溶菌酶的结晶研究

介绍了溶菌酶结晶的意义,通过对晶核形成、晶体生长和停止生长三个阶段的论述,详细地阐述了溶菌酶的结晶机理;并综述了结晶过程中的各个影响因素:蛋白质浓度、pH值、添加剂、生长温度及重力场、磁场等;展望了溶菌酶结晶研究的发展趋势和发展前景。     

溶菌酶晶体及其交联技术的研究进展

在结晶蛋白中,溶菌酶成为一种典范,是一种模型蛋白.在不同的环境中,通过调变各项反应条件,可以实现对不同晶系溶菌酶晶体形貌、结构的控制并进行最优化,然后对其进行交联,讨论其反应机理.所采用的方法还能扩展到其他类型蛋白质晶体中,为设计和制备具有优良应用性能的不同形貌的蛋白晶体及交联晶体材料奠定基础,必将大大促进蛋白晶体材料在我国生物材料应用方面的研究.     

离子液体1-丁基-3-甲基咪唑氯盐对溶菌酶结晶的影响

以亲水性离子液体1-丁基-3-甲基咪唑氯盐(BmimCl)为添加剂,研究离子液体对溶菌酶结晶的影响.分别考察了离子液体对溶菌酶晶体数量与尺寸、晶体形貌及蛋白质纯度的影响,并探讨了离子液体对结晶过程影响的作用机制.离子液体通过增大溶菌酶的溶解度和其自身低蒸气压两种途径,降低了溶菌酶在结晶过程中的过饱和度,更有利于晶体的成核和生长,得到更好的结果.如避免多晶态现象的发生,增大晶体的尺寸,降低溶菌酶样品纯度的要求.X-射线衍射分析表明,离子液体未改变晶体的晶型结构,但可提高晶体的衍射分辨率.     

离子液体1-丁基-3-甲基咪唑氯代盐对溶菌酶结晶的影响

以亲水性离子液体1-丁基-3-甲基咪唑氯盐(BmimCl)为添加剂,研究离子液体对溶菌酶结晶的影响.分别考察了离子液体对溶菌酶晶体数量与尺寸、晶体形貌及蛋白质纯度的影响,并探讨了离子液体对结晶过程影响的作用机制.离子液体通过增大溶菌酶的溶解度和其自身低蒸气压两种途径,降低了溶菌酶在结晶过程中的过饱和度,更有利于晶体的成核和生长,得到更好的结果.如避免多晶态现象的发生,增大晶体的尺寸,降低溶菌酶样品纯度的要求.X-射线衍射分析表明,离子液体未改变晶体的晶型结构,但可提高晶体的衍射分辨率.     

溶液流动对等电溶菌酶晶体生长的影响

本文对等温自由生长和强制性溶液生长的等电溶菌酶的晶体形态进行了研究,发现这些形态变化与溶液相的流动密切相关,指出生物晶体生长停止是由于生长晶体周围的溶质贫乏造成的;通过某些手段减薄或消除这一溶质贫乏区,就可以保证晶体的持续生长。本文的研究对改善大尺寸晶体的生长提供了一条途径。     

应用动态光散射对一些蛋白质结晶性能的研究

动态光散射是研究生物大分子溶液物化行为和结晶性能的重要工具。以溶菌酶为模型蛋白 ,对其溶液的DLS研究表明 ,一定范围的蛋白质浓度不会影响蛋白质聚合性质 ,而起沉淀剂作用的盐对多色散性的影响较大。考虑这些研究结果 ,应用DLS研究对空间微重力下晶体生长样品的质量做了考察 ,这对于提高空间样品准备水平 ,进而提高空间实验成功率是一重要途径。     

密码子优化后的柞蚕溶菌酶在酵母中的表达及活性测定

【目的】提高柞蚕溶菌酶在毕赤酵母中的表达量,对柞蚕溶菌酶活性进行测定。【方法】根据毕赤酵母密码子偏爱性对柞蚕溶菌酶基因进行优化,并在目的基因3′端加上6个组氨酸标签,优化后的基因克隆至表达p PIC9K载体中,并通过电转化的方法导入毕赤酵母GS115中。利用不同浓度梯度的G418进行高拷贝转化子的筛选,经甲醇诱导实现分泌表达。通过硫酸铵盐析、镍柱亲和层析等工艺分离纯化柞蚕溶菌酶,利用琼脂扩散方法测定柞蚕溶菌酶对溶壁微球菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、苍白杆菌及过氧化醋杆菌的抑菌作用,利用比浊法测定酶活大小。【结果】密码子优化后的柞蚕溶菌酶在诱导温度25°C、甲醇量0.75%和p H 7.0条件下实现了最高表达,表达量达到了2.4 g/L,并且纯化后的柞蚕溶菌酶酶活达到23 970 U/mg。【结论】密码子优化后的柞蚕溶菌酶在毕赤酵母中实现了高效表达,纯化后的柞蚕溶菌酶对溶壁微球菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、大肠杆菌、苍白杆菌及过氧化醋杆菌均有抑菌作用。     

中华鳖和小白鼠正常血清洁菌酶的初步测定和比较

本实验采用平板法对中华鳖和小白鼠两种动物的正常血清溶菌酶的活力进行了平板扩散法测定。从结果中发现,中华鳖的血清溶菌酶活力稍低于小白鼠,但两者均在１００Ｕ／ｍｌ以上,没有发现与个体大小、年龄及性别联系。     

小菜蛾溶菌酶Pxlys的基因克隆及其重组蛋白的抗菌活性分析

[目的]本研究旨在通过研究小菜蛾Plutella xylostella溶菌酶的功能,进一步认识小菜蛾的免疫防御机理,为小菜蛾的生物防治提供新的思路.[方法]利用RACE技术克隆小菜蛾溶菌酶基因.构建原核表达载体pET-29a-Pxlys,利用原核表达系统表达并用镍柱亲和层析纯化重组蛋白Pxlys.利用牛津杯法检测重组蛋...     

康复新液联合溶菌酶肠溶片治疗阿弗他溃疡的临床疗效观察及对血清炎症因子和SIgA表达的影响

摘要 目的：探讨康复新液联合溶菌酶肠溶片治疗阿弗他溃疡的临床疗效观察及对血清炎症因子和SIgA（免疫球蛋白A）表达的影响。方法：选取我院2015年1月到2019年1月共收治的100例阿弗他溃疡患者,根据治疗方法分为观察组与对照组,每组50例患者。给予对照组患者口服葡萄糖酸锌、维生素C、维生素B联合口腔溃疡散常规治疗,给予观察组患者在对照组治疗基础上应用康复新液联合溶菌酶肠溶片治疗,对比两组患者的临床疗效果,对比两组患者血清炎症因子指标,对比两组患者SIgA和IgG,并对比两组患者的疾病复发情况。结果：对照组患者治疗总有效率为84.00 %,观察组患者治疗总有效率为95.00 %,观察组明显高于对照组（P＜0.05）;对比两组患者治疗前后的炎症因子水平发现,两组患者治疗前肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor α,TNF-α）、白细胞介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）、血栓素B2（thromboxane B2,TXB2）水平对比无明显差异（P＞0.05）,两组患者治疗后TNF-α、IL-1β、TXB2水平明显降低,且观察组低于对照组（P＜0.05）;两组患者治疗前免疫球蛋白A（secretory immunoglobulinA,SIgA）和免疫球蛋白G（immunoglobulin G,IgG）指标对比无明显差异（P＞0.05）,治疗后,观察组患者的SIgA指标明显高于对照组（P＜0.05）,观察组患者的IgG指标明显低于对照组（P＜0.05）;通过对比两组患者的疾病复发情况发现,观察组患者3个月、6个月和12个月的疾病复发率明显低于对照组（P＜0.05）。结论：对阿弗他溃疡患者应用康复新液联合溶菌酶肠溶片治疗,能够提升患者的治疗效果,减轻患者炎症情况,减少患者疾病复发情况,值得临床应用推广。     

常见皮肤癣菌体外药物敏感试验的研究

目的比较液基稀释法和纸片扩散法对临床常见皮肤癣菌的体外药物敏感性。方法应用Rosco纸片扩散法和微量液基法（参考美国国家实验室标准委员会NCCLS推荐的M38-P方案修改方案）测定临床分离的40株皮肤癣菌（包括红色毛癣菌、须癣毛癣菌、犬小孢子菌及絮状表皮癣菌）对两性霉素B、伊曲康唑、氟康唑和特比萘芬的体外药物敏感性。结果应用Rosco纸片扩散法,大部分菌株在7—9d时可读到清晰的结果。Rosco纸片扩散法和微量液基法结果中,特比萘芬、伊曲康唑和两性霉素B一致性较好,氟康唑较差。结论Rosco纸片扩散法操作简单,可选择用于皮肤癣菌对某些抗真菌药的药敏试验。     

发展一种小体系连续快速测定海洋水体溶解性铵盐的方法

基于次溴酸盐氧化铵盐(NH+ 4)成为亚硝酸盐(NO2^–)的原理, 发展了一种小体系连续快速测定海洋水体溶解性铵盐的方法。该方法以圆底旋盖2 mL 离心管为反应容器, 应用次溴酸钠氧化剂氧化铵离子成为亚硝酸根离子, 进一步通过加入Griess 试剂生成有色物质, 然后利用标准酶标板为底板, 采用酶标仪对生成的有色物质进行吸光值测定。此方法空白吸光值低, 标准曲线在0-32 μmol·L^-1 浓度范围内线性良好(R²>0.99), 可批量连续测定样品。对环境样品的测定结果表明, 小体系铵盐测定法具有较高的精确度, 与《海洋规范》中标准25 mL 体系法测定的数值具有大于99%的拟合度, 为海洋水体NH+ 4-N 的实地测定提供了一种快速有效的新方法。     

大鼠脑穹窿下器官微量注射AngⅡ对肾近球小管Na+,K+-ATPase功能的影响

目的：探讨大鼠穹窿下器官（SFO）对外周肾小管钠泵的调节作用及机制。方法：在SFO分别微量注射血管紧张素II（AngII）,其中氯沙坦（losartan）组先用AngII的1型受体（AT1）拮抗剂losartan预处理后再注射AngII 放免法检测血清中内源性洋地黄样物质（EDLS）的水平和血浆AngII水平 微分离大鼠肾脏单根近球小管,液闪法测定小管管周膜钠泵活性。结果：①SFO注射AngII后,血清中EDLS在15 min开始升高,约60 min达高峰 ②肾近球小管钠泵活性在SFO注射AngII后30 min和60 min都显著下降 ③用losartan预处理SFO后,再注射AngII,血清EDLS水平升高和小管钠泵活性下降的效应被显著削弱。结论：大鼠SFO注射AngII后,肾近球小管钠泵活性将下降,原因可能与SFO注射AngII后,激动SFO的AT1受体,直接或间接升高血清EDLS水平有关。