的关系更密切。利用逐步判别分析选择出六项参数建立判别函数方程,回代正确率为９８．２％。     

RICH2在肝细胞肝癌中蛋白表达的研究

目的:分析肝细胞肝癌与正常肝组织中RICH2蛋白表达之间的关系,探讨RICH2在肝细胞肝癌发生发展中的作用机理。方法:选取19例肝细胞肝癌患者作为研究对象,用免疫组织化学方法检测肝癌组织和癌旁正常组织中RICH2的表达情况并采用Friedrich免疫反应评分法作为判定标准。采用非参数Wilcoxon秩和检验对RICH2在肝细胞肝癌和正常组织中的评分结果进行统计学分析。结果:19例HCC病例癌旁正常组织中RICH2表达阳性率为100%(19/19),其中RICH2表达强阳性(+++)5例(26.3%),RICH2表达弱阳性(+)和中阳性(++)分别为3例(15.8%)和11例(57.9%);而HCC组织除了两例肝硬化组织未取到癌组织外,17例病例中RICH2表达阳性率仅为11.8%(2/17),表达为+和++各占50%。肝癌组织中RICH2的表达水平显著低于癌旁组织。结论:RICH2有可能通过某种或者其中几种因素作用失活,作用于信号通路,进而促进肝细胞肝癌的发生发展。研究其作用机理,可为临床诊断、治疗及预后评估提供理论依据。     

SPARCL1通过MEK/ERK信号通路调节非小细胞肺癌细胞的增殖、凋亡和侵袭

摘要 目的：分析富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白类似蛋白1（SPARCL1）对非小细胞肺癌（NSCLC）细胞增殖、凋亡、侵袭的影响,并探讨分裂原活化抑制剂（MEK）/细胞外调节蛋白激酶（ERK）通路在其中发挥的作用。方法：收集2019年9月~2021年6月期间本院接受手术治疗的84例NSCLC患者癌组织与相应癌旁组织,实时定量逆转录聚合酶链反应（qRT-PCR）法测定并比较各组织以及正常肺上皮细胞HBEpiC、NSCLC细胞A549、HCC827、H1299、H292中SPARCL1 信使RNA（mRNA）表达水平,选取A549、HCC827培养并分组,分为对照组、NC siRNA组、SPARCL1 siRNA组、U0126组（MEK/ERK特异性抑制剂）、SPARCL1 siRNA加U0126组,细胞计数法（CCK8）以及平板克隆法测定A549、HCC827细胞增殖,流式细胞仪测定A549、HCC827细胞凋亡,Transwell小室法测定A549、HCC827细胞侵袭能力,蛋白质印迹法（western blot）检测SPARCL1、p-MEK、MEK、p-ERK1/2、ERK1/2蛋白表达。结果：SPARCL1在NSCLC组织中mRNA表达水平低于癌旁组织（P＜0.05）;与HBEpiC细胞相比,NSCLC细胞A549、HCC827、H1299、H292细胞中SPARCL1 mRNA表达水平降低（P＜0.05）;与对照组相比,SPARCL1 siRNA组A549、HCC827细胞SPARCL1 mRNA表达水平与蛋白表达、凋亡率降低（P＜0.05）,OD₄₅₀、克隆形成数、侵袭细胞数、p-MEK/MEK、p-ERK1/2/ERK1/2蛋白表达升高（P＜0.05）,U0126组A549、HCC827细胞SPARCL1 mRNA表达水平与蛋白表达、凋亡率升高（P＜0.05）,OD₄₅₀、克隆形成数、侵袭细胞数、p-MEK/MEK、p-ERK1/2/ERK1/2蛋白表达降低（P＜0.05）;与SPARCL1 siRNA组相比,SPARCL1 siRNA加U0126组A549、HCC827细胞SPARCL1 mRNA表达水平与蛋白表达、凋亡率升高（P＜0.05）,OD₄₅₀、克隆形成数、侵袭细胞数、p-MEK/MEK、p-ERK1/2/ERK1/2蛋白表达降低（P＜0.05）。结论：SPARCL1可能通过调控MEK/ERK通路影响NSCLC A549、HCC827细胞增殖、侵袭与凋亡。     

STAT3, beta-catenin 在原发性肝细胞癌组织中的表达及其与临床病理参数的关系

目的：探讨信号转导子和转录激活子3（STAT3）及beta- 连环素蛋白（beta-catenin）在原发性肝细胞癌（HCC）中的表达及其与临床 病理特征的关系。方法：使用免疫组化SP两步法检测120例HCC、30 例癌旁肝组织、30例肝硬化组织及30 例肝血管瘤标本中正 常肝组织的STAT3 蛋白及beta-catenin的表达,分析STAT3 蛋白和beta-catenin 表达与HCC 临床病理特征的关系,并采用Spearman 等级相关分析法探讨HCC 组织中STAT3 蛋白与beta-catenin 的相关性。结果：STAT3 蛋白在HCC、癌旁组织、肝硬化组织、正常肝 组织中的阳性率分别为64.17%、13.33%、43.33％及0.00%,阳性表达主要位于细胞质,茁-catenin 在HCC、癌旁组织、肝硬化组织、 正常肝组织中的阳性率分别为62.50%、16.67%、33.33%及0.00%,阳性表达亦主要位于细胞质。STAT3 及beta-catenin 在上述各类组 织中阳性率,差异均具有显著性（P<0.05）。HCC中STAT3蛋白阳性率在不同年龄、肿瘤大小、甲胎蛋白（AFP）、病理分化程度及门 脉癌栓组间差异有统计学意义（P<0.05）。HCC 中STAT3 与beta-catenin 表达呈显著正相关（P<0.05）。结论：STAT3 及beta-catenin 在 HCC 的发生、发展中起着重要作用,且二者表达强度呈显著正相关。     

丙型肝炎感染导致的肝硬化向肝细胞癌进展的分子机制

几乎所有的原发性肝癌(hepatocellular carcinoma, HCC)患者都患有肝硬化。肝硬化常阻碍对HCC的有效治疗。本文从遗传学和表观遗传学的角度总结了近年来有关肝硬化分子机制及进展为肝癌的研究进展。约70%的肝癌患者有乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)和/或丙型肝炎病毒(hepatitis C virus, HCV)感染。鉴于HCV感染缺乏疫苗预防,在我国发病率逐年提高,本文将重点阐述与HCV相关的HCC。某些基因和表观遗传因子如microRNAs在肝硬化及进展为肝癌中发挥作用,并且HCV编码的蛋白质似乎参与了肝癌的发生。因此,有必要对免疫检查点和激酶抑制剂的分子靶点等进行进一步的研究,阐明肝硬化进展为肝癌相关的机制。     

肌层浸润性膀胱癌组织KMT2D、MCM6与临床病理特征和预后的关系

摘要 目的：探讨肌层浸润性膀胱癌（MIBC）组织赖氨酸甲基转移酶2D（KMT2D）、微小染色体维持蛋白6（MCM6）与临床病理特征和预后的关系。方法：选择2017年5月至2019年10月长治医学院附属和平医院行手术治疗的MIBC患者96例,应用逆转录-实时定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）检测癌组织及癌旁正常组织KMT2D 信使核糖核酸（mRNA）、MCM6 mRNA表达,分析KMT2D mRNA、MCM6 mRNA表达与MIBC患者临床病理特征的关系,应用Pearson相关分析法分析MIBC患者癌组织KMT2D mRNA及MCM6 mRNA表达的相关性。随访3年,比较死亡MIBC患者与存活MIBC患者癌组织KMT2D mRNA、MCM6 mRNA表达,并应用Kaplan-Meier生存曲线分析不同KMT2D mRNA、MCM6 mRNA表达分组MIBC患者预后情况。结果：MIBC癌组织中KMT2D mRNA表达水平显著低于癌旁组织,MCM6 mRNA表达水平显著高于癌旁组织（P<0.05）。MIBC患者癌组织中KMT2D mRNA、MCM6 mRNA表达与侵犯输尿管、淋巴结转移、TNM分期显著相关（P<0.05）,且两者表达呈负相关（P<0.05）。至随访截止,MIBC患者死亡45例,死亡组患者癌组织中KMT2D mRNA表达水平显著低于存活组、MCM6 mRNA表达水平显著高于存活组（P<0.05）。生存曲线结果显示KMT2D mRNA高表达组3年生存率显著高于KMT2D mRNA低表达组;MCM6 mRNA低表达组3年生存率显著高于MCM6 mRNA高表达组（P<0.05）。结论：MIBC癌组织中KMT2D低表达、MCM6高表达,与MIBC侵犯输尿管、淋巴结转移、TNM分期及患者预后不良有关。     

乳腺癌中丝／苏氨酸蛋白激酶Plk1mRNA的表达及其预后价值

目的：检测乳腺癌细胞和组织中丝／苏氨酸蛋白激酶Plk1基因mRNA的表达情况并分析其预后价值。方法：应用半定量RT-PCR方法分析3株人乳腺癌细胞和1株正常乳腺上皮细胞中Plk1基因mRNA的表达水平。同时分析84例乳腺癌及对应的癌旁正常乳腺上皮组织中Plk1mRNA的表达水平。统计学分析Plk1mRNA表达水平与乳腺癌患者年龄、肿瘤大小、组织分化程度、淋巴结转移状况、TNM分期和雌激素受体（ER）等临床病理参数之间的关系,以及与预后之间的关系。结果：Plk1基因mRNA在乳腺癌细胞中的相对表达水平显著高于其在正常乳腺上皮细胞中的相对表达水平（P值均小于〈0．05）。另外,Plk1mRNA在乳腺癌组织中平均表达水平（0．88±0．18）显著高于其在癌旁正常乳腺上皮组织中平均表达水平（0．22±0．10;P〈0．01）。统计学分析结果袁明：Plk1mRNA表达水平和乳腺癌患者的淋巴结转移状况及TNM分期密切相关（P=0．009或0．007）。Kaplan—Meier生存曲线分析结果表明：高Plk1mRNA表达水平的乳腺癌患者的5年无疾病进展率及总体生存率均显著低于低Plk1mRNA表达水平的乳腺癌患者（P=0．0026及0．0136）。COX模型的多因素预后分析结果表明：Plk1基因mRNA表达水平是乳腺癌患者的一个独立的预后因素（HR=4．764,95％CI：1．341-6．123,P=0．0025）。结论：Plk1在乳腺癌组织呈现高表达水平,其mRNA表达水平有望成为临床乳腺癌患者一个重要的预后判断分子指标。     

食管癌LAPTM4B mRNA表达及其启动子区甲基化

研究溶酶体相关4次跨膜蛋白B（lysosome associated protein transmembrane 4 beta,LAPTM4B）基因在食管癌中的表达,及其启动子区甲基化状态,为进一步揭示LAPTM4B在不同肿瘤中表达高低机理提供参考.采用半定量RT-PCR法,确定42对食管癌中LAPTM4B mRNA表达.采用5对肝癌中LAPTM4B mRNA表达做内对照（利用灰度值比较）,分析该基因在食管癌中的表达强度.选取其中3对食管癌组织样品（癌组织和癌旁正常组织）,提取基因组DNA,采用亚硫酸氢钠修饰法,联合基因测序法分析LAPTM4B启动子区是否有甲基化修饰位点存在.结果发现,在42对食管癌组织中,癌组织和癌旁正常组织LAPTM4B mRNA表达存在差异：癌组织中LAPTM4B mRNA表达阳性为37/42（88.1%）,癌旁正常组织中LAPTM4B mRNA表达阳性为26/42（61.9%）.经基因测序法分析3对食管癌组织经通用引物PCR扩增的片段,发现1例癌旁正常组织样品中有3个CpG位点.以上结果表明,LAPTM4B基因与肝癌比较在食管癌中低表达,其启动子区1例癌旁正常组织在靠近转录起始点上游-418、-416和-398位置,存在3个CpG位点,而其他2例癌旁正常组织和3例癌组织中,没有发现CpG位点.这提示,LAPTM4B基因启动子区甲基化是其表达调节的重要方式.     

影响肝癌周围肥大细胞数量的相关因素研究

探讨影响肝癌周围肥大细胞数量的相关因素及其意义。采用二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌模型。应用光镜,免疫组织化学,核酸原位分子杂交和细胞图像分析技术,检测肝癌细胞转化生长因子β（TGFβ）,血管内皮生长因子（VEGF）,c-fosmRNA的表达与癌周肥大细胞（MS）数量变化的相关性。结果显示肝癌细胞浆中TGFβ,VEGF和c-fosmRNA呈阳性表达,其中TGFβ,c-fosmRNA表达的强度与癌周MC数量变化呈平行关系。而VEGF表达的强度与癌周MC数量变化无关。结果表明：肝癌细胞通过释放TGFβ并通过激活原癌基因（c-fos)以旁分泌方式或癌基因产物影响癌周MC的数量。