鸡新城疫病毒介导的细胞融合

鉴于鸡新城疫病毒(NDV)对人体无致病力、来源方便等优点,本文应用其强毒株NC_(48)CE_8和弱毒株HB_1介导融合体外培养的哺乳类细胞,包括:人体肝癌BEL-7402和BEL-7404系细胞、人宫颈癌Hela 细胞、人羊膜FL 细胞以及小鼠A9/28 DKS 系细胞。在本实验的最适条件下,NC_(48)CE_8株与HB_1株介导BDL-7404系细胞的融合率分别高达86.9%和60.7%。NDV 介导的细胞融合率与其稀释度及细胞的种系密切有关。借显微缩时电影术示范了BEL-7404系细胞在NC_(48)CE_8株与HB_1株介导下的融合过程。亚显微结构的分析,示明BEL-7404系细胞的表面,特别是在细胞紧密邻接的区域存在着大量的微绒毛。文内对此及融合所需的实验条件作了讨论。     

抗鸡新城疫病毒单克隆抗体的研制

我们于1984年开始以鸡新城疫病毒(NDV)强毒株F48E8为抗原,研究抗鸡新城疫病毒单克隆抗体,得到两株杂交瘤细胞系:NDV-Hy-23和NDV-Hy-33。经3次克隆后,这两株杂交瘤细胞系均能稳定地分泌高滴度抗鸡新城疫病毒特异抗体,培养上清中McAb的免疫荧光滴度为1:50～1:100,小鼠腹水中Mc-Ab的免疫荧光滴度为1:100,000～1:1,000,000。免疫扩散试验证明:NDV-Hy-23分泌小鼠IgG1型抗     

新城疫病毒抗肿瘤研究进展

新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)为副黏病毒科,禽腮腺炎病毒属(Avulavirus)的禽副黏病毒Ⅰ型(APMV-Ⅰ),可对250多种禽类造成致死性感染,给世界范围内的家禽养殖造成了巨大损失。目前,研究发现NDV对人肿瘤细胞具有溶瘤作用,能够选择性地在癌细胞中复制。并且一些研究已经进行了人体临床试验,取得了良好的效果。因此,新城疫病毒是肿瘤治疗的潜在治疗剂。文中就NDV结构蛋白与毒力的关系、NDV直接溶瘤作用、NDV为载体的肿瘤基因治疗、NDV抗肿瘤与自噬等进行了综述。     

鸡新城疫病毒抗人肿瘤性疾病的分子机制

新城疫是由鸡新城疫病毒引起的人畜共患病毒病,主要感染禽类,对人可引起发热等轻微症状。鸡新城疫病毒感染后可诱导机体产生干扰素和肿瘤坏死因子等抗肿瘤作用的细胞因子。鸡新城疫病毒的HN蛋白具有增加肿瘤细胞对淋巴细胞的粘附力、刺激淋巴细胞的分化和改变肿瘤细胞免疫原性的作用,在人类肿瘤性疾病生物防控中具有较高的研究和应用价值。     

新城疫病毒抗肿瘤作用的研究进展

新城疫病毒(newcastle disease virus,NDV)属副黏病毒,由于其安全性,自从被发现以来,即受到广大研究者们的关注。经过多年的研究,新城疫病毒在抑制人肝癌、恶性胸膜间皮瘤、纤维肉瘤以及头颈癌细胞方面都取得了可喜的成果。目前,新城疫病毒抑瘤作用的机制尚未完全阐明,研究表明主要涉及诱导肿瘤细胞凋亡,发挥抑瘤佐剂作用,增强免疫细胞活性及抑制肿瘤化疗耐药。NDV即使在缺氧环境下,也可以稳定的发挥抗肿瘤作用,且其强毒株具有高效的抗肿瘤作用。本文主要就近年来新城疫病毒抗肿瘤作用的研究进展进行了综述。     

重组新城疫病毒疫苗研制现状

新城疫病毒引起的新城疫是一种常见的禽类传染病。新城疫病毒可诱导感染的宿主产生细胞、体液和黏膜免疫应答,是一种理想的疫苗载体,可表达病毒和细菌的多种蛋白。这些病原体包括禽流感病毒、人副流感病毒3型、犬瘟热病毒、禽巨肺病毒、呼吸道合胞病毒、Nipah病毒、水疱性口炎病毒、狂犬病毒、牛短崭热病毒、传染性支气管炎病毒、重症急性呼吸综合征冠状病毒、埃博拉病毒、马尔堡病毒、肠病毒71型、脊灰病毒、Ⅰ型人类免疫缺陷病毒、传染性法氏囊病毒、诺如病毒、非洲猪瘟病毒、牛疱疹病毒1型、西尼罗病毒、鹅细小病毒、猪圆环病毒Ⅱ型、传染性喉气管炎病毒、鸡毒支原体和博氏疏螺旋体等。本文简要综述重组新城疫病毒的构建及其免疫机制的研制现状。     

用单克隆抗体研究鸡新城疫病毒抗原变异与流行病学的相关性

用19株抗鸡新城疫病毒(NDV)单克隆抗体(简称单抗)测定与14个NDV国际参考株和16个NDV国内分离株的反应性,将毒株分为a～h 8个群。该组单抗能较精细地测出流行病学上不同的毒株间的抗原变异,毒株分群显示了抗原变异与流行病学特征的相关性。     

应用新城疫病毒治疗肿瘤的研究进展

新城疫病毒可以特异地杀伤肿瘤细胞,而对正常细胞没有伤害,目前在临床实验中认为是安全、有效的溶瘤试剂。随着近年来反向遗传操作技术的日趋成熟,该技术开始应用到新城疫病毒溶瘤效果的优化方面,通过改造新城疫病毒的F基因,及表达重组粒细胞巨噬细胞集落刺激因子,干扰素-γ,白细胞介素-2和肿瘤坏死因子-α等肿瘤杀伤因子,使该病毒具备更加优越的肿瘤杀伤能力,成为肿瘤治疗领域一个新兴的亮点,为癌症的临床治疗提供了崭新的前景。以下将简要介绍应用反向遗传操作技术重组新城疫病毒优化肿瘤治疗效果的研究进展,以及本实验室在相关领域的研究情况。     

新城疫病毒红细胞凝集性的研究

红细胞凝集和红细胞凝集抑制试验广泛应用于鸡新城疫的诊断和监测。为了提高试验的灵敏性,我们选了9株新城疫病毒(NDV),作红细胞凝集性、血凝解离速度以及温度、福尔马林和甘油对病毒红细胞凝集性的影响等试验,现报告如下。     

新城疫病毒单克隆抗体的特性及应用

建立了8个分泌抗新城疫病毒(NDV)特异性单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株,根据它们的免疫生物学特性可以分为三种类型:(1)具有FA和ELISA特性(FN1、FN4、FN29、FN30、FN35、FNl22);(2)具有FA、ELISA和HI特性(FN7);(3)具有ELISA、HI特性和中和能力(FN106),根据FN30和FN106的ELISA试验,可将11个NDV毒株分为二种不同的抗原群,应用FN4-FITC,FN7-FITC和FN29-HRP试剂,对人工感染NDV和野外送检病例检测结果表明,单抗试剂的DFA阳性率(92.3％)高于病毒分离阳性率(87.2％),两种方法的符合率89.7％,这些单抗试剂用于临床诊断敏感性和特异性高,且方法快速、简便。     

鹅源新城疫病毒拯救体系的建立

参照GenBank上公布的鹅源新城疫病毒ZJI株全序列,设计8对引物,经RT-PCR法从尿囊液中扩增目的片段后,分别克隆进pCR2.1载体,将Ⅰ～Ⅶ7对引物的扩增片段依次亚克隆到TVT7R转录载体中,构建了含NDV全基因组cDNA的转录载体(pNDVZJI),将Ⅴ、Ⅵ和Ⅷ3对引物的扩增片段分别克隆进pCR2.1载体,并亚克隆到表达质粒pCI-neo上,构建了L基因的真核表达载体(pCI-L),pNDVZJI、pCI-L与另外两个辅助表达质粒(pCI-NP和pCI-P)共转染BSR-T7/5细胞,成功拯救出了具有血凝性的鹅源新城疫病毒,ZJI株鹅源新城疫病毒的成功拯救为后续相关研究工作的开展打下了基础。     

抗鸡新城疫病毒单克隆抗体及所测定的毒株的抗原差异

作者以3种不同毒力型的新城疫病毒(NDV)为免疫抗原,获得21株特异单克隆抗体(以下简称单抗),按其血凝抑制、溶血抑制和病毒中和能力的不同,将它们分成3组。21株单抗中有15株与所有被试的35个国内外分离的参考毒株起反应,另外6株单抗仅与部份毒株起反应。根据与上述单抗的不同反应谱,将这些NDV毒株分成7个群,同一群内的毒株在重要的流行病学和生物学特征方面一致。单抗LD_2、LC10-5只与疫苗毒株B1、La Sota及其克隆化毒株N79及1株生物学特性不明的野外分离物起反应。     

新城疫病毒包膜糖蛋白的结构与功能

新城疫是一种禽类传染病,可对养禽业带来严重的经济损失。其病原新城疫病毒具有包膜,基因组是单股、负链、不分节段的RNA,具有溶瘤活性,编码NP、P、M、F、HN和L六种结构蛋白,其中位于病毒包膜上的融合蛋白(F)和血凝素-神经氨酸酶(HN)两种糖蛋白对NDV的人侵及毒力有着重要的作用。本文首先总结了两种包膜糖蛋白结构与功能的基本情况,在此基础上,整合了近年来国内外的研究,发现一些矛盾点,并且将HN蛋白的其他功能进行概述,为NDV包膜糖蛋白的研究提供了新的视角。     

新城疫病毒非编码序列的遗传演化趋势

【目的】探讨新城疫病毒全基因序列中非编码序列的分子演化规律。【方法】结合本研究室2012年自产蛋下降鸭群中分离测序的一株鸭源新城疫病毒全序列,从GenBank下载35株不同基因型新城疫病毒全长cDNA序列,获取非编码序列,分别绘制引导序列、尾随序列、F-HN及HN-L基因间隔序列(IGS)的遗传进化树,比较编码基因内5’及3’UTR序列核苷酸序列替代特点。【结果】非编码序列的长度及位置高度保守,而其核苷酸基因序列在不断发生变异,且变异趋势与编码基因序列相一致。【结论】新城疫病毒在整个基因组上编码和非编码序列同步发生变异。     

新城疫病毒融合蛋白基因部分序列分析

Ｆ蛋白是ＮＤＶ中具有抗原性的两种表面糖蛋白之一,通过ＲＴ－ＰＣＲ,克隆了速发现ＮＤＶ中国株Ｆ４８Ｅ８的Ｆ基因,比较分析Ｆ４８Ｅ８,ＡＵＳ和ＩＴＡ等速发型株系Ｆ基因的Ｎ端结构,氨基酸同源性分别达９５％和９３．６％,变化主要集中于信号肽区,成熟蛋白质的同源性极高。该基因的克隆为研制ＮＤＶ的基因工程疫苗打下基础。