单克隆抗体的鉴定和单克隆抗体的生产、纯化及标记

《单克隆杂交瘤抗体:技术和应用》一书,篇幅甚长,内容丰富,此处仅摘译了“单克隆抗体的鉴定”和“单克隆抗体的生产、纯化及标记”两节,供参考。     

电融合装置

Genentech公司和Hope区医学中心(加州洛杉矶)已用遗传工程技术产单克隆抗体。单克隆抗体是机体击退感染的抗体的人工合成变体。以前,单克隆抗体是用动物细胞在体外生产的,但是Genentech公司的研究人员找到了一种用基因拼接技术诱导细菌生产单克隆抗体的方法。这一工艺使以较低的成本大规模生产单克隆抗体成为可能,因为细菌能大量发酵。该工艺分两步,先从小鼠取出抗体基因,再把它们送入普通的肠道细菌(多半是大肠杆菌)。然后取出抗体片段,在实验室中用以构造功能单克隆抗体。科学家希望最终能以一步过程来生产单克隆抗体。     

杂交瘤细胞体外大规模培养研究进展

单克隆抗体在生物学和医学研究领域中显示了极大的应用价值,是免疫检验中的新型试剂,是生物治疗的导向武器。作为医学检验试剂,单克隆抗体可以充分发挥其优势,如特异性好,灵敏度高,更便于质量控制,利于标准化和规范化。传统的方法是利用小鼠腹水制备单克隆抗体,但是近几十年杂交瘤细胞体外大规模培养制备单克隆抗体技术也在不断发展。特别是单克隆抗体在疾病诊断和治疗方面的需求,更进一步促进了杂交瘤细胞体外培养生产技术的发展,体外培养杂交瘤细胞生产的单克隆抗体已应用到许多方面。由于杂交瘤细胞的半贴壁性质,无论是悬浮培养还是贴壁培养,均可进行杂交瘤细胞的体外大规模培养。针对应用于体外诊断试剂的杂交瘤细胞体外培养制备单克隆抗体进行综述,主要包括中空纤维细胞培养和生物反应器细胞培养方法,以及不同培养方法优化的进展。     

单克隆抗体的应用——企业化的可能性

前言 生产单克隆抗体的方法已有如下三种:①培养由淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合所得到的杂交瘤细胞(hybridomas)的方法;②培养由病毒引起淋巴细胞性状转变所得到的产生抗体细胞株的方法;③先从杂交瘤细胞等中抽出编码抗体分子的mRNA,再由基因重组法培养大肠杆菌等而获得单克隆抗体的方法。     

其它药剂

<正> 854145单克隆抗体:技术及其对革兰氏阴性菌感染的应用[英]/Young,L.S.//In-fection.-1984,12(4).-303～307[译自DBA,1984,3(22),84-10607]讨论了用于传染性疾病诊断和治疗的单克隆抗体生产的基本技术和原则。最好的研究系统涉及BALB/c小鼠脾细胞在抗原刺激     

微胶囊技术使人单克隆抗体成为可能

Damon Biotech公司正利用微胶囊技术培育人杂交瘤,使之有可能用常规方法生产出浓度为30-100倍的单克隆抗体。此项技术解决了阻碍人单克隆抗体广泛使用的一大难题。今天,大多数单克隆抗体来自小鼠,它们较易生产,但对人体不总是有效的,有时会引起变态反应。在Damon公司的工艺过程中,杂交瘤细胞在液体培养基中的多孔的醣类微胶囊里生长。其养料和代谢产物可通过微胶囊的膜。细胞和高分子量的产物(如单克隆抗体)则保留在胶囊内。生长一段时间后,微胶囊可从培养基中分离出来,经洗涤、破裂,就得到高浓度的单克隆抗体液。     

Genex生产重组单链抗体结合蛋白

Genex公司利用它专有的计算机辅助方法来设计出有单克隆抗体结合特性但能在大肠杆菌中生产的蛋白。公司把一单克隆抗体的可变轻链和重链的基因结合起来,以生产出单个多肽链。该多肽含有一短肽衔接物。公司的Robert Bird及其同事已生产了一种专门与牛生长激素结合。或与荧光素结合的肽。该单链结合蛋白仅是单克隆抗体大小的六分之一。它们在许多应用方面——如在肿瘤反     

有关动物学国际会议消息

1985 年 (1)10月2—4日 单克隆抗体:基本原理在内分泌实验和实践应用国际讨论会。在意大利,弗洛伦萨召开。初步拟订的讨论题目是:1.单克隆技术基本原理;2.单克隆抗体与受体:甾类受体,乙酰胆碱受体,肾上腺素能的受体,胰岛素受体;3.单克隆抗体对甾类血浆结合蛋白质;4.单克隆抗体对激素,垂体前叶,垂体后叶,甲状腺,副甲状腺,胰脏,甾类激素;5.单克隆抗体作为激素作用的深测剂。环核苷酸     

美利用转基因山羊生产抗癌药

美利用转基因山羊生产抗癌药据悉,美国马萨诸塞州ＧｅｎｚｇｍｅＴｒａｎｓｇｅｎｉｃｓ公司已首次在世界上将单克隆抗体表达于山羊奶,显示了利用转基因山羊生产抗癌药物的可能性。这家公司利用转基因山羊的单克隆抗体生产能力为每升奶＆ｇ以上,相当于利用细胞培养生产...     

单克隆抗体药品在日本通过调查会

??协和公司1989年夏申请引进单克隆抗体排斥反应治疗药“ORTHOCLONEOKT3”在1990年底召开的调查会上获批准.如再得到中央药事审议会生物技术部会的认可,今年3月～4月就能批准正式引进.因此在年内生产第一种单克隆抗体医药很有把握.OKT3是今后继续商品化的嵌合单克隆抗体医药的先驱.这将加速单克隆抗体医药的开发. 用单克隆抗体抑制T细胞增殖和活化     

利用重组A蛋白偶联的琼脂糖凝胶纯化α-半乳糖苷酶单克隆抗体

目的:采用一种简单易行的纯化方法获得高纯度α-半乳糖苷酶单克隆抗体。方法:使用重组A蛋白偶联的琼脂糖凝胶捕获和纯化小鼠腹水中的α-半乳糖苷酶单克隆抗体。结果:获得了高纯度、高效价的α-半乳糖苷酶单克隆抗体。结论:应用重组A蛋白偶联的琼脂糖凝胶纯化α-半乳糖苷酶单克隆抗体是一种简单、有效的方法。     

与顶体反应相关的抗人精子单克隆抗体及其抗原的特性 Ⅱ单克隆抗体对精子功能的影响以及抗原定位与免疫印迹

精子只有经过获能和顶体反应,才能与卵融合。本文对以体外诱导的顶体反应人精子作为免疫原制备的23个单克隆抗体进行了一系列鉴定,结果表明:所得单克隆抗体的间接免疫荧光染色,主要定位在人精子的赤道板和中段,没有发现定位于顶体及顶体后的单克隆抗体。某些单克隆抗体的间接免疫荧光染色部位在顶体反应后发生了改变。有18个单克隆抗体显示程度不同的精子凝集作用,未发现有精子制动作用的单克隆抗体。免疫印迹证实,有9个单克隆抗体的靶抗原是蛋白质类物质。     

新型抗体工程技术

今年,Celltech公司的主要课题是新型抗体工程技术的研究。目前,公司正在扩展它现有的合同研究和开发服务,包括抗体工程技术如嵌合、互补检测区移植和抗体片段生产。通过抗体工程技术,Celltech公司科学家们一直在进行单克隆抗体“人类化”以降低免疫系统反抗一代鼠单克隆抗体的趋势。这项技术在提高单克隆抗体的治疗潜力上是一重大进展。     

全球PD-1/PD-L1单克隆抗体市场竞争格局

目的:从产品开发角度分析PD-1/PD-L1单克隆抗体的发展现状和未来趋势。方法:检索科睿唯安(Clarivate Analytics)的Cortellis数据库的数据,利用定量分析法和对比分析法对检索结果进行分析。结果:目前已有5种PD-1/PD-L1单克隆抗体上市、4种PD-1/PD-L1单克隆抗体处于预注册及6种PD-1/PD-L1单克隆抗体处于临床Ⅲ期,未来市场上的PD-1/PD-L1单克隆抗体将呈现快速增长趋势。此外,PD-1/PD-L1单克隆抗体的商业交易也越来越多,目前共发生包括药物开发及商业化许可、专利资产出售及早期药物研发合作等10余起交易,其中药物开发及商业化许可是最主要的交易模式。结论:虽然PD-1/PD-L1单克隆抗体市场尚处于起步阶段,但随着未来技术的不断发展改进,相信未来有更多的PD-1/PD-L1单克隆抗体上市,为癌症及其他疾病的治疗提供新的契机。     

《单克隆抗体实用指南》

《单克隆抗体实用指南》(A practical guide to monoclonal antibodies)由J.Eryl Liddell和A.Cryer著,1991年威利父子出版公司出版,188页。作者向有经验的科学家提供生产单克隆抗体的全面信息,从基础组织培养技术、免疫策略和筛选试验设计,去生产杂交瘤细胞株以及基本抗体的鉴别、纯化及标记。该书中的程序     

B-LCLs及其在单克隆抗体生产中的应用

B淋巴母细胞系(B-LCLs)体外可以无限增殖,为很多实验持续提供基因型和表型匹配的原材料,极大地促进了生物医学研究的发展。近年来,B-LCLs在单克隆抗体的生产、人类全基因组分析等方面得到重要应用,成为遗传进化研究的重要资源。现对B淋巴母细胞系及其在单克隆抗体生产中的应用作一简述。     

动物细胞培养及单克隆抗体

980150 单克隆抗体的开发和生产[德]/Baron, D. ∥Pharm. Ztg. -1995,140(5).-9～16[译自DBA,1995,14(6),95-03301] 生产单克隆抗体(MAb)的起始步骤包括免疫接种小鼠以产生适宜水平的抗原特异性淋巴细胞。根据抗原的需求、应用途径、佐剂、免疫时间     

快速诊断试验法

<正> Hazleton公司的一个子公司,即Hazleton生物技术公司(维也纳,弗吉尼亚)和Cell-ular产品股份有限公司(布法罗,纽约)决定制定一项生产用于诊断仪器的单克隆抗体的联合计划。Cellular公司能提供来自人体血液成分的一些高纯化抗原,这可能是与Hazleton公司一位组织培养和杂交瘤生产方面的专家的配合分不开的。生产出的第一批单克隆抗体可能对人体Platelet-Derived生长因子(PDGF)和人体免疫干扰素具有特异性。据Richard     

用异质培养生产单克隆抗体

单克隆抗体(mABs)的生产不仅费用昂贵,而且需要特殊的组织培养设备和技能。在体外,培养杂交瘤细胞需要添加胎牛血清(FCS)以确保生长,然而胎牛血清中含有的转铁蛋白和白蛋白会污染收获的单克隆抗体上清。因此下游纯化技术要确保将污染蛋白去除,这样不仅费时、收率低,而且需要特殊设备。粗糙的纯化过程会使单克隆抗体受损或变性。     

一步纯化胰岛素单克隆抗体

本文报道用瑞典Pharmacia公司生产的快速蛋白液相层析仪、强阴离子交换预装柱(MonoQ)一步纯化胰岛素单克隆抗体的方法,结果证明此法快速、简便、重复性和分离效果好。纯化后的单克隆抗体的免疫活性仍在94%左右。