用5-Fu治疗MT/p210bcr-abl转基因小鼠的研究

以５－氟脲嘧啶（５－ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ,５－Ｆｕ）腹腔注射治疗了１２只携有金属硫蛋白（Ｍｅｔａｌｏｔｈｉｏｎｅｉｎ,ＭＴ）启动子和增强子序列、ｂｃｒ－ａｂｌｃＤＮＡ（ｐ２１０）序列及ＳＶ４０剪切和Ｐｏｌｙ（Ａ）信号序列的转基因慢粒白血病（ｃｈｒｏｎｉｃｍｙｅｌｏｉｄｌｅｕｋｅｍｉ－ａ,ＣＭＬ）ＭＴ／ｐ２１０ｂｃｒ－ａｂｌ小鼠,于治疗的第５ｄ及第１０ｄ从不同脏器提取总ＲＮＡ、ＤＮＡ及蛋白质,分别进行ＰＣＲ分析、ＲＴ－ＰＣＲ检测被转移基因的表达水平及免疫沉淀法分析ｐ２１０ｂｃｒ－ａｂｌ转基因产物的激酶活性．结果表明,被转移基因在脾脏和骨髓中表达水平较高,胸腺和肾脏中呈低水平表达．５－Ｆｕ活体治疗１０ｄ后,被转移基因的表达水平及其表达产物的激酶活性均被明显抑制     

双歧杆菌总DNA对小鼠IL—2,NK活性影响的研究

目的 从双歧杆菌、大肠杆菌提取ＤＮＡ,用ＤＮＡ免疫小鼠,观察免疫功能的变化,探讨双歧杆菌ＤＮＡ对小鼠免疫功能的影响,并作对比研究。方法 肌肉注射提取的双歧杆菌ＤＮＡ、大肠杆菌ＤＮＡ,颈椎处死后,检测脾细胞的免疫功能,同时提取ＩＥＬ细胞与ＤＮＡ共孵育,检测它对ＩＥＬ细胞的激活情况及细胞因子产生情况,以自然杀伤细胞（ＮＫ）活性,白细胞介素２（ＩＬ－２）产生能力为指标,测定小鼠上述各项指标变化。结果 双歧杆菌ＤＮＡ、大肠杆菌ＤＮＡ肌肉注射后,小鼠以上两项指标与相应对照组相比较均明显提高（Ｐ〈０．０５）。双歧杆菌ＤＮＡ提高小鼠ＮＫ活性与ＩＬ－２水平程度大于大肠杆菌ＤＮＡ的作用（Ｐ〈０．０１）。结论 双歧杆菌ＤＮＡ可快速激活ＮＫ活性,提高体内ＩＬ－２水平。其效能优于大肠杆菌ＤＮＡ。     

Epstein-Barr病毒膜抗原基因免疫的研究

将Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒ病毒（ＥＢＶ）膜抗原（ＭＡ）ＢＬＬＦ１基因,插入含有ＣＭＶ启动子的真核表达载体ｐｃＤＮＡ３下游ＢａｍＨＩ位点,构建成真核表达质粒ｐｃＤＮＡ３－ＭＡ。将纯化的ＤＮＡ注射Ｂａｌｂ／ｃ小鼠股四头肌。经免疫的动物产生抗ＥＢ病毒ＭＡ特异性的抗体和中和抗体,依赖抗体细胞介导的细胞毒作用（ＡＤＣＣ）,特异性Ｔ淋巴细胞增生性反应及细胞毒性Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ）杀伤作用。基因免疫与基因－蛋白联合免疫效果相似。不同启动子控制下的ＭＡ基因,诱发小鼠免疫应答无明显差异。     

丙型肝炎病毒E2基因DNA免疫实验动物研究

将编码丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）Ｅ２蛋白４１７～７５０位氨基酸的ＤＮＡ片段　克隆到真核表达载体ｐｃＤＮＡ　３．１（－）中的ＣＭＶ　ＩＥ启动子下游,构建成ＨＣＶ　Ｅ２重组真核表达质粒　ｐｃＥ２。ＥＬＩＳＡ法检测ｐｃＥ２　ＤＮＡ免疫兔血清中的Ｅ２抗体变化和维持规律,结果显示免疫２０ｄ已有　抗体产生,３０ｄ后开始进入高峰,４０ｄ时达到最高值,至第９０ｄ抗体水平保持平稳,抗体滴度　达到１∶１６００左右。流式细胞计数仪（ＦＡＣＳ）检测ｐｃＥ２　ＤＮＡ免疫鼠ＣＤ４＋、ＣＤ８＋Ｔ淋巴细胞变　化情况,与注射空载体ｐＣＤＮＡ３．１（－）的阴性鼠相比,ＣＤ４＋淋巴细胞水平略有上升,ＣＤ８＋　细胞水平有较大升高,增幅达３５．４６％。免疫组化检测结果显示注射ｐｃＥ２的小鼠组织中有明显　的阳性着色,而注射ｐｃＤＮＡ３．１（－）的对照组小鼠免疫组化结果为阴性。以上结果表明：ｐｃＥ２　在实验动物内表达出的ＨＣＶ　Ｅ２蛋白可以引起免疫动物的体液免疫应答和细胞免疫应答,尤其　是ＭＨＣ－１限制性杀伤性ＣＤ８＋Ｔ淋巴细胞水平的提高对清除　病毒是十分有利的,因此ＨＣＶ　Ｅ２　ＤＮＡ免疫有可能成为预防和治疗ＨＣＶ感染的一条新途径。     

人粒细胞集落刺激因子（hG－CSF）cDNA3′－UTR对其表达的影响

利用人粒细胞集落刺激因子（ｈＧ－ＣＳＦ）ｃＤＮＡ３′端非翻译区（３′－ＵＴＲ）中存在的ＤｒａⅠ酶切位点,通过部分酶切与完全酶切,删除３′－ＵＴＲ不同长度,构建了四种ｈＧ－ＣＳＦｃＤＮＡ瞬时重组表达质粒。转染ＣＯＳ－７细胞后,生物活性测定结果提示,ｈＧ－ＣＳＦｃＤＮＡ３′－ＵＴＲ对其表达起负调控作用,其关键性序列位于紧接终止密码子ＴＧＡ下游的６５ｂｐ范围内,３′－ＵＴＲ对ｈＧ－ＣＳＦｃＤＮＡ表达的影响与转录水平的差别有一定关系。     

SAR与植物转基因沉默的消除

随着转基因技术在各个应用领域的深入和发展,转基因沉默现象已引起越来越多的人关注。转基因沉默主要发生在转录或转录后水平,涉及核酸的三种相互作用,即：ＤＮＡ－ＤＮＡ、ＤＮＡ－ＲＮＡ、ＲＮＡ－ＲＮＡ。这是植物基因表达调控的具体表现之一,也是外源基因插入后生物体的一种自我保护。ＳＡＲ协同转基因进行转化,可以消弱宿主ＤＮＡ对外源基因的不利影响。实验证明,在稳定整合的转基因植物中,ＳＡＲ提高了整体表达水平,并降低了不同转化体之间的差异。这是消除植物转基因沉默的一条有效途径。     

新型生长抑肽对成纤维细胞的DNA合成及某些癌基因表达的影响

从细胞水平和基因水平研究了新型生长抑肽（ＥＰＰ）的生物学作用,研究表明：ＥＰＰ对ＮＣ３Ｈ１０及ＴＣ３Ｈ１０细胞的ＤＮＡ合成均有抑制作用,当ＥＰＰ与ｃＡＭＰ的位点选择性类似物８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ共同作用时,其对ＮＣ３Ｈ１０细胞的ＤＮＡ合成的抑制作用消失,而对ＴＣ３Ｈ１０仍具有抑制作用;核酸杂交分析表明,ＥＰＰ可以抑制ｃ－ｆｏｓ、ｎｅｕ、ｋｉ－ｒａｓ三类癌基因在转化细胞中的表达。证明了ＥＰＰ对转化细胞的生长具有一定的抑制效应,且与８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ联合使用时其效果更佳。     

SAR与植物转基因沉默的消除

随着转基因技术在各上应用领域的深入和发展,转基因沉默现象已引起越来越多的关注。转基因沉默主要发生在转录或转录后水平,涉及核酸的三种相互作用,即：ＤＮＡ－ＤＮＡ、ＤＮＡ－ＲＮＡ、ＲＮＡ－ＲＮＡ。这是植物基因表达调控的具体表现之一,也是外源基因插入后生物体的一种自我保护。ＳＡＲ协同转基因进行转化,可以消弱宿主ＤＮＡ对外源基因的不利影响。实验证明,在稳定整合的转基因植物中,ＳＡＲ提高了整体表达水平,并降     

中国人r——干扰素cDNA在大肠杆菌中的高效表达

应用ＲＴ－ＰＣＲ技术从中国人淋巴细胞ｍＲＮＡ反转录产物中克隆了ＩＦＮ－ｒ－ｃＤＮＡ,序列分析证实了分子进化规律对ＩＦＮ－ｒｃＤＮＡ序列存在多态性的推论。在此基础上应用ＤＮＡ重组技术,将去信号肽中国人ＩＦＮ－ｒ ｃＤＮＡ克隆到原核表达质粒ｐＢＶ２２０ ＰＲＰＬ启动子下游,转化大肠杆菌ＤＨ５ａ,通过温度诱导表达,成功地在大肠杆菌中稳定、高效地表达了中国人ＩＦＮ－ｒ ｃＤＮＡ,其表达水平占全菌可溶性总     

丙型肝炎病毒核酸疫苗的免疫效果观察

将丙型肝炎病毒Ｃ＋Ｅ１区基因克隆到不同的真核细胞表达载体ｐＣＤＮＡ３．１（＋）和ｐＳＶＬ中,通过肌肉注射和皮下注射免疫ＢＡＬＢ／Ｃ及Ｆ１小鼠后,产生了抗ＨＣＶ／Ｃ区抗体。其中核酸疫苗ｐｃＤＮＡ３．１－ＨＣＶ／Ｃ＋Ｅ１的免疫高峰的出现早于ｐＳＶＬ－ＨＣＶ／Ｃ＋Ｅ１,Ｆ１小鼠的抗体应答强于ＢＡＬＢ／小鼠。肌肉注射优于皮下注射。