阿魏蘑多糖理化性质及免疫活性研究*

以阿魏蘑Pleurotus ferulae Lanzi子实体和菌丝体为试验材料,采用水浸法提取阿魏蘑多糖,分别得到子实体粗多糖A和菌丝体粗多糖B。将A经Sevag法去蛋白、透析、CTAB络合、乙醇沉淀、NaCl溶液溶解、透析,得到多糖A1。紫外光谱分析鉴定多糖A1为均一组分。苯酚—硫酸法测得多糖A1糖含量为82.9%。凝胶渗透色谱法测得多糖A1数均分子量Mn=141088,重均分子量Mw=142897。气相色谱分析多糖A1单糖组成及其摩尔比为Xyl∶Gla∶Glc=1∶1.102∶2.899。巨噬细胞吞噬作用试验、迟发型变态反应试验、白细胞介素-2（IL-2）的诱生与检测试验测得粗多糖A、粗多糖B具有免疫活性。     

变色疣柄牛肝菌子实体水溶性粗多糖的提取方法

试验就变色疣柄牛肝菌多糖的提取方法进行了初浅探索,结果表明变色疣柄牛肝菌干燥子实体萃取粗多糖较佳的条件为:粒度以粉碎60目筛、提取剂为蒸馏水、选择菌盖、选择料水比为1∶35(W/V)、沉淀剂达到85%的乙醇浓度、萃取温度选择在80℃、萃取时间为3 h、提取2次可得到粗多糖3%~5%。正交试验表明影响变色疣柄牛肝菌多糖得率的主次因素为乙醇浓度、提取温度、提取时间、料水比,各因素的最佳配合、最优工艺为A3B2C1D3,即乙醇浓度为85%、温度80℃、时间3 h、料水比为1∶15,在此条件下多糖得率为5.008%,提取粗多糖含量在47.995%。     

猴头菌子实体和菌丝体多糖的分离纯化与理化特征的比较*

人工栽培的猴头菌子实体和固体培养的菌丝体分别经热水提取,浓缩、醇析后得子实体粗多糖（HFP）和菌丝体粗多糖（HMP）,HFP的得率和多糖含量均高于HMP;两者再经透析、Sevag法脱蛋白、乙醇分级沉淀、SephadexG-100柱层析纯化,得子实体纯多糖hfp-1和菌丝体纯多糖 hmp-2,经HPLC检测hfp-1和hmp-2为单一均匀多糖。气相色谱分析表明hfp-1的单糖组成为阿拉伯糖、甘露糖、半乳糖和葡萄糖,摩尔比为：0.12：0.04：1.00：0.71;hmp-2的单糖组成为阿拉伯糖、木糖、甘露糖、半乳糖和葡萄糖,摩尔比为：0.25：0.41：0.31：1.00：0.29。紫外光谱分析表明组成中不含核酸和蛋白质,红外光谱分析二者均有多糖特征吸收峰,hfp-1有β-型连接的吸收峰,hmp-2无明显的β-型连接的吸收峰;经HPLC进行分子量测定,hfp-1的分子量为54000,hmp-2的分子量为68000。猴头菌子实体多糖和菌丝体多糖在化学组成上有一定的差异。     

猴头菌子实体和菌丝体多糖的分离纯化与理化特征的比较

人工栽培的猴头菌子实体和固体培养的菌丝体分别经热水提取,浓缩、醇析后得子实体粗多糖（HFP）和菌丝体粗多糖（HMP）,HFP的得率和多糖含量均高于HMP;两者再经透析、Sevag法脱蛋白、乙醇分级沉淀、SephadexG-100柱层析纯化,得子实体纯多糖hfp-1和菌丝体纯多糖hmp-2,经HPLC检测hfp-1和hmp-2为单一均匀多糖,气相色谱分析表明hfp-1的单糖组成为阿拉伯糖、甘露糖、半乳糖和葡萄糖,摩尔比为：0.12:0.04:1.00:0.71;hmp-2的单糖组成为阿拉伯糖、木糖、甘露糖、半乳糖和葡萄糖,磨尔比为：0.25:0.41:0.31:1.00:0.29。紫外光谱分析表明组成中不含核酸和蛋白质,红外光谱分析二者均有多糖特征吸收峰,hfp-1有β-型连接的吸收峰,hmp-2无明显的β-型连接的吸收峰;经HPLC进行分子量测定,hfp-1的分子量为54000,hmp-2的分子量为68000,猴头菌子实体多糖和菌丝体多糖在化学组成上有一定的差异。     

粗柄羊肚菌菌丝体多糖及胞外多糖的提取工艺

为了研究粗柄羊肚菌菌丝体多糖及胞外多糖的最佳提取工艺条件,采用超声波提取菌丝体多糖、菌丝体发酵液浓缩提取胞外多糖的方法。通过单因素试验和L9(34)正交试验设计,探讨二者的最佳提取工艺条件。研究结果表明菌丝体多糖的最佳提取工艺条件:料液比1∶20(g∶m L),超声波处理温度70℃,超声时间20 min,超声提取次数2次;胞外多糖的最佳提取工艺条件:浓缩倍数1∶5,浓缩温度50℃,醇沉浓度95%,p H为6。该项工艺研究得到菌丝体粗多糖平均含量56.761 2 mg/g,胞外多糖平均含量1.275 4 mg/m L,多糖产量稳定,且此试验方法稳定可行。     

蛹虫草子实体多糖的分离纯化

目的:研究人工培养蛹虫草子实体多糖的分离纯化方法.方法:多糖经脱色、醇析、除蛋白及乙醇分级沉淀,采用Seph-adex G100柱层析纯化.结果:60℃脱色9h脱色率达70.72％.醇析最优条件为:无水乙醇,24h,4倍乙醇.Sevag法抽提30min重复6次除蛋白率达84.09％;抽提lh重复3次、6次除蛋白率分别为81.14％、84.47％,多糖损失率分别为27.03％、43.16％.木瓜蛋白酶除蛋白最优条件为70℃,1:10,2h,除蛋白率为25.67％.粗多糖经乙醇分级沉淀得2种粗多糖成分,分别经Sephadex G100柱层析可进一步纯化为3种较纯多糖成分.结论:采用乙醇分级沉淀及Sephadex G100柱层析纯化粗多糖可得到3种较纯多糖成分,纯化效果较好.     

阿魏蘑多糖理化性质及免疫活性研究

以阿魏蘑Pleurotus ferulae Lanzi子实体和菌丝体为试验材料,采用水浸法提取阿魏蘑多糖,分别得到子实体粗多糖A和菌丝体粗多糖B。将A经Sevag法去蛋白、透析、CTAB络合、乙醇沉淀、NaCl溶液溶解、透析,得到多糖A1。紫外光谱分析鉴定多糖A1为均一组分。苯酚一流酸法测得多糖A1糖含量为82．9％。凝胶渗透色谱法测得多糖A1数均分子量Mn=141088,重均分子量MW＝142897。气相色谱分析多糖A1单糖组成及其摩尔比为Xyl:Gal:Gal=1:1.02:2.899。巨噬细胞吞噬作用试验、迟发型变态反应试验、白细胞介素－2（IL－2）的诱生与检测试验测得粗多糖A、粗多糖B具有免疫活性。     

桔梗多糖的提取与纯化

中药桔梗饮片经水浸提、乙醇分步沉淀,获得乙醇终浓度60%和80%的两个粗多糖组分,分别命名为PPS60和PPS80。经Molish反应、Fehling试剂反应呈阳性,碘-碘化钾反应呈阴性,说明PPS60和PPS80中均含有多糖和还原糖,但不含有淀粉。运用苯酚-硫酸法测得PPS60和PPS80的总糖含量分别为82.25%和84.17%;3,5-二硝基水杨酸（DNS）法测得还原糖含量分别为6.21%和8.05%。PPS60和PPS80经过Sevage法除蛋白、透析、浓缩和Sephrose 6B凝胶柱层析获得两个单一组分。这些结果为进一步研究桔梗多糖奠定了基础。     

沙棘果皮多糖清除氧自由基的活性研究

沙棘(Hippophae rhamnosides)果皮经80℃恒温水浴提取, 乙醇沉淀得粗多糖。Sevag法去蛋白,经50%和70%乙醇分级, 得3种级分沙棘多糖H1、H2和H3; 以Fenton 反应, 即H2O2/Fe2+/水杨酸为.OH产生和检测体系; 以邻苯三酚/EDTA/Tris-HCl为O2 -. 产生体系, 对沙棘多糖H1、H2和H3进行抗氧自由基活 性研究。结果表明, 沙棘多糖对.OH和O2 -. 有较显著的清除能力。不同级分多糖H1、H2和H3浓度达200mg.mL-1时, 对.OH的清除率分别为44.9%、49.0%和26.4%, 抗O2-. 活性分别为36.9%,15.4%和23.1%。多糖质量浓度增大时,两种自由基清除率增加, 且呈量效关系。     

紫芝细胞壁大分子量葡聚糖的纯化及结构鉴定

采用超微粉碎、热水浸提法从紫芝子实体水提残渣中获得细胞壁粗多糖,通过30%乙醇沉淀、20%醇洗的方法纯化出大分子量均一多糖GSCW30E-20E。苯酚硫酸法检测其多糖含量为98.03%,单糖组成分析显示其仅由葡萄糖组成,高效凝胶尺寸排阻色谱-多角度激光散射仪-示差折光检测技术测定其重均分子量为1.552×10 ⁶g/mol。通过红外光谱、甲基化及核磁共振分析对其结构进行解析,结果表明,GSCW30E-20E是一种β-D-葡聚糖,该多糖主链由β-(1,3)-糖苷键连接而成,每3个糖残基主链上通过β-(1,6)-糖苷键连有一个葡萄糖残基为支链。     

ARTP诱变猴头菌株的发酵菌丝体多糖理化性质及体外免疫活性

为探讨常压室温等离子体诱变的3株高产多糖猴头菌和出发菌株的多糖组分差异,通过液体发酵获得的菌丝体经水提、分级醇沉获得8个胞内多糖组分,对它们的理化性质、结构特征及体外免疫活性进行了研究。结果表明,3株ARTP诱变菌株414、321、236菌丝体多糖含量较出发菌株有较明显提升;ARTP诱变的猴头菌20%醇沉多糖组分较出发菌株分子量大,所占比例增加;诱变菌株60%醇沉多糖组分的分子量略大于出发菌株,所占比例相近。20%醇沉多糖主要由半乳糖、葡萄糖、甘露糖构成,诱变菌株该多糖组分中葡萄糖和甘露糖的比例较出发菌株均有明显提升,60%醇沉多糖组分单糖组成无明显差异;8个多糖组分均具有体外刺激巨噬细胞释放NO的活性,其中20%醇沉多糖的活性优于60%醇沉多糖,诱变菌株的生物活性优于出发菌株。本研究探讨了ARTP诱变对猴头菌胞内多糖结构及活性的影响,为猴头菌相关产品的开发提供了优质资源。     

人工蝉花孢梗束粗多糖的提取工艺和活性

通过单因素试验和正交试验研究了人工蝉花孢梗束粗多糖的提取工艺,并通过粗多糖对果蝇寿命、果蝇体内SOD活性及MDA含量的影响研究了粗多糖的活性。试验结果表明:人工蝉花孢梗束粗多糖的最佳提取工艺为液料比20∶1、时间2 h、温度90℃、浸提2次、醇沉乙醇浓度70%、醇沉时间为24 h;在该条件下的粗多糖得率为8.65%。孢梗束粗多糖能明显延长雌雄果蝇的寿命,延长率分别为18.78%和26.23%;孢梗束粗多糖能显著提高雌雄果蝇的SOD活性,并明显降低了雄性果蝇体内MDA含量,说明人工蝉花孢梗束粗多糖具有抗氧化活性和延长果蝇寿命的作用。     

灵芝液态发酵高产胞外多糖菌株筛选及多糖特性分析

对10株灵芝菌株发酵菌丝体生物量、胞内多糖含量、胞外粗多糖得率及其多糖含量和单糖组成特征进行了系统分析。结果表明,随着培养时间的延长,10株菌株的生物量均有不同程度增加,但不同菌株胞内多糖含量和胞外粗多糖得率变化趋势有所不同。在培养至7d时,G0023和G0160菌株胞外粗多糖得率均较高,分别为3.02g/L和3.14g/L,其多糖含量分别达到了84.11%和91.03%,可作为发酵高产胞外多糖的优良菌株。分级醇沉胞外多糖分析结果表明,各菌株胞外液20%乙醇沉淀所得20E组分的得率和多糖含量均高于50%乙醇沉淀所得的50E组分,说明胞外液中主要以大分子量多糖为主。20E主要由葡萄糖组成,含有少量木糖和甘露糖;50E主要由葡萄糖和甘露糖组成,含有少量木糖和半乳糖。胞外液表观粘度随剪切速率变化曲线分析结果显示,各菌株胞外液均呈现剪切变稀非牛顿流体特性,其表观粘度大小与菌株对应20E组分的得率及多糖含量呈正相关。     

鲎G因子实验法定量测定药用、食用蘑菇多糖中的(1,3)-β-葡聚糖含量

(1,3)--葡聚糖是蘑菇免疫调节和抗肿瘤多糖的核心结构。通过鲎的G因子法测定了从19种药用和食用蘑菇中提取的27个多糖样品中(1,3)--葡聚糖的含量,我们发现(1,3)--葡聚糖普遍存在于这些蘑菇多糖提取物中。但是,(1,3)--葡聚糖的含量随蘑菇的种类和多糖提取的部位不同有着很大的差异,平均值大约占多糖的34.8%。从香菇、裂褶菌、云芝、草菇、灰树花、鸡腿菇和姬菇中提取的9种多糖中(1,3)--葡聚糖含量远高于其余的多糖。适当的纯化可以提高蘑菇多糖中(1,3)--葡聚糖的含量。我们的研究表明鲎G因子法可以用来快速有效地测定蘑菇多糖提取物中的(1,3)--葡聚糖含量。     

猴头菌不同发育阶段产生的多糖结构特征及免疫活性

采收猴头菌Hericium erinaceus 7个不同发育阶段的子实体,经热水浸提后分别采用20%、50%、70%的乙醇终浓度进行分级沉淀,获得21个多糖组分,对它们的结构特征及体外免疫活性进行了研究。结果表明,在猴头菌发育过程中,多糖总得率呈现先增大后减小的趋势,在第5阶段达到最大值0.92%。20%醇沉的多糖含量也呈先增大后减小的趋势,在第5阶段达到最大值42.87%,其大分子量多糖（1 000-5 000kDa）所占比例最高。50%、70%醇沉多糖均为小分子量多糖,约为10-40kDa。获得的猴头菌多糖组分中,单糖组成多以岩藻糖、半乳糖、葡萄糖和甘露糖为主（相对比例存在一定差异）;另外,第1阶段20%、70%醇沉多糖还含有少量的核糖,第7阶段20%醇沉多糖含有一定量的鼠李糖;7个时期50%醇沉多糖均含有一定量的葡萄糖醛酸。所得多糖样品均具有刺激巨噬细胞释放NO的活性,其中20%醇沉多糖的活性优于50% 和70% 醇沉多糖,在50μg/mL时就表现出显著的体外免疫活性。此外,在第5阶段即中菌刺期产生的多糖活性最优,说明在此阶段采摘可以获得最佳的猴头菌多糖原材料。本研究为猴头菌生长发育过程中活性多糖的动态形成研究提供了一定的理论基础。     

不同炮制方法对玉竹提取物得率及体外抗氧化作用的影响

以多糖、总黄酮、醇溶物和水溶物的得率及体外抗氧化活性为考察指标,研究了酒蒸和蜜蒸两种炮制方法对玉竹品质的影响。结果表明：酒蒸炮制玉竹的多糖、醇溶物得率最高,蜜蒸炮制玉竹总黄酮、水溶物的得率最高,比未炮制的玉竹（生品玉竹）中相应成分的得率分别提高了43.86%、29.53%、49.46%和34.66%。将多糖、水溶性浸出物、醇溶性浸出物及总黄酮四者得率相加的和进行比较,蜜蒸最好,蜜蒸为111.069%,酒蒸为107.309%,生品玉竹为80.926%。酒蒸炮制玉竹的多糖、水溶物对DPPH自由基的清除率均高于蜜蒸玉竹和生品玉竹,其DPPH_IC50分别为0.345±0.019和0.441±0.022 mg·mL^-1;蜜蒸炮制玉竹的总黄酮、醇溶物对DPPH自由基的清除率均高于酒蒸玉竹和生品玉竹,其DPPH_IC50分别为0.047±0.011和0.199±0.036 mg·mL^-1;在浓度为1 mg·mL^-1时,蜜蒸玉竹总黄酮对DPPH自由基的清除率最大,为90.29%,超过了浓度为0.05 mg·mL^-1的芦丁和槲皮素标品对DPPH自由基的清除率。两种炮制方法均提高了多糖、水溶物、总黄酮3种提取物的还原能力,但是降低了醇溶物的还原能力。     

滑菇多糖wPNP-a1的制备及结构分析

利用传统热水浸提法提取滑菇粗多糖(wPNP),进而用季铵盐沉淀法和Sephadex G-150凝胶色谱柱层析对wPNP进行纯化,得滑菇多糖wPNP-a1.以高效液相色谱(HPLC)、傅里叶变换红外光谱(FIR)、气相色谱(GC)、核磁共振(NMR)、环境扫描电子显微镜(ESEM)和原子力显微镜(AMF)等方法分析wPNP-a1的结构,结果表明,滑菇多糖wPNP-a1的分子量为419310 Da,具有一般类多糖的特征吸收峰,糖苷键为β-型,不含乙酰基,由木糖、甘露糖、半乳糖和葡萄糖组成,其摩尔比为3.91∶2.77∶1.91∶1;wPNP-a1的分子间排斥力较大,分子间吸引力较小,在云母表面呈直链状分布,链宽23 nm左右,链高0.7～0.8 nm.     

Bioactive polysaccharides from the stems of the Thai medicinal plant Acanthus ebracteatus: their chemical and physical features

Crude water-soluble polysaccharides were isolated from Acanthus ebracteatus by hot water extraction followed by ethanol precipitation after pre-treatment with 80% ethanol. The crude polysaccharides were separated into neutral and acidic polysaccharides by anion-exchange chromatography. The neutral polysaccharide (A1001) was rich in galactose, 3-O-methylgalactose and arabinose, whereas the acidic polysaccharide (A1002) consisted mainly of galacturonic acid along with rhamnose, arabinose and galactose as minor components indicating a pectin-type polysaccharide with rhamnogalacturonan type I (RG-1) backbone. 3-O-Methylgalactose is also present in the acidic fraction. Both neutral and acidic fractions showed potent effects on the complement system using pectic polysaccharide PM II from Plantago major as a positive control. A small amount of 3-O-methylgalactose present in the pectin seemed to be of importance for activity enhancement in addition to the amount of neutral sugar side chains attached to RG-1. The relationship between chemical structure and effect on the complement system of the isolated polysaccharides is considered in the light of these data. The presence of the rare monosaccharide 3-O-methylgalactose may indicate that this can be used as a chemotaxonomic marker. The traditional way of using this plant as a medical remedy appears to have a scientific basis.