中华仓鼠二氢叶酸还原酶的酶学性质研究

测定中华仓鼠二氢叶酸还原酶（ＤＨＦＲ,Ｅ．Ｃ．１．５．１．３．）催化反应的各个动力学常数,对其反应机制进行了研究。测定了不同浓度脲溶液中酶与底物的解离常数Ｋｄ和表观米氏常数Ｋｍ,结果表明酶与底物二氢叶酸（ＤＨＦ）和还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（ＮＡＤＰＨ）的结合能力相差很小,都随脲浓度增加而减弱,而且一种底物的结合会削弱酶与另一底物的结合能力。研究了ＤＨＦＲ在脲变性过程中活力和构象的变化,结果表明低浓度脲可使稳态酶活力增强,此时酶的内源荧光发射光谱和ＣＤ谱变化很小;随脲浓度的增加,酶逐渐失活,同时荧光光谱的最大发射峰位红移,荧光强度和椭圆率也明显下降,说明酶活力的变化先于酶分子整体构象的变化,酶活性部位位于比酶分子整体更易受变性剂影响的有限区域,而且酶分子这种相对的和一定限度内的柔性是其表现生物活性所必需的     

鸡肝二氢叶酸还原酶在盐酸胍溶液中构象的序变与激活

用蛋白质内源荧光、疏水荧光探针TNS及蛋白酶K限制性酶解等方法研究了二氢叶酸还原酶在盐酸胍变性过程中的构象变化及动力学,并与活力变化进行了比较.TNS可以监测到与激活同步的构象变化;盐酸胍浓度大于0.75mol/L时,二氢叶酸还原酶被蛋白酶K水解速度增大;当盐酸胍浓度大于1.2mol/L时,才能监测到酶分子整体构象的变化.以上结果表明二氢叶酸还原酶在盐酸胍溶液中的变性并不符合标准的二态模型,而是先经历构象逐步松散的序变过程,然后发生协同的构象伸展.二氢叶酸还原酶在低浓度盐酸胍溶液中的激活是由于酶活性部位构象的微小变化引起的.酶活性部位构象的变化虽然降低了酶与废物的结合能力,但加快了酶促反应限速步骤,即底物解离速度而使酶活力升高.     

盐酸胍对人类胎盘碱性磷酸酶构象与活力的影响

研究人类胎盘碱性磷酸酶（ＰＬＡＰ,Ｅ．Ｃ．３．１．３．１）在胍变性过程中构象与活力的变化;测定胍存在时酶的表观米氏常数（Ｋｍ）。结果表明,低浓度的盐酸胍（＜０．５ｍｏｌ／Ｌ）使变性平衡态酶的发射荧光强度略有下降,酶活力增强;随盐酸胍浓度的增加,其荧光强度不仅不再下降,反而升高,酶逐渐失活;当盐酸胍浓度为１．５ｍｏｌ／Ｌ时,其荧光光谱的最大峰位红移,酶活力迅速下降;当盐酸胍浓度为３ｍｏｌ／Ｌ时,峰位由３３３．５ｎｍ红移至３５７．１ｎｍ,此时酶活力丧失;当盐酸胍浓度为４ｍｏｌ／Ｌ时,峰位不再红移,但其荧光强度继续增加。测得变性初态酶的表观Ｋｍ值随盐酸胍浓度的增加而增大。结果说明,荧光强度的增加和最大发射峰位的红移是该酶变性失活的一个灵敏指标;酶活力的变化明显快于酶分子整体构象的变化;低浓度的盐酸胍微扰了酶活性部位的构象,而对其整体构象无显著影响。提示酶活性部位具有柔性。     

荧光研究表明去辅基天青蛋白突变体M121L至少存在两种不同的构象

以往对绿脓杆菌去辅基天青蛋白变性机制的研究认为它经历了一个复杂的反应过程,相比之下,锌离子替代的天青蛋白的变性符合简单的二态模型。以脲为变性剂对去辅基天青蛋白突变体M121L的变性过程进行了研究。结果表明,虽然稳态条件下突变体的变性／复性符合二态模型,但其动力学过程复杂,并可用溶液中存在着两种可以相互转化的构象的变性／复性来解释。天然态N1去折叠的速度快,其重折叠的速度也快,N1的折叠机制可用存在着折叠途径上的快速折叠中间体模型来描述;天然态N2的去折叠速度慢,其重折叠主要是首先生成天然态N1,然后再缓慢地转化成N2。添加Zn^2 能够把两种构象整合成一种构象,相应地,Zn^2 替代的天青蛋白突变体的变性过程简化为单指数过程。对该突变体的研究加深了对天青蛋白去折叠机制的理解。     

去辅基天青蛋白两种天然构象共存的热力学证据 ———差热温度扫描和圆二色的研究

天然态蛋白质能否在溶液中存在多种构象是一个有争议的问题 . 在前报道中已经鉴定出绿脓杆菌去辅基天青蛋白突变体 M121L 可以多种构象共存 . 用差热扫描量热和圆二色性的方法研究了野生型去辅基天青蛋白的热变性 . 结果表明在 pH 从 4.0 到 9.0 的范围内存在着两个摩尔热容最大值 . 较低温度下的去折叠反应在所研究 pH 范围内均部分可逆,而较高温度下的去折叠反应均不可逆 . 蛋白质去折叠的热容变化双峰用可相互转化的两种构象共存模型进行拟合 . 较低温度下能够去折叠的构象在 pH 4.0 时占 64% ,在 pH 9.0 时占 55%. 监测热变性过程中圆二色谱在 219 nm 处的信号变化也可以观测到两个独立的去折叠变化 . 信号变化的比值与在相同条件下差热扫描法测得的两种构象摩尔比一致 . 上述结果进一步支持了前文提出的去辅基天青蛋白在溶液中至少存在着两种构象的设想 .     

绿脓杆菌apoazurin在溶液中存在两种天然构象

如何解释绿脓杆菌apoazurin变性过程的复杂机制是一个有争议的问题.最近的研究表明apoazurin的复杂变性机制可以归结为其天然态存在着至少两种构象.利用内源荧光发射谱和圆二色谱进一步研究了apoazurin的脲变性机制,发现其稳态脲变性符合表观的二态过程,但其动力学为双相过程.在高浓度脲中快反应在几秒钟内完成,而慢反应要经过几个小时.快反应和慢反应的mu值分别为2.24和2.45kJ·mol-1·M-1,去折叠活化能的差值为22kJ·mol-1.时间分辨的荧光发射谱和圆二色谱可以用天然态和完全变性态的谱图通过一个固定的比例参数进行重建.结果表明,过去被广泛接受的存在着变性中间体的机制是不正确的,而apoazurin在天然态存在至少两种构象的假设是合理的.     

硫酸铵与盐酸胍对鸡肝二氢叶酸还原酶的激活和失活作用

在５℃、２０℃、３０℃,鸡肝二氢叶酸还原酶的活力随盐酸胍浓度增加,先经历一个激活区,以后则为失活区。温度升高,使最大激活幅度变小,激活区变窄,所需盐酸胍浓度减小,硫酸铵在浓度低于０．２ｍｏｌ／Ｌ时,对天然酶有较小的激活作用,更高浓度的硫酸铵使酶活力下降;胍激活酶的活力随硫酸铵浓度的增加,由天然酶的２１０％单调下降;对失活酶,增加硫酸铵的浓度,则使酶活力逐渐恢复;三种情形的终活力均为天然酶的４０％。     

中国地方品种鸡的分类研究

中国鸡种资源极为丰富,中国历史上形成的许多优良地方品种鸡,对中国养鸡事业发展和世界养鸡业都曾做出过重要贡献。为充分利用我国地方鸡种资源遗传潜力和杂种优势,本文利用图论主成分分类法与系统聚类法根据20项指标研究了中国30个地方品种鸡的分类问题,分类结果比较符合实际,特别是图论主成分分类图直观清楚,生物学含意明确,对中国鸡种资源和基因库的利用有实际参考价值。     

双乙酰还原酶的分离纯化研究

比较了５种细菌、４种酵母菌和鸡肝中双乙酰还原酶含量,其中粪肠杆菌（Ｅｎｔｅｒｏ－ｃｏｃｃｕｓｆａｅｃａｌｉｓ）ＡＳ１．５９５中含量较高,为９．６ＩＵ／ｇ湿菌体。并对ＡＳ１．５９５菌酶和鸡肝酶进一步经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００和ＤＺＡＥ柱分离纯化,提纯倍数分别为４５、８９３,最后收率分别为１８．５％、５．１％。     

钙调神经磷酸酶在胍变性过程中活力及构象变化的比较

钙调神经磷酸酶（ＣａＮ）在盐酸胍溶液中的内源荧光、远紫外ＣＤ谱及剩余活力的变化提示：ＣａＮ的酶活力在胍浓度为０．５ｍｏｌ／Ｌ左右可完全丧失,同时伴有内源荧光强度的下降,３３３ｎｍ最大发射峰的红移（提示了色氨酸和酪氨酸残基的暴露）。比较不同胍浓度下牛脑ＣａＮ的失活与整体构象变化,表明酶的失活先于整体构象变化。在０．６ｍｏｌ／Ｌ胍溶液中,内源荧光变化的动力学过程只能测出一相,而酶失活的动力学过程为快、慢两相,快相动力学速度常数比整体构象变化速度常数大１－２个数量级,慢相失活速度常数与整体构象变化速度常数相近。提示低浓度胍可引起该酶的完全失活,活性部位的空间构象比整个酶分子的构象更易受到变性剂的扰乱。     

中国地方品种鸡生态性状的典型相关分析

本文对中国地方品种鸡的生态性状包括体尺性状,产肉性状,产蛋性状及产地气候性状等４组性状间的关系进行了典型相关分析,４组性状共含有１９个变量,研究结果对中国地方品种鸡的杂交优势利用和遗传育种有参考价值。     

人脑醛糖还原酶的纯化和一些基本性质

使用DEAE纤维素柱层析、PBE-94层析聚焦、NADP~+-Sepharose 4B亲合层析及SephadexG-100凝胶过滤分离纯化了人脑醛糖还原酶。在DEAE层析中,用咪唑-HCI缓冲液替代了磷酸缓冲液,改善了分离效果。在聚丙烯酰胺及SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳中,纯化的人脑醛糖还原酶均呈一条区带。它的pI为5.6,最适pH为6.5,分子量为36,000,底物特异性和氨基酸组成与其它哺乳动物的醛糖还原酶有相似性。开链式醛糖是醛糖还原酶的真正底物,它在开链式和半缩醛的平衡体系中占比例极小,因而推知醛糖还原酶对此底物有很高的K_(cat)和K_(cat)/K_m值,能有效地将它们还原成相应的醇。     

细胞分裂素促进小麦硝酸还原酶的诱导

细胞分裂素促进硝酸还原酶的诱导,脱落酸强烈抑制该酶的诱导,并抵消细胞分裂素的作用。6-苄基腺瞟呤(6-BA)的促进效应与 NO_3~-的诱导作用有关。无 NO_3~-存在时,6-BA 无直接诱导作用,适宜浓度的 NO_3~-可诱导较高的酶活性,这时6-BA 的促进作用也较强。无光照时,NO_3~-只能诱导黄化叶片产生很低的酶活性,这时6-BA 的促进作用也很弱。在1—2小时的诱导期内,环己酰亚胺抑制酶的诱导。结果表明细胞分裂素对酶诱导的促进作用不仅与 NO_3~-的存在有关,还与 NO_3~-诱导硝酸还原酶的必要条件有关,即依赖于酶的诱导过程。     

玉米根细胞质膜硝酸还原酶的研究

以水双相分配分离法从玉米（Ｚｅａ ｍ ａｙｓＬ．）根细胞中提取的高纯度正面向外和内面向外的质膜囊泡为材料,鉴定出质膜上存在有硝酸还原酶（ＮＲ）。通过缺氮和加氮培养,证明质膜ＮＲ具有诱导性。外源电子供体实验表明,质膜ＮＲ除了能利用ＮＡＤＨ 作为电子供体外, 也能直接或间接利用ＮＡＤＰＨ 作为电子供体。通过Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００, 结合胰蛋白酶及其抑制剂实验证明了质膜ＮＲ是偏于膜外侧的跨膜蛋白,它对胰蛋白酶具有特异的敏感性。讨论了质膜ＮＲ的功能     

大豆Bragg结瘤突变系叶片的NR活性调节

大豆（Ｇｌｙｃｉｎｅ ｍ ａｘ （Ｌ．） Ｍｅｒｒ．）Ｂｒａｇｇ 及它的突变体， 超结瘤大豆ｎｔｓ ３８２ 和不结瘤大豆Ｎｏｄ ４９ 的叶片提取物中含有抑制ｉＮＲ活性、ｃ１ＮＲ活性和Ｃ２ＮＲ活性的抑制成分。３００ μＥ·ｍ － ２·ｓ－ １照度和接种根瘤菌ｓｔｒａｉｎ ＵＳＤＡ１１０ 是形成抑制成分的重要条件。在两种条件下，Ｎｏｄ ４９ 中的抑制活性最强， ｎｔｓ ３８２ 的最弱， Ｂｒａｇｇ 的居中。Ｂｒａｇｇ 的接种根提取物对３ 种ＮＲ活性的抑制作用基本同于其叶片提取物； ｎｔｓ ３８２ 的接种根提取物也同于其叶片提取物，基本不抑制ＮＲ的活性， 但Ｎｏｄ ４９ 的接种根提取物只抑制叶片的ｃ２ＮＲ活性， 不同于其叶片提取物抑制３ 种ＮＲ活性的作用。结果说明叶片与根两种提取物在抑制叶片ＮＲ活性的成分上相关