耐甲氧西林金黄色葡萄球菌小鼠腹膜炎模型的建立

"超级细菌"耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin resistant Staphylococcus aureus,MRSA)是诱发连续腹膜透析患者腹膜炎的常见细菌,且治疗困难。目前缺少MRSA腹膜炎动物模型。腹腔注射2×109~2×1010CFU/m L 7组不同浓度的MRSA感染小鼠,观察小鼠死亡时间,测定肝脏与脾脏细菌定植量,进行肝、脾病理分析,确定适宜的建模浓度。研究发现,小鼠感染细菌浓度最小致死剂量为每只2×109CFU,最适建模浓度为每只1.4×109CFU。结果表明建立了耐甲氧西林金黄色葡萄球菌小鼠腹膜炎模型,为MRSA致腹膜炎的致病机制研究、疫苗的研制提供实验基础。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌系统性感染小鼠模型的制备

目的采用临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)感染ICR小鼠,建立MRSA系统性感染小鼠模型。方法采用连续3 d腹腔注射环磷酰胺(100 mg/kg)进行免疫抑制后,将浓度为1×107cfu/m L的MRSA菌液经尾静脉接种ICR小鼠,通过生存分析、外周血白细胞计数、组织载菌量和病理学检查对模型进行评价。结果 MRSA接种后第2天小鼠开始死亡,14 d内累积死亡率达60%;外周血白细胞总数显著升高,细菌在多个器官定植,载菌量由高到低依次是肾、关节、肺、肝和脑,肾载菌量高达109CFU/g,关节、肺、肝和脑的载菌量范围在104~109CFU/g。病理观察显示肾、心脏、肺、肝、脑和关节多器官感染的组织病理学改变。结论采用环磷酰胺免疫抑制后静脉接种MRSA的方法首次成功建立MRSA系统性感染小鼠模型,该模型可应用于MRSA发病机理及药物筛选等研究领域。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌诱导SKH-1无毛小鼠菌血症模型

目的建立SKH-1无毛小鼠感染MRSA致菌血症模型的方法及其评价体系。方法 62只SPF级SKH-1无毛小鼠随机分成PBS对照组、低剂量模型组、高剂量模型组及给药组,尾静脉注射无菌PBS至对照组小鼠体内,其余各组小鼠尾静脉注射相应剂量MRSA(ST-239)菌悬液,从体重、死亡率、血常规、血液细菌浓度、主要器官荷菌量及病理改变等方面对模型进行评价,并用抗生素替考拉宁对模型进行检验。结果各组感染小鼠体重均下降明显,血常规指标改变明显;高剂量组死亡率高,血液中细菌浓度较高,肝、肾等多组织器官播散严重,皮肤可见多发性脓肿灶;使用替考拉宁能显著降低小鼠死亡率,减轻主要器官的损伤程度。结论应用MRSA菌株可成功诱导建立SKH-1无毛小鼠菌血症模型,模型具有病理特征明显及观察简便的优点,为相关药物评价研究提供了一个理想的动物模型。     

小鼠结核分枝杆菌耐药模型的建立与评价

目的 建立小鼠结核分枝杆菌耐利福平株静脉感染小鼠模型.方法 30只BALB/c雌性小鼠经尾静脉感染结核分枝杆菌耐利福平株每只106 CFU,观察小鼠一般状况,并分别在感染后6周、10周、14周处死小鼠,进行脾、肺组织病理切片、抗酸染色、计脏器荷菌数.结果 感染后小鼠体重呈逐渐上升趋势,脏器病理变化随时间推移由急性炎症逐...     

MRSA气溶胶诱导烫伤SKH-1无毛小鼠皮肤感染合并肺炎模型

目的探讨烫伤条件下,建立MRSA气溶胶致SKH-1无毛小鼠皮肤感染合并肺炎模型的方法及其评价指标。方法 48只SKH-1无毛小鼠,随机分成PBS对照组,单纯感染组和烫伤合并感染组。合并感染组小鼠皮肤烫伤后,MRSA（ST-239）气溶胶呼吸道感染,采用体重、血常规、菌血症率、皮肤和脏器荷菌量、病理组织学变化和分子生物学等指标对模型进行综合评价。结果与其他两组相比,合并感染组小鼠第3天体重下降明显;白细胞数显著增多;菌血症率达100%;皮肤和肺荷菌量较高,分别达108CFU/g和106CFU/g;镜下观察皮肤和肺炎症病变明显;免疫组化结果显示皮肤组织内CD138呈阳性表达;multi-PCR测定感染组织内nuc和mecA基因均为阳性。结论 SKH-1无毛小鼠烫伤再辅以MRSA气雾攻击的方式,可成功建立能够模拟临床上烧烫伤患者继发MRSA肺炎的动物模型,此模型对于抗MRSA药物药效评价研究具有重要临床应用价值。     

流感病毒-金黄色葡萄球菌共感染小鼠模型建立及达菲的干预作用研究

目的 模拟临床常见的流感病毒+金黄色葡萄球菌(金葡菌)共感染建立小鼠模型，评价达菲干预后的药效及对淋巴细胞和炎症因子调控作用。方法 (1)通过筛选不同滴度的PR8流感病毒、金葡菌，建立共感染小鼠模型。(2)选用雄性BALB/c小鼠，随机分为6组。第0天滴鼻流感病毒(0.25 TCID₅₀,每只20μL),第3天滴鼻感染2.5×10⁷ CFU金葡菌20μL。感染病毒24 h后灌胃给药达菲，连续7 d。末次给药24 h后处死，计算脏器指数，RT-qPCR检测流感病毒M基因相对表达量，流式细胞术检测CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺T淋巴细胞含量及IL-6等13种炎症因子的分泌水平，以气泡图的形式显示每组促炎平均值和促炎细胞因子之和。结果 (1)0.25 TCID₅₀的流感病毒感染后体重下降相对平缓，小鼠没有出现死亡；(2)2.5×10⁷ CFU的金葡菌共感染后半数致死，体重下降相对平缓，作为后续共感染组的剂量；(3)共感染组小鼠体重下降较大，胸...     

百日咳小鼠呼吸道感染模型的建立与应用

目的模拟自然感染方式建立百日咳小鼠模型,并初步应用于疫苗评价。方法通过对小鼠品系、周龄,感染用菌株、菌液浊度,感染时间等进行比较,确定动物模型建立的相关参数。然后借助该模型比较全细胞百日咳疫苗和无细胞百日咳疫苗免疫后的小鼠肺部百日咳杆菌的清除情况。程序为第0、2、4周免疫,第6周进行呼吸道感染,感染后2 h、3 d、7 d、14 d、21 d取样,对小鼠肺部菌落进行计数。结果在菌液浊度至少为109CFU/m L时,用Tohama I株对4～10周龄BALB/c小鼠雾化感染30 min,小鼠肺部百日咳杆菌分离培养的阳性率可达100%。用于疫苗评价后发现,免疫全细胞百日咳疫苗的小鼠在感染后7 d检测不到肺内的百日咳杆菌,而免疫无细胞百日咳疫苗的小鼠在感染后21 d还可分离出少量百日咳杆菌。结论通过动物发病、肺部细菌分离培养和感染曲线等对动物模型进行分析,证明通过呼吸道感染途径可成功建立百日咳小鼠模型,并且该模型可应用于百日咳疫苗的评价,为百日咳疫苗的有效性评价奠定重要基础。     

滴鼻途径建立鼠结核病模型的探讨

目的 探讨滴鼻途径建立BALB/C小鼠结核分枝杆菌感染的模型的可行性.方法 人型Mtb H_(37)Rv标准株经腹腔接种小鼠,取小鼠腹腔冲洗液100 μl接种改良罗-琴氏培养基.刮取上述培养基上生长4周已恢复毒力的结核分枝杆菌H_(37)Rv标准株,加0.05%Tween80生理盐水磨菌制成悬液,菌落计数,计数后稀释悬液为5×10~3 CFU/50 μl、5×10~4 CFU/50 μl、5×10~5 CFU/50 μl及50 μl生理盐水分别感染4组Balb/c小鼠,制作结核分枝杆菌感染模型.结果 滴鼻感染小鼠4周后,所有小鼠肺、脾组织中均可见抗酸阳性菌,在感染小鼠肺、脾组织匀浆均培养出Mtb.肺组织病理改变明显,正常肺泡结构消失,以充血实变、淋巴细胞、巨噬细胞浸润为主,增生性改变不明显,未见明显的组织坏死.脾组织病理改变主要是巨噬细胞和淋巴细胞增生.结论 滴鼻感染途径建立小鼠结核病模型简便、可行,为进一步研究开发重组BCG疫苗对鼠结核病的防治打下良好的基础. 0~4 CFU/50 μl、5×10~5 CFU/50 μl及50 μl生理盐水分别感染4组Balb/c小鼠,制作结核分枝杆菌感染模型.结果 滴鼻感染小鼠 周后,所有小鼠肺、脾组织中均可见抗酸阳性菌,在感染小鼠肺、脾组织匀浆均培养出Mtb.肺组织病理改变明显,正常肺泡结构消失,以充血实变、淋巴细胞、巨噬细胞浸润为主,增生性改变不明显,未见明显的组织坏死.脾组织病理改变主要是巨噬细胞和淋巴细胞增生.结论 滴鼻感染途径建立小鼠结核病模型简便、可行,为进一步研究开发重组BCG疫苗对鼠结核病的防治打下良好的基础. 0~4 CFU/50 μl、5×10~5 CFU/50 μl及50 μl生理盐水分别感染4组Balb/c     

双歧杆菌与辐射损伤的拮抗效应

目的探讨双歧杆菌拮抗辐射损伤的时效、量效和理想的拮抗分子。方法实验动物均选用SPF级C57BL小鼠,用不同药物和不同照射剂量处理后,建立急性放射损伤模型。WBC计数:用不同数量级浓度的双歧杆菌菌悬液对小鼠灌肠28 d后,5.0 Gy照射后3 d、6 d和10 d采取小鼠外周血检测WBC数。30 d小鼠生存率:用1×109CFU/m l双歧杆菌菌悬液灌肠28 d后,用一次性8.0 Gy60Coγ射线全身照射,建立急性放射损伤模型,每日上下午各观察小鼠1次,记录死亡动物数和死亡日期。抗氧化指标检测:用双歧杆菌菌体3种不同成分LTA、WPG和EPS,连续7 d腹腔注射小鼠后6.0 Gy照射,检测肝组织CAT和SOD的活性。结果WBC计数结果显示:双歧杆菌提高了辐射损伤WBC的最低值(P<0.05),随着剂量增加有上升趋势,理想的双歧杆菌菌悬液浓度为1×109CFU/m l。30 d小鼠生存率试验结果显示:双歧杆菌将小鼠生存率提高了43.3%。抗氧化结果显示:双歧杆菌菌体3种成分均具有抗氧化作用,尤其LTA抗氧化作用最为明显(P<0.05)。结论双歧杆菌对辐射损伤具有拮抗作用,其较为理想的双歧杆菌菌悬液浓度数量级为109CFU/m l,双歧杆菌细胞壁的3种成分中抗辐射较为理想的效应分子是LTA。     

抗炭疽人源化单抗在炭疽芽孢致死小鼠模型中的治疗效力评价

目的:建立炭疽芽孢(疫苗株A16R)攻击DBA/2J小鼠的致死模型,并使用该模型评价抗炭疽人源化单抗5E11的治疗效力。方法:用不同剂量A16R芽孢背部皮下攻击小鼠,计算半数致死剂量(LD_(50));ELISA定量检测5E11在小鼠体内的药代动力学参数;用100倍LD_(50)的芽孢攻击小鼠,攻毒后不同时间用不同剂量的5E11单抗治疗小鼠,观察小鼠存活等情况。结果:A16R芽孢攻击DBA/2J小鼠的LD50为7.8×10～3CFU;5E11在小鼠体内的平均消除半衰期约为7 d;攻毒后1 d给药的几个剂量组能够完全保护,攻毒后2～3 d给药能够提供40%～80%的保护。结论:抗炭疽人源化单抗5E11在芽孢攻击致死小鼠模型中表现出良好的保护效果,具有紧急治疗炭疽芽孢感染导致的急性炭疽的潜力。     

Anti‐infectious activity of synbiotics in a novel mouse model of methicillin‐resistant Staphylococcus aureus infection

The anti‐infectious activity of synbiotics against methicillin‐resistant Staphylococcus aureus (MRSA) infection was evaluated using a novel lethal mouse model. Groups of 12 mice treated with multiple antibiotics were infected orally with a clinical isolate of MRSA at an inoculum of 10⁸ CFU on day 7 after starting the antibiotics. A dose of 400 mg/kg 5‐fluorouracil (5‐FU) was injected intraperitoneally on day 7 after the infection. A dose of 10⁸ CFU Bifidobacterium breve strain Yakult and 10 mg of galactooligosaccharides (GOS) were given orally to mice daily with the antibiotic treatment until day 28. The intestinal population levels of MRSA in the mice on multiple antibiotics were maintained stably at 10⁸ CFU/g of intestinal contents after oral MRSA infection and the subsequent 5‐FU treatment killed all the mice in the group within 14 days. B. breve administration saved most of the mice, but the synbiotic treatment saved all of the mice from lethal MRSA infection. The synbiotic treatment was effective for the treatment of intestinal infection caused by four MRSA strains with different toxin productions. There was a large difference among the six Bifidobacteria strains that were naturally resistant to the antibacterial drugs used. B. breve in combination with GOS is demonstrated to have valuable preventive and curative effects against even fatal MRSA infections.     

Development of a mouse model of induced Staphylococcus aureus infective endocarditis

We developed a mouse model of Staphylococcus aureus infective endocarditis to evaluate the efficacy of experimental antibacterial compounds for this disease. Experimental infective endocarditis was produced in CD1 mice by intravenous challenge with approximately 6 log10 colony-forming units (CFU) of methicillin-sensitive (MSSA) SA-3529 or -resistant (MRSA) SA-2015 S. aureus 1 d after aortic valve trauma. Valve trauma was produced by introduction of an indwelling 32-gauge polyurethane catheter into the aortic valve via the left carotid artery. Histologic examination of MSSA- and MRSA-infected and catheterized aortic valve sections revealed neutrophilic inflammation and vegetative bacterial colonies encapsulated within fibrin along the aortic valves 1 d after infection. The MSSA or MRSA endocarditis was determined to be catheter-dependent based on catheterized mice exhibiting heart bacterial counts 4 orders of magnitude greater than those seen for noncatheterized mice. The model was validated by using a 3-d regimen of vancomycin at exposures comparable to human dosing (500 microg x h/ml). Vancomycin treatment produced statistically significant reductions of 3.4 and 3.1 log10 CFU/heart for MSSA and MRSA, respectively, relative to controls. This mouse model of endocarditis shows promise in evaluating the predictive efficacy of antibiotics for S. aureus infective endocarditis.     

烧烫伤创面感染的小鼠模型构建

目的探讨一种简单、稳定的烧烫伤创面感染的小鼠模型构建方法,以便进行相关烧烫伤创面修复研究。方法取30只BALB/c小鼠,采用自制木质烫伤板,沸水浴法烫取直径8 mm的圆形创面,烫伤时间分别为5 s、10 s、15 s。伤后48 h,取创面组织进行HE染色观察,筛选最佳创面烫伤时间。另取72只小鼠制成深Ⅱ度烫伤创面,采用擦刮法分别接种20μL菌浓度为1×106、l×107、1×108CFU/mL金黄色葡萄球菌标准菌株ATCC 25923的菌液。接种细菌后72 h,取创面组织HE染色观察创面炎症反应情况,并测定3、7、14 d的皮肤菌负荷,筛选最佳的细菌接种浓度。最后,按最佳条件建模后,观察创面的完全愈合时间以及创面愈中、愈后的组织学变化,以确定此创面感染模型是否建立成功。结果组织学结果表明,10 s为深Ⅱ度创面的理想致伤时间,最佳接种菌浓度为l×108CFU/mL,此时期,14 d内菌负荷均高于l×105CFU/g。该模型的创面愈合时间(21±0.95 d)较正常创面愈合时间(15.92±0.34 d)明显延长(P<0.01),炎性反应明显,愈后不佳。结论烧烫伤创面感染的小鼠模型构建成功,可作为感染创面防治研究的实验动物模型。     

副溶血弧菌毒力评价小鼠模型的建立与应用

目的建立用于评价副溶血弧菌毒力的小鼠模型,为研究副溶血弧菌的致病机制奠定基础。方法将适宜浓度的菌液经腹腔感染4～5周龄雌性BALB/c小鼠,观察小鼠的症状及死亡数。结果高盐(2%NaCl)条件下培养的强毒株RIMD2210633,经腹腔感染107CFU的菌量,小鼠存活率为20%～30%,而环境无毒株S251的小鼠存活率为100%。结论建立了评价副溶血弧菌毒力的实验小鼠模型,并应用于不同盐分浓度培养的强毒株与环境无毒株的毒力比较实验。     

金黄色葡萄球菌致小鼠慢性输卵管炎性不孕模型制作

目的通过金黄色葡萄球菌直接感染小鼠输卵管,建立炎症致不孕的动物模型。方法用1×109/mL的金黄色葡萄球菌接种小鼠,制作慢性输卵管炎症模型,观察输卵管病理炎性改变以及小鼠的受孕情况。结果造模术75 d后,模型组小鼠受孕率、输卵管通畅率显著低于对照组（P〈0.001）。模型组肉眼观察输卵管有不同程度积水积脓、僵硬,输卵管与周围组织均有不同程度的粘连;病理学观察输卵管管腔被异物肉芽组织完全阻塞,全层均见大量慢性炎细胞浸润。结论输卵管内接种浓度1×109/mL的金黄色葡萄球菌可以成功建立小鼠输卵管炎性不孕模型。