分泌抗马铃薯X病毒株系特异性单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及抗体理化性质测定

用马铃薯x病毒(Pvx)免疫的BALB／c小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2／0)融合,经3次克隆化后,筛选出3类分泌抗PVx株系特异性的单克隆抗体(McAb)杂交瘤细胞株,该细胞株经传代20代以上,并经液氮冻存一年以后仍表现稳定。3个杂交瘤细胞株染色体数目集中在92—102条之间,其免疫球蛋白亚类均为IgG3,用ELlsA间接法测定细胞培养上清滴度为1：320—1：640,小鼠腹水抗体滴度为1：102400—1：204800,后者比兔抗血清滴度(1：320)高300倍以上。McAb对抗原具有中和作用,中和滴度为1：102。经反复冻融、硫铵沉淀和冻干后,抗体活性无明显变化。     

抗乙型肝炎表面抗原不同亚型单克隆抗体细胞腺的建立和鉴定

乙型肝炎病毒表面抗原主的的５个不同亚型,是乙肝病毒不同遗传变种表面的表达,通过四次细胞融合获得了抗－ａ、抗－ｄ抗－ｙ、抗－ｗ亚型的单克隆抗体,并作了鉴定及初步应用,为进一步对乙肝亚型分型试剂的研制打下了良好的基础。     

抗乙型肝炎表面抗原不同亚型单克隆抗体细胞株的建立和鉴定

乙型肝炎病毒表面抗原主要的５个不同亚型,是乙肝病毒不同遗传型变种表型的表达,通过四次细胞融合获得了抗－ａ、抗－ｄ、抗－ｙ、抗－ｗ亚型的单克隆抗体,并作了鉴定及初步应用,为进一步对乙肝亚型分型试剂的研制打下了良好的基础     

双特异性抗体的制备与应用

双特异性抗体是指通过化学交联、细胞工程和基因工程方法制备的一种可以在体内、外特异识别两种抗原并能与之结合产生生物学效应的抗体分子,在免疫学检测与肿瘤药物导向治疗和介导细胞毒作用中应用广泛。近年来,对双特异性抗体制备与应用的研究越来越深入,本文仅就这两方面研究的最新进展作一介绍。     

抗HBsAg—抗HRP双特异单克隆抗体的鉴定及初步应用

应用本实验组建立的分泌抗ＨＢｓＡｇ－抗ＨＲＰ双特异单克隆抗体的杂交－－杂交瘤细胞株注射Ｂａｌｂ／Ｃ小鼠腹腔,诱生腹水。经用双亲和柱层析,获得较纯双特异单克隆抗体,检测结果表明该抗体具有特异性好、亲和力高等特性。用以建立单克隆抗体与双特异抗体夹心法ＥＬＩＳＡ,初步用于临床血清标本中ＨＢｓＡｇ检测,取得满意效果。并与上海实业科华生化制品有限公司乙肝ＨＢｓＡｇ诊断试剂（卫生部推荐使用试剂）比较,符合率为     

分泌抗芜菁花叶病毒株系特异性单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及抗体理化性质测定

用经芜菁花叶病毒(TuMV)免疫的BALB／c小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞(Sp2／0－Agl4)融合,经3次克隆化培养和ELISA筛选,建立了5类分泌抗TuMV的单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株。其中4类分别对TuMV－CI株系、TuMV—C3株系、TuMV—C4株系和TuMV－c5株系具有特异性反应,第5类对TuMV 5个株系均有反应。以双抗体夹心ELISA和间接ELISA检测,上述McAb同CaMV、CMV、TMV、PVX和PVY等均不产生交叉反应,小鼠腹水McAb的滴度在1：256000--2048000之间,多为1：1024000,比常规多抗血清高400倍左右。对上述杂交瘤细胞系和McAb的生物学特性及理化性质进行了鉴定。用SDS—PAGE、Western—blotting对TuMV外壳蛋白亚基、McAb识别位点进行了分析,并就McAb区分TuMV株系进行了讨。     

抗乙型肝炎病毒表面抗原“y”亚型及“a”组抗原决定簇杂交瘤细胞株的建立与应用

用部分纯化的HBsAg/adr和ayw亚型免疫Balb/c小鼠的脾细胞,在PEG作用下与Sp2/o骨髓瘤细胞进行融合,经ELISA及RIA法筛选出了分泌抗HBsAg/a(SH 1 D9)、抗HBsAg/y(SG 3 B10)亚型决定簇的杂交瘤细胞系,在组织培养上清液中它们的滴度分别     

分泌人体肝癌单克隆抗体的两个小鼠杂交瘤株及其抗体的专一性分析(简报)

有证据表明人体肝癌细胞表面膜抗原的成份与正常肝细胞的有差异。应用125I UdR释放试验也证明肝癌患者的周围血淋巴细胞对体外培养的肝癌细胞有细胞毒作用。表明患者的免疫系统有可能识别这些膜抗原的差异性。但除了与人体肝癌有交义反应的胚胎肝抗原的性质有些初步报道以外,人体肝癌相关抗原的种类     

新城疫病毒单克隆抗体的特性及应用

建立了8个分泌抗新城疫病毒(NDV)特异性单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株,根据它们的免疫生物学特性可以分为三种类型:(1)具有FA和ELISA特性(FN1、FN4、FN29、FN30、FN35、FNl22);(2)具有FA、ELISA和HI特性(FN7);(3)具有ELISA、HI特性和中和能力(FN106),根据FN30和FN106的ELISA试验,可将11个NDV毒株分为二种不同的抗原群,应用FN4-FITC,FN7-FITC和FN29-HRP试剂,对人工感染NDV和野外送检病例检测结果表明,单抗试剂的DFA阳性率(92.3％)高于病毒分离阳性率(87.2％),两种方法的符合率89.7％,这些单抗试剂用于临床诊断敏感性和特异性高,且方法快速、简便。     

大肠杆菌合成的HBcAg转化为HBeAg的研究及其应用

37℃用1％β-巯基乙醇处理大肠杆菌HBcAg2小时,可使其全部转化成HBeAg。以常规ELISA方法不能检出HBcAg活性。该制品能被抗-HBe阳性血清特异中和。4℃以液体形式存放稳定,-20℃经过冻融活性下降。HBcAg转化成HBeAg后聚丙烯酰胺凝胶电泳行为有所改变。分别用转化的大肠杆菌HBeAg和血浆HBeAg作为酶联反应的诊断试剂,检测35份HBsAg阳性乙肝病人血清标本的抗-HBe,符合率为91.4％。同用Abbott-HBe(RIA)试剂盒测定的17份HBsAg阳性血清标本的试验结果比较,符合率为100％。说明转化的大肠杆菌HBeAg可代替血浆HBeAg作为检测抗-HBe的诊断试剂应用。     

乙型肝炎病毒表面抗原a、d、r亚型单克隆抗体的制备与应用

本文成功地建立了分泌抗乙型肝炎病毒表面抗原(抗-HBsAg)a,d、r3种亚型决定簇抗体的4株杂交瘤细胞。经一系列生化、免疫学鉴定,证明4株细胞所分泌的单克隆抗体(McAb)均具有各自的亚型特异性。反复克隆培养16周,并液氮冻存8个月后复苏,抗体的效价仍稳定不变。用纯化的McAb制备RPHA诊断试剂,检测了80例有乙型肝炎自觉症     

长叶车前花叶病毒单克隆抗体的制备及在病毒分型中的应用

应用细胞杂交技术,将长叶车前花叶病毒杭州分离株(RMVha)、烟草花叶病毒普通株(TMVc)和北京番茄株(TMVbe-t)免疫的Balb/c小鼠脾细胞与Sp2/0-Ag14小鼠骨髓瘤细胞融合,经筛选测定,成功地获得了5株稳定分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其中1株属于IgG_(2b),其余4株均属于IgG_(?),5株细胞株均制备了腹水抗体,ELISA效价最高达256000,琼脂双扩散效价达128,根据与15个不同RMV和TMV毒株的反应特性,可将5株单克隆抗体分为A、B、C三组,分别针对a、b、c三个不同的抗原决定簇。根据三组单克隆抗体反应性的差异,15个毒株可分为8个血清型,本文讨论了所获得的5株杂交瘤细胞在植物病毒的诊断、病毒病原的鉴定及病毒分型方面的应用价值。     

用Epstein-Barr病毒转化技术建立分泌人单克隆抗体B淋巴细胞系的条件

用以去除T淋巴细胞的E—玫瑰花形成法中所用的羊红细胞(SRBC),其保鲜程度对EB病毒转化B淋巴细胞的结果有一定影响,用保存1天的SRBC者,转化细胞的抗体分泌时间较长(8～10周),并且能形成传代细胞系;用保存17天的SRBC,转化细胞的抗体分泌时间较短,未能无限传代。分离外周血单个核细胞时,保留自体粘附细胞作为饲养细胞,转化的细胞二个月的成活率可达75％,而不保留粘附细胞者,转化细胞成活率仅40％。能产生抗-HBc抗体的EBV转化细胞,自然分泌抗体时间一般不超过10周,高峰期在3周以内,第2周时最高。EB病毒感染后的转化细胞5天开始克隆,一般细胞难成活,在14天克隆的,成活率可达100％。21天开始克隆的转化细胞,免疫球蛋白自然分泌维持12周以上,而在35天开始克隆的细胞,维持分泌的时间都不超过10周。以未经γ线照射的小鼠腹腔渗出细胞作饲养细胞,可支持转化3周的细胞克隆扩增,克隆成活率可达100％,而对照组克隆成活率仅为64.7％。     

小鼠抗天花粉蛋白IgE单克隆抗体的制备、分离和鉴定(英文)

天花粉蛋白是中药天花粉的有效引产成份,在应用中它偶尔也引起过敏反应。我们用杂交瘤技术建立了一株分泌抗天花粉蛋白特异性IgE单克隆抗体的杂交瘤细胞系。在实验中,二次免疫的C57 BL/6 J小鼠的肠系膜淋巴结细胞和脾细胞分别被用来同NSI骨髓瘤细胞进行融合。虽然在融合前动物血清IgE抗体效价仅为40～160 PCA滴度,但用肠系膜淋巴结细胞进行的4次融合都产生了IgE杂交瘤。阳性率为1.0-6.7%。对比之下,用脾细胞进行的另外两次融合却没有观察到IgE杂交瘤产生,统计结果说明差异显著(P<0.05)。该IgE单克隆抗体可以在体内和体外诱发大鼠肥大细胞脱颗粒。56℃热处理2小时能使该抗体诱导PCA反应的能力完全丧失,然而却不影响其结合抗原的能力。对该单克隆抗体的特异性的鉴定表明,它可以特异性地识别精制天花粉蛋白和结晶天花粉蛋白上的抗原决定簇。