溶菌酶的活性测定方法

溶菌酶是一种与单核 -巨噬细胞系统有关的非特异防御机制 ,参与机体的免疫作用 ,测定溶菌酶活性值日益受到临床重视。国内外目前采用比浊法 ,琼脂板扩散法 ,比色测定法 ,琼脂火箭糖电泳法和高效液相色谱法。前两种方法较为常用 ,但干扰因素多 ,实验结果的重现性差 ;比色法操作简单但误差较大。以琼脂火箭糖电泳法和高效液相色谱法的测定效果最为理想。     

应用快速敏感的非竞争性亲和素——生物素免疫酶试验检测血清溶菌酶

本文介绍一种测定血清溶菌酶的非竞争性亲和素-生物素免疫酶试验(NABA)。实验表明这种试验比生物素标记的竞争性试验更敏感,其最低测定界限为0.1ng/ml,而竞争性试验是1ng/ml。NABA法经内外分析变异系数分别为5.9％和9.1％。NABA法测定的总时间可以明显缩短(少于1小时)而不影响检测限度或分析范围。32例样本经NABA法和酶试验测定的血清溶菌酶水平其相关系数r=0.97。     

10种抗生素对厌氧菌体外抗菌活性的研究

本研究采用琼脂平板稀释法测定了6种抗生素对105株临床分离厌氧菌及4种临床常用抗生素对分离的50株类杆菌体外抗菌活性。结果表明:氯林可霉素对所有试验菌株均具极强的抗菌活性,MIC_(90)不超过0.78μg/ml。甲硝唑对类杆菌和梭菌也有很强的抗菌活性,MIC_(90)分别为3.13μg/ml和0.78μg/ml,但对其它种厌氧菌的抗菌活性不强。头孢唑肟、氧哌嗪青霉素对试验菌株的MIC_(50)较小,但对部分菌株的MIC_(90)为25μg/ml,抗厌氧菌的活性有限。头孢噻肟和头孢噻甲羧肟对各类厌氧菌以及头孢噻啶、头孢唑啉、氨苄青霉素和羧苄青霉素对类杆菌的抗菌活性均很弱。     

广西眼镜蛇蛇毒磷脂酶A_2的分离纯化及其对HSC-T6细胞的作用

目的对广西眼镜蛇毒中磷脂酶A2(PLA2)进行分离纯化,测定其对肝星状细胞HSC-T6的增殖抑制作用。方法采用Sephadex G-50凝胶层析柱、CM-Sepharose CL-6B离子交换柱、Macro-prep High S预装柱结合的方法分离广西眼镜蛇粗毒,经平板法测定各峰的PLA2活性;经SDS-PAGE电泳鉴定终产物纯度并测定分子量,NanoLC-ESI-MS/MS鉴定其组分;CCK-8法测定PLA2对肝星状细胞(HSC-T6)的增殖抑制作用,确定其凋亡的最小毒性浓度。结果 Sephadex G-50凝胶层析柱、CM-Sepharose CL-6B离子交换柱、Macro-prep High S预装柱层析法,得到第Ⅲ峰具PLA2活性,且达到电泳纯,经NanoLCESI-MS/MS鉴定其为PLA2,分子量约为14.06kD;PLA2在0~1μg/ml的浓度下对HSC-T6细胞具有一定的促增殖作用,2μg/ml时细胞数达到最大值,4~16μg/ml时对细胞生长有抑制作用,且随浓度增大细胞数降低。结论采用Sephadex G-50、CM-Sepharose CL-6B、Macro-prep High S预装柱结合的方法对广西眼镜蛇毒进行分离纯化,得到电泳纯且具PLA2活性的磷脂酶A2;广西眼镜蛇毒PLA2对肝星状细胞HSC-T6增殖有抑制作用,PLA2对HSC-T6细胞的最小毒性浓度为2μg/ml。     

域发喷剂敷料对糠秕马拉色菌体外抑菌活性的实验研究

目的 采用琼脂平板扩散法(打孔法)和微量液基稀释法两种体外药敏实验方法,观察域发喷剂敷料及其主要成分(微生物源性抗菌肽)对头皮脂溢性皮炎常见的马拉色菌体外抑菌活性。方法 不同浓度域发喷剂敷料、微生物源性抗菌肽为实验组,采乐洗剂(浓度2%酮康唑洗剂)、域发喷剂敷料空白溶剂为对照组,用琼脂平板扩散法(打孔法)和微量液基稀释法测试体外对马拉色菌的抑制作用,同时测定MIC(最小抑菌浓度)值。结果 域发喷剂敷料、微生物源性抗菌肽、采乐洗剂均对马拉色菌有不同程度的体外抑制作用,其抑菌效果与药物浓度呈正相关。域发喷剂敷料的MIC值为0.977μL/mL、微生物源性抗菌肽的MIC值为3.907μL/mL。结论 域发喷剂敷料安全性高,不易产生耐药性,副作用少,有较好地抑制马拉色菌作用,使用方便,可用于临床上头皮脂溢性皮炎的治疗。     

哈尔明盐酸盐体外抗菌活性的探讨

目的 探讨哈尔明盐酸盐（harmine）体外对常见细菌的抗菌活性,为中草药用于细菌感染的治疗提供依据。方法 用琼脂 法测定哈尔明盐酸盐的MIC值。结果 哈尔明盐酸 地临床痰液、尿液、血液、伤口分泌物等标本分离出的细菌MIC值范围如下：金黄色葡萄球菌128－256μg/ml,表皮葡萄球菌16－128μg－ml,大肠埃希氏菌100－200μg/ml,单胞菌属大于625μg/ml。结论 哈尔明盐酸盐对表皮葡萄球菌、链球菌属、大肠埃希菌抑菌作用好,对单胞菌属无抑菌作用。     

两株高效相思根瘤菌的抗药性研究及其质粒组成分析

目的:研究相思根瘤菌质粒与其抗药性之间的关系。方法:研究了相思根瘤菌MZ和AJ018在含不同浓度的抗生素的固体培养基和液体培养基的生长情况,并用碱裂解方法对其质粒组成进行检测。结果:两菌株对链霉素和卡那霉素均无抗性,而对其它抗生素都有不同程度的抗性。MZ菌株对实验中的氯霉素、氨苄青霉素、四环素三种抗生素的耐受范围与最大耐受值都比AJ018强,当平板培养基中氨苄青霉素、四环素、氯霉素的终浓度分别为250μg/ml、75μg/ml、150μg/ml时,AJ018在平板上无菌落生长,当三种抗生素终浓度分别为800μg/ml1、50μg/ml、400μg/ml时无菌落生长。两菌株都含有一个大约50kb的质粒。     

从天然提取物或分离部位中以烯醇式丙酮酸转移酶为靶点的抗细菌活性筛选

目的是以烯醇式丙酮酸转移酶(EPT)为靶点筛选其抑制剂,以期寻找抗细菌活性样品。实验是在96％孔酶标板上对来源于169个科、560个属、916种动植物2490个提取物或分离部位样品在EPT模型上进行了批量筛选。结果表明在96.15μg/ml浓度下发现了来源于80个科、169个届、218个种的309个样品有活性,其中14个样品的IC50小于10．00μg/ml,40个样品的IC50在10．01-30．00μg/ml范围,83个样品的IC50在30．01—50．00μg/ml范围,172个样品的IC50在50．01—96.15μg/ml范围。通过以上工作我们认为以烯醇式丙酮酸转移酶为分子靶点的体外筛选方法稳定、方便、快速、微量、有效,特别适用于天然产物的抗细菌活性筛选。     

从天然提取物或分离部位中以碳酸酐酶II为靶点的抗骨质疏松活性筛选

目的是以碳酸酐酶Ⅱ(CAⅡ)为靶点筛选其抑制剂,以期寻找抗骨质疏松活性样品。实验是在96孔酶标板上对来源于178个科、608个属、1020种动植物2919个提取物或分离部位样品在CA-Ⅱ模型上进行了批量筛选。结果表明在10μg/ml浓度下发现了来源于40个科、61个属、72个种的100个样品有活性,其中5个样品的IC50小于2．50μg/ml,22个样品的IC50在2．51—5．00μg/ml范围,73个样品的IC50在5．01—10．00μg/ml范围。通过以上工作我们认为以碳酸酐酶Ⅱ为分子靶点的体外筛选方法稳定、方便、快速、微量、有效,特别适用于天然产物的抗骨质疏松活性筛选。     

大肠埃希菌高产AmpC酶的检测及耐药性分析

目的了解深圳市人民医院高产AmpC酶大肠埃希菌的存在现状及其耐药性。方法采用Tris-ED-TA纸片裂菌法检测148株大肠埃希菌的AmpC酶。用琼脂稀释法测定产酶株对11种抗生素的最低抑菌浓度（MIC）。结果 148株大肠埃希菌中6株检出AmpC酶,检出率为4.1%。所有产AmpC酶大肠埃希菌对亚胺培南敏感,MIC为0.12～0.25μg/ml;对头孢吡肟的MIC值也较低,为0.5～32.0μg/ml,仅1株耐头孢吡肟。所有产AmpC酶大肠埃希菌对头孢西丁耐药,MIC为32～128μg/ml;对氨苄西林/舒巴坦、阿莫西林/克拉维酸和哌拉西林/他唑巴坦等加酶抑制剂复合物耐药性较强。结论深圳市人民医院大肠埃希菌高产AmpC酶检出率为4.1%。产酶株对多种抗生素耐药性较高。