高效降解地塞米松的产碱假单胞菌的驯化和筛选

目的为制备清除水环境地塞米松污染的微生物净化剂提供高效降解地塞米松的菌种。方法将从医院废水分离的可降解地塞米松的降解菌(产碱假单胞菌)接种于地塞米松磷酸钠培养液,常规孵箱37℃反复驯化培养。将驯化培养后的细菌接种于地塞米松磷酸钠琼脂平板,常规培养后,挑取单菌落,用高效液相色谱法测定其对地塞米松和地塞米松磷酸钠的降解作用并进行筛选,筛选出的菌株再经形态、染色性和16SrDNA鉴定。观察驯化菌生长特性和降解特性,并与降解菌比较。结果降解菌经驯化培养后,筛选到1株对地塞米松降解作用强的驯化菌,该菌在震荡培养下,对地塞米松磷酸钠的降解率从驯化前的50.86%提高到76.12%,将地塞米松降解为其他物质的降解率从23.63%提高到77.05%。在常规培养下,对地塞米松磷酸钠的降解率从驯化前的20.65%提高到73.84%,将地塞米松降解为其他物质的降解率从22.14%提高到43.08%(P=0.01)。驯化菌的生长曲线与降解菌相似,但降解曲线不同。在接种数小时后即出现降解作用,在48h出现降解高峰,比降解菌提前约48h。结论通过对地塞米松降解菌的驯化和筛选,成功地获得1株具有实用价值的高效降解地塞米松的驯化菌。     

一株地塞米松磷酸钠降解菌的分离鉴定

目的为用微生物修复技术清除水环境中的地塞米松污染提供菌种。方法采集被地塞米松磷酸钠污染的医院废水,通过无机盐培养基和含地塞米松磷酸钠的缺碳培养基富集和分离地塞米松降解菌。将分离菌初步驯化后,用常规高效液相色谱法测定其对地塞米松和地塞米松磷酸钠的降解率。分离菌经形态、染色性、生化试验和16S r DNA鉴定。结果获得1株能以地塞米松磷酸钠为唯一碳源和能源的菌株,经生物学特性和16S r DNA分析鉴定为产碱假单胞菌(Pseudomonas alcaligenes)。分离菌对地塞米松磷酸钠的降解率为50.86%。其中,75.23%地塞米松磷酸钠被降解为地塞米松,23.63%被进一步降解率为其他他物质。结论成功地分离到1株地塞米松降解菌,为进一步研究用微生物修复技术清除水环境中的地塞米松污染提供了实验材料。     

蜡状芽孢杆菌HY-1的生长及对毒死蜱的酶促降解特性

为明确毒死蜱降解菌—蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus) HY-1的生长和粗酶液对毒死蜱的降解特性, 采用种子液中定量添加毒死蜱和测定粗酶比活力的方法, 研究了含毒死蜱的种子液培养基中菌株的生长规律和环境因素对粗酶液降解毒死蜱的影响。结果表明: 含毒死蜱的培养液和空白对照相比菌株生长的适应期延长, 对数期、稳定期顺序后延。随着培养液中菌体数量的增长, 培养液的pH也随之升高。粗酶液中可溶性蛋白的含量为2.21 g/L, 测得粗提酶中其米氏常数Km为1.235 6 mmol/L, 最大降解速率Vm     

水稻新基因OsRwp34在大肠杆菌中表达的毒害作用

在水稻高温诱导cDNA文库中克隆了一个新的水稻基因O sRwp34,同源性分析表明O sRwp34是一典型的孤儿基因。为了研究O sRwp34的功能,构建了O sRwp34的表达载体pET-28(a)OsRwp34,并转化大肠杆菌菌株BL21(DE3),用IPTG诱导并定时从培养液中取样以检测OD600值和用平板记数法测定活菌数,结果发现在诱导30 m in后宿主菌开始大量死亡,表明O sRwp34的表达产物使宿主菌死亡。随后构建了1个N末端缺失15个氨基酸残基和2个C末端分别缺失12和47个氨基酸残基的O sRwp34缺失体,IPTG诱导后都没有出现毒性作用,推测N和C末端氨基酸残基的同时存在是OsRwp34的毒性作用所必须的。其详细机理有待进一步研究。     

抗菌蛋白LCIIB的纯化及性质

枯草杆菌A014培养液经硫酸铵沉淀、CM—52纤维素柱层析、FPLG的Mono S和Superose12柱层析,分离纯化出一种抗菌蛋白,命名为LCIIB。电泳分析结果表明该蛋白的分子量为22500Da,等电点为9,95。LCIIB含19种不同氨基酸,缺少半胱氨酸。自动Edman降解法从N端测出24个氨基酸残基,经计算机分析,表明与2万多种已知蛋白没有有效同源性。纯化后的LCIIB对水稻白叶枯病菌有很强的抑制作用,当浓度在5／μmol／L时,能抑制50％此菌G株系的生长。     

一株阿维菌素降解菌AW1-18的筛选与分类鉴定

利用富集培养法从长期施用阿维菌素农药的菜豆土壤中分离出18株能利用阿维菌素为唯一碳源和氮源生长的细菌.采用紫外分光光度法对菌株的阿维菌素降解能力进行测定,结果有4株菌有较好的降解率,其中降解率最好的菌株命名为AW1-18.通过高效液相色谱法对AW1-18的降解能力进行测定,结果表明,当接种量为2.5％时,该菌株在含100 mg/L的阿维菌素无机盐基础培养液中,30℃,150 r/min,pH7的条件下培养6d后,对阿维菌素的降解率达75％以上.用16S rRNA通用引物,经PCR扩增、测序得到AW1-18的16S rRNA序列(GenBank登录号为JQ316540),在NCBI中通过BLAST后发现与不动杆菌属(Acinetobacter)的16S rRNA序列相似性达到99％,结合形态特征和生理生化特性分析结果,确定菌株AW1-18为Acinetobacter tandoii.     

水稻新基因OsRwp34在大肠杆菌中表达的毒害作用

在水稻高温诱导cDNA文库中克隆了一个新的水稻基因OsRwp34,同源性分析表明OsRwp34是一典型的孤儿基因。为了研究OsRwp34的功能,构建了OsRwp34的表达载体pET-28(a)OsRwp34,并转化大肠杆菌菌株BL21(DE3),用IPTG诱导并定时从培养液中取样以检测OD600值和用平板记数法测定活菌数,结果发现在诱导30min后宿主菌开始大量死亡,表明OsRwp34的表达产物使宿主菌死亡。随后构建了1个N末端缺失15个氨基酸残基和2个C末端分别缺失12和47个氨基酸残基的OsRwp34缺失体,IPTG诱导后都没有出现毒性作用,推测N和C末端氨基酸残基的同时存在是OsRwp34的毒性作用所必须的。其详细机理有待进一步研究。     

双烯内酯水解酶基因的克隆和序列分析*

从土壤中分离到一株降解2,4-二氯酚能力较强的假单胞菌菌株GT241-1,从中克隆出参与降解2,4-二氯酚的双烯内酯水解酶基因(dcpD)。该基因编码的双烯内酯水解酶可将顺式-2-氯双烯内酯水解成2-氯马来乙酸。采用的基因克隆策略是用Southem杂交对其邻近基因进行定位后构建基因组库,再用斑点杂交筛选目的转化子。经序列测定得知dcpD基因编码区702bp。核苷酸和推测编码的氨基酸序列分析表明,dcpD与已在GenBank登记的相关基因有一定的差异。     

肺炎克雷伯菌表面成分对小鼠细菌感染的保护作用*

观察肺炎克雷伯菌 (Klebsiellapneumoniae,Kp)表面成分在小鼠体内对细菌感染的保护作用。经肺炎克雷伯菌培养液经溶菌酶、NP40溶菌后 ,再经去脂、去蛋白和有机溶剂沉淀 ,干燥获取Kp表面成分干粉。用不同剂量的Kp表面成分免疫小鼠 ,分别用大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌攻击小鼠 ,记录小鼠死亡情况 ,并测定循环抗体效价。结果 :Kp表面成分低剂量组 (30 μg/g体重 )和高剂量组 (40 μg/g体重 )对大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌感染有显著保护作用 ,能降低感染小鼠的死亡     

产碱菌麦芽四糖淀粉酶的纯化及性质

产碱菌(Alcaligenes sp．)537．1除去菌体的培养液经硫酸铵沉淀及DEAE-纤维素离子交换柱层析,得到了凝胶电泳均一的麦芽四糖淀粉酶。纯化了141倍,酶活力回收40.1％,比活力达3308U／mg。用浓度梯度PAGE和SDS—PAGE测定酶分子量分别为68000和66000,不具亚基。用PAG-1EF测定等电点为4．45。酶反应最适pH和温度分别为7.0和60C。在pH7—10范围内稳定,该酶半衰期为37C 12小时,50 C 1小时和62 C 6分钟。 麦芽四糖淀粉酶是糖蛋白,含有4％左右的糖,含有27．10％酸性氨基酸、11.08％碱性氨基酸和1．82％色氨酸。     

芘高效降解菌的分离鉴定及其降解特性

以芘为唯一碳源,采用富集培养方法,从沈抚灌区石油污染土壤中分离得到一株芘降解菌ZQ5.根据形态学观察、生理生化鉴定和16S rDNA序列分析结果,将菌株ZQ₅鉴定为寡养单胞菌属（Stenotrophomonas sp.）.采用摇瓶振荡培养方法研究该菌株降解芘的特性及培养条件对降解效能的影响.结果表明：菌株ZQ₅在30 ℃振荡培养10 d后,对100 mg·L^-1的芘降解率为91.2%,加入水杨酸（100 mg·L^-1）作为共代谢底物可以提高菌株ZQ₅对芘的降解率.当培养基pH为7～8、盐浓度不高于2%时,有利于菌株ZQ₅降解效能的发挥.     

一株AEC^hrL—赖氨酸产生菌

从乳糖发酵短杆菌Brevibacterium Lactofermentum2645菌株出发选育L-赖氨酸产生菌,经分离复壮后,用硫酸二乙酯(DES)诱变处理,由添加S-(2-氨基乙基)—L—半胱氨酸(AEC)和L-苏氨酸的药物平板定向筛选,最后获得了一株L—赖氨酸高产菌E_(16-2)(AHV~(hr)SAM~gAEC~(hr))。进而通过正交试验、工艺条件试验最终获得了该菌株的最佳发酵条件,并考查了在此条件下的L-赖氨酸发酵过程,结果表明该菌具有生长、耗糖、产酸速度快、发酵周期短的明显特点。     

芽孢杆菌和欧文氏菌的原生质体融合的研究

采用原生质体融合技术对带有链霉素标记的芽孢杆菌B12 13 2 和带有红霉素标记的欧文氏菌E2 6 2 3 进行原生质体融合。采用选择性及非选择性培养基对融合子进行 10次重复性传代试验后 ,获得稳定的融合子 2 84株 ,经重复性苎麻脱胶试验 ,从中获得 6株脱胶效果较好的融合子。     

丝氨酸生产菌的筛选及静息细胞培养系统中L-丝氨酸的合成

从广西隆安县沼气池里的残渣中筛选到一株能以甲醇为唯一碳源生长的MB200菌株。根据常规形态特征、生理生化性状及16S rDNA基因序列分析将其鉴定为甲基杆菌属(M ethylobacteriumsp.)。其最佳生长条件为:温度32℃、pH值8.0、甲醇体积分数1.25%。建立了MB200生成L-丝氨酸的静息细胞培养系统。确定静息细胞培养的条件为:甘氨酸质量浓度为10 g.L-1,甲醇50 g.L-1,菌体质量浓度为30 g.L-1,pH8.9,于摇床250 r.m in-1,32℃静息培养48 h,L-丝氨酸产量为7.2 g.L-1。     

保加利亚乳杆菌H+-ATPase缺陷型菌株的筛选

【目的】从传统乳制品中筛选具有新霉素抗性的H+-ATPase缺陷的德氏乳杆菌保加利亚亚种自发突变株,为最终开发弱后酸化的酸奶发酵剂奠定基础。【方法】利用API 50 CH细菌鉴定系统和16s rRNA基因序列分析对菌株进行鉴定。新霉素作为筛选压力,筛选具有新霉素抗性自发突变菌株,比较亲本和突变菌株的H+-ATPase活力及其代谢情况。【结果】从内蒙古地区的传统发酵酸奶中分离鉴定出一株德氏乳杆菌保加利亚亚种（Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus）,并命名为KLDS 1.9201。以此为出发菌株,筛选出两株H+-ATPase缺陷的自发突变株,分别命名为KLDS 1.9201-1、KLDS 1.9201-4,它们的H+-ATPase活力分别比亲本KLDS 1.9201降低了46%和60%。在MRS培养基中生长24 h后,KLDS 1.9201、KLDS 1.9201-1和KLDS 1.9201-4对初始葡萄糖的代谢率分别为65%、41%和31%,终产物中乳酸的浓度分别为26g/L、18g/L和15g/L,突变菌株的生物量均低于亲本。【结论】H+-ATPase活力降低的德氏乳杆菌保加利亚亚种的自发突变株具有较低的生长速率和弱产酸能力,它们可被用于制作弱后酸化的酸奶发酵剂。     

Physiologo-biochemical properties of a strain of Beijerinckia mobilis 1phi Phn+--a degrader of polycyclic aromatic hydrocarbons

Beijerinckia mobilis 1f capable of degrading polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs) was isolated from a soil contaminated with creosote. Strain 1f could utilize phenanthrene and naphthalene as the sole sources of carbon. The mean rate of phenanthrene degradation during culture growth was 7-8 micrograms/(ml h). After cultivation under nonselective conditions, strain 1f retained its ability to degrade phenanthrene. Cometabolism considerably widened the range of PAHs that could be transformed by strain 1f. The strain was able to grow in a mineral medium with creosote as the sole source of carbon. After 30 days of cultivation in this medium, the total concentration of PAHs decreased from 665.5 mg/l to 170 mg/l.     

TSH is able to induce cell cycle-related gene expression in rat thyroid cell.

Rat thyroid cells in culture (FRTL-5 strain) require thyrotropic hormone (TSH) for growth. TSH alone in serum free medium is able to induce DNA synthesis of FRTL-5 cells. DNA synthesis occurs 18-20 hours following TSH stimulation of quiescent cells. Here we demonstrate that two sets of genes, related to the entry of cells in the S phase, are induced by TSH: 1) immediate early genes, such as c-jun and a gene coding for a zinc-finger protein Xrox 20/Egr2, both having a pattern of expression similar to the c-fos oncogene; 2) early delayed genes such as ornithine decarboxylase (ODC), 2F-1, a gene that shows a strong similarity in aminoacid sequence to a mitochondrial ADP/ATP carrier, and the asparagine synthetase gene (TS11). Furthermore, an increased expression of the histone H3 gene, a typical marker of S phase, has been observed in TSH-treated FRTL-5 cells.     

促生菌对基质栽培番茄根系细菌群落的影响

[背景]植物促生菌剂产品在农业生产上的应用越来越广泛,但人们对促生菌在基质栽培条件下对作物根系微生物群落影响的了解有限.[目的]明确在基质栽培条件下促生菌假单胞菌(Pseudomonas sp.) JP2-3和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) Z54对番茄生长和根系细菌群落的影响.[方法]通过蘸根和灌...     

INGAP-related pentadecapeptide: its modulatory effect upon insulin secretion

We examined the effects of a pentadecapeptide having the 104-118 aminoacid sequence of islet neogenesis-associated protein (INGAP-PP) on insulin secretion, and the morphological characteristics of adult and neonatal pancreatic rat islets cultured in RPMI and 10 mM glucose for 4 days, with or without different INGAP-PP concentrations (0.1-100 mug/ml). A scrambled 15 aminoacid peptide was used as control for the specificity of INGAP-PP effect. Cultured neonatal and adult islets released insulin in response to glucose (2.8-16.7 mM) in a dose-dependent manner, and to leucine and arginine (10 mM). In all cases, the response was greater in adult islets. INGAP-PP added to the culture medium significantly enhanced glucose- and aminoacid-induced insulin release in both adult and newborn rats; however, no changes were observed with the scrambled peptide. Similar results were obtained incubating freshly isolated adult rat islets with INGAP-PP. Whereas INGAP-PP did not induce significant changes in islet survival rate or proportion/number of islet cells, it increased significantly beta-cell size. This first demonstration of the enhancing effect of INGAP-PP on the beta-cell secretory response of adult and newborn islets opens a new avenue to study its production mechanism and potential use to increase the secretory capacity of endogenous islets in intact animals or of islets preserved for future transplants.