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1.
从志贺氏1型痢疾村菌LPS中分离纯化出料捩的,以ADH为连接剂将其与TT结合形成O-SP-TT结合疫苗,并用此结合疫苗免疫NIH小鼠,结果显示使用O-SP免疫后,小鼠血清中没有抗LPS抗体产生,而用L-SP-TT免疫后鼠血清中生了抗LPSIgG和IgM抗体,且IgG抗体水平高于IgM抗体;O-SP-TT免疫组等二次和第三次免疫后IgG我有显著的升高(P〈0.01),但第二次和第三次免疫后血清IgM 相似文献
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Egr-1基因调控序列连接OSM cDNA表达质粒的构建及其在黑色素瘤细胞中的表达 总被引:6,自引:0,他引:6
OSM是一种对黑色素瘤细胞显示抑制作用的细胞因子.为进行OSM针对黑色素瘤的基因-放射治疗研究,构建了小鼠Egr-1基因调控序列引导入OSMcDNA真核表达质粒(pEO),pEO质粒转染小鼠B-16黑色素瘤细胞,经G418和抗人OSM抗体的筛选,获得了稳定表达OSM的克隆细胞(pEO-1细胞),OSM表达量可达5.97ng每105细胞天,分子量为32kD.pEO-1细胞用一定浓度H2O2处理后OSM表达量可提高62%,表明pEO重组质粒可在氧自由基的刺激作用下增强OSM表达 相似文献
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4.
用丙肝病毒C+E1区真核表达质粒pcDNA-HCV/C+E1按400ug/只剂量免疫BALB/C小鼠,14周后同一剂量再加强免疫一次。加强免疫后2周,在50%PEG1450介导下将脾细胞与SP2/0小鼠骨髓瘤细胞(51)融合。实验结果融合率达54.3%(313/576)。阳性率为5.4%(17”313)。克隆化后得到6株稳定分泌抗丙肝病毒C区单克隆抗体杂交瘤细胞株。这6株杂交瘤均产生IgM抗体,接种BALB/C小鼠后产生腹水的效价为164-1320(ELISA)。 相似文献
5.
用E.coli0111:B4死菌体及其脂多糖(LPS)免疫BALB/C小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞融合获得6株稳定分泌抗LPS特异性单克隆抗体细胞株,其中一株为IgG2a类,5株为IgM类,轻链均为K型;染色体数目为90-98条;5株IgM类单克隆抗体识别5种不同的抗原表位;相对亲和力在10~8~10~(10)之间;1B12单抗经SephadexG-150纯化后,经还原性SDS-PAGE显示只有70KD的重键和25KD的轻链。 相似文献
6.
利用基因免疫技术,将重组质粒PBS-LMP-Hyg直接注入BALB/C小鼠骨骼肌中,于第2、4、8周,用间接免疫荧光法检测鼠血清中抗EB病毒潜伏膜蛋白(LMP)特异抗体,结果表明,所有免疫小鼠(5/5)均产生特异体体,且抗体滴度随时间变化逐渐增高。 相似文献
7.
人肝癌细胞的IGF—BP1分子特性及内源性蛋白酶对其降解的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
用SDS-PAGE电泳、高效液相色谱(HPLC)、质谱等方法,研究了人肝癌细胞(HepG2)分泌的胰岛素样生长因子结合蛋白-1(^35S-IGF-BP1)的分子结构、特性,及其被内源性蛋白酶降解的特点,^35S-IGF-BP1的经抗体免疫沉淀、生化分离,纯化为均一体,其分子是由多个亚构成的蛋白质,分子量约为27kD;细胞UMR、HepG2、H35BRL3A分泌的蛋白酶能将^35S-IGF-BP1催 相似文献
8.
用单克隆抗体作芜菁花叶病毒不同分离物外壳蛋白抗原结构的比较研究 总被引:3,自引:0,他引:3
用芜菁花叶病毒辽宁分离物(TuMV-LN),山东分离物(TuMV-SD)和榨菜分离物(TuMV-ZC)作抗原,分别免疫BALB/c小鼠,经脾细胞与SP2/O-Ag14骨髓细胞融合,共获得7个单克隆抗体分泌细胞株,为研究3个分离物的抗原差异,用胰蛋白酶消化TuMV的外壳蛋白(CP)。分别形成4、2和1条降解带,经SDS-15%PAGE后,转移至硝酸纤维薄膜上,用3个分离物的抗血清和7种单隆抗体分别做 相似文献
9.
在真菌的反硝化作用中,一种独特的细胞色素P-450起着一氧化氮还原酶(P-450nor)的作用。用gtll构建了柱孢菌(Cylindrocarpontonleinense)cDNA文库。纯化的柱孢菌C。P-450nor2免疫兔,制备抗体。并用抗体筛选出阳性克隆。回收插入片段(P-450nor2cDNA)克隆到表达载体pYES2中,并在酵母系统中表达。经Westem-blot分析验证,表达产物能与抗体反应产生特异性杂交带。酶分析结果表明:表达产物具有一氧化氮还原酶细胞包素P-450nor2的活性,能以NADH或NADPH为供体,使NO还原先成N2O。 相似文献
10.
利用双功能试剂N-琥珀酰亚胺-3(2-二硫吡啶)丙酸酯(SPDP)作交联剂,合成了尿激酶(UK)-抗人交联纤维蛋白降解物D-二聚体单抗(MA-HID1)化学偶合体(UKMA-HID1),并用苯甲脒-Sepharose6B及人交联纤维蛋白降解物D-二聚体-Sepharose4B亲和柱纯化,获得偶合体产物.SDS-PAGE呈现一条带,其分子量约为200000.纤维蛋白平板法测活结果显示,偶合体中酶比活为53000IU/mg尿激酶蛋白,与偶联前的54300IU/mg蛋白相仿.ELISA测试显示,偶合体对人交联纤维蛋白降解物D-二聚体有免疫反应性,并且与偶联前的抗D-二聚体单抗对此抗原的反应性相当 相似文献
11.
通过己二酸二肼(ADH)将福氏2a痢疾杆菌脂多糖(LPS)经酸水解脱毒纯化后得到的O-SP和破伤风类毒素(TT)蛋白共价结合,制备了福氏2a痢疾杆菌结合物。以2.5μg多糖或含2.5μg多糖的结合物经皮下注射免疫NIH品系雌性小鼠,同时以25μg多糖或含25μg多糖的结合物经耳缘静脉注射家兔。用ELISA方法分别检测小鼠和家兔血清中抗脂多糖抗体水平及抗TT水平,并用豚鼠血清补体介导进行了体外杀菌实验。结果显示:用本实验方法提取的多糖,合成的多糖衍生物,多糖-蛋白结合物都具有福氏2a痢疾杆菌O-抗原特异性,其化学组成及结构特异性和国外文献报道基本一致。单独用多糖免疫小鼠和家兔未能诱导LPS抗体,而结合物免疫小鼠和家兔的血清诱导出了较高的抗LPS IgG抗体及抗TT抗体,并有较强的体外杀菌活性。产生的抗体存在着免疫记忆性,可以产生再次免疫应答加强反应。 相似文献
12.
为了测定抗精子IgA在免疫不育和抗精子避孕疫苗研制方面的生物学作用,用肠道内免疫的方法制备了一组抗乳酸脱氢酶C4(LDH-C4)的单克隆IgA抗体(moIgA)。以免疫印迹证实了它们的异质同形体。大部分moIgA(PA1-PA5)是用肠道内免疫和以派依尔氏淋巴细胞作为亲本细胞进行融合来获得的。在豚鼠血清补体存在的情况下,小鼠精子可以被moIgAPA1、PA2和PA4所制动。高浓度PA4和PA5可凝集小鼠精子。小鼠体外受精率可被3个moIgA(PA2、PA3和PA4)显著降低,但用PA1、PA2和PA5被动免疫之后,小鼠体内受精无明显变化。纯化的小鼠胆汁分泌片可同纯化的moIgA或腹水中的moIgA在体外组装起来。同分泌片结合之后,moIgA对精子的制动、凝集和体外受精无明显变化。这些研究结果提供了抗LDH-C4的moIgA和分泌性IgA对精子功能和体外受精的生物学作用的直接证据,在免疫不育的防治,避孕疫苗的研制以及性传播疾病的防治方面均有一定的指导意义。 相似文献
13.
伤寒杆菌SOD抗体对小鼠腹腔吞噬细胞杀灭伤寒杆菌的影响 总被引:3,自引:1,他引:2
为了制备伤寒要直菌SOD抗体,研究该抗体对小鼠腹腔吞噬细胞杀灭伤寒杆菌的影响,探讨SOD与伤寒杆菌抗吞噬作用的关系。采用纯化的伤寒杆菌(Stwl)Fe-SOD免疫农兔制备兔抗Fe-SOD抗体。利用EALISA法检测抗体的效价。免疫电泳、双向琼脂扩散试验和抗体对酶活性抑制试验分析抗体的特性。用不同浓度的抗体预先处理伤寒杆菌,然后进行小鼠腹腔吞噬细胞的吞噬杀菌试验。试验结果抗体的ELIS攻疚价为1:1 相似文献
14.
NO对大鼠睡眠-觉醒的调节 总被引:10,自引:0,他引:10
目的和方法:通过对大鼠侧脑室微量注射NOS抑制剂L-NAME及NO的前体L-精氨酸(L-Arg)观察两种物质对大鼠睡眠-觉醒的影响。结果:注射1mg L-NAME(5μL)后4h觉醒(W)明显增加,尤以注射后第1 ̄2h显著;4h慢波睡眠(SWS)明显减少,该效应同样以注射后第1 ̄2h显著;异相睡眠(PS)无明显变化。小剂量L-NAME(0.2mg,5μl)对大鼠的W、SWS、PS无明显影响;同样方 相似文献
15.
老年大鼠单核/巨噬细胞分泌和表达肿瘤坏死因子增多 总被引:2,自引:0,他引:2
为研究老年时肿瘤坏死因子(TNF-α)分泌及表达的改变,在内毒素(LPS)1.0μg/ml刺激大鼠单核/巨噬细胞后,用酶联免疫法(ELISA)测定培养液中TNF-α含量,用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCK)测定TNF-αmRNA。同时测定培养液中一氧化氮(NO)和前列腺素I2(PGI2)的含量。结果显示:老年鼠TNF-α分泌量及其mR-NA明显高于青年鼠。NO产量在老年鼠与青年鼠之间无明显差异。老年鼠PGI2分泌明显低于青年鼠。由于PG能抑制TNF-α释放,从而推测,PGI2产生能力的降低可能是老年大鼠单核/巨噬细胞TNF-α分泌量明显高于青年鼠的原因之一。 相似文献
16.
为了测定抗精子IgA在免疫不育和抗精子避孕疫苗研制方面的生物学作用,用肠道内免疫的方法制备了一组抗乳酸脱氢酶C4(LDH-C40的单克隆IgA抗体(moIgA)。以免疫印迹证实了它们的异质同形体。大部分moIgA(PA1-PA5)是用肠道内免疫和以派依尔氏淋巴细胞作为亲本细胞进行融合来获得的。在豚鼠血清补体存在的情况下,小鼠精子可以被moIgAPA1,PA2和PA4所制。高浓度PA4和PA5可凝集 相似文献
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中国HIV-1 B亚型P55和嵌合的P55-V3病毒样颗粒候选疫苗免疫效果的研究 总被引:7,自引:0,他引:7
研究我国艾滋病病毒Ⅰ型(HIV-1)病毒样颗粒(VLP)候选疫苗的免疫原性,为疫苗进行灵长类实验提供实验依据。将gag和gag-V3 VLP不同剂量(50μg、10μg、1μg)在有佐剂(氢氧化铝)和无佐剂条件下皮下免疫小鼠,然后眼眶采血,用ELISA法观察免疫鼠血清中抗体与剂量关系,以及中和抗体滴度和抗体IgG亚型IgG1和IgG2a的水平。同时取鼠脾淋巴细胞,体外抗原刺激后收取淋巴细胞分泌上清 相似文献
18.
利用COS7细胞暂时表达系统,研究转译起始序列对EPO-cDNA表达的影响。通过DNA重组技术,构建了原EPO-cDNA表达载体pCSV-EPO(1),其转译起始序列为5'AATTCATGG3'。同时通过定点突变技术,将起始序列改变成5'CCACCATGG3',而构建了另一表达载体PCSV-EPO(2)。后经序列分析证明无误后和前均通过DEAE-dextran法转染COS7细胞上清,测定结果为 相似文献
19.
将切去3’端穿膜序列的EB病毒膜抗原(MA)基因,插入pSV2-dhfr质粒的SV40早期启动子下游,构建了真核表达载体pSV2-dhfrGPTR,使两个SV40早期启动子分别调控MA和二氢叶酸还原酶(dhfr)基因。将该重组质粒转化CHO-dhfr细胞,在选择培养基中筛选阳性克隆,用氨甲喋呤加压扩增,建立了表达EBV-MA的克隆细胞系。westernblot分析证明,所表达的蛋白的分子量大约为340kd和220kd。经过细Sepharose2B琼脂糖凝胶层析初步纯化的抗原与福氏佐剂混合免疫小鼠,2周后小鼠血清中出现明显的gp340/220特异性抗体,表明切去嵌膜区结构的EBV-MA基因在CHO细胞中的表达产物具有同天然膜抗原相似的分子量大小、糖基化程度、免疫特异性和免疫原性,可望成为EB病毒人用基因工程亚单位疫苗。 相似文献
20.
甲型副伤寒菌O-特异性多糖与破伤风类毒素结合菌苗的制备及其在小鼠体内的免疫原性 总被引:2,自引:0,他引:2
以脱毒后去除类脂A的甲型副伤寒杆菌高分子量O SP1和低分子量O SP2 为特异性抗原 ,以破伤风类毒素 (TT)为蛋白质载体 ,用己二酸二肼 (ADH)作为连接剂制备的两种结合物及其多糖免疫NIH小鼠 ,结果显示单独注射O SP1或O SP2 免疫小鼠后 ,均不能刺激小鼠产生抗 LPS抗体 ;而用O SP1 TT和O SP2 TT结合物免疫后 ,小鼠血清中均产生了特异性抗 LPSIgG和IgM抗体 ,且O SP1 TT免疫组血清中IgG抗体水平明显高于O SP2 TT免疫组 ,两组结合物免疫血清中抗体类型以IgG为主。O SP1 TT结合物免疫组第二次免疫和第三次免疫后IgG抗体水平均较前一次有显著升高 (p<0 0 1)说明 ,O SP1 TT结合物具有加强应答效果。补体介导的体外杀菌试验证明 ,O SP1 TT与O SP2 TT结合物免疫血清具有特异性杀菌活性。 相似文献