应用聚合酶链反应改造蛙鱼生长激素cDNA

为了在大肠杆菌中表达天然序列的娃鱼生长激素基因,本研究应用聚合酶链反应扩增方法改造娃 鱼生长激素cDNA,成功地扩增出编码蛙鱼生长激素成熟肤的序列,并在该序列的5端和3端分别引 人EcoRI和BamHI的识别序列,使之便于进入载体,获得亚克隆。结果表明：应用聚合酶链反应扩 增及分子克隆方法改造蛙鱼生长激素cDNA较传统的DNA重组方法简便,效率高。文中对聚合酶链 反应扩增中非预期突变进行了讨论。     

鲫两种不同生长激素cDNA的分子克隆和分析

从鲫脑垂体组织提取总RNA ,采用 3′RACE PCR的方法 ,从单一垂体总RNA中扩增出编码两种不同类型鲫生长激素的cDNA :生长激素Ⅰ (GrowthhormoneⅠ ,GHⅠ )和生长激素Ⅱ (GrowthhormoneⅡ ,GHⅡ )。将两种类型的鲫GHcDNA分别克隆到pGEM TEasyVector上进行序列测定和分析。克隆的鲫GHⅠ和GHⅡcDNA均包括编码 188个氨基酸残基的GH成熟肽序列和 3′端的非翻译区 ,但不含信号肽序列和 5′端非编码区。序列分析结果表明 ,鲫GHⅠ的碱基序列和推测的氨基酸序列与国外已经发表的金鱼GHⅠ的同源性分别为 98 7%和 97 9% ;GHⅡ的碱基序列和推测的氨基酸序列与金鱼GHⅡ的同源性分别为 99 1%和 99 5% ,虽然同源性较高 ,但仍具有一定的差异     

激素和活性多肽

通过滚动瓶培养或搅拌培养人垂体细胞,生产了人胰岛素样生长因子Ⅱ此专利披露了一种环形DNA,此DNA包含有一个牛生长激素多聚腺昔化信号、一个编码所需要的多肤     

猪垂体中猪生长激素基因的克隆和部分序列分析

从猪垂体中提取出DNA,以EMBL3噬菌体作裁体,构建了染色体基因文库。用全长的猪生长激素(pGH)cDNA作探针,经原位杂交,筛选出5个阳性克隆。提取其中一个阳性克隆的DNA,通过斑点杂交,酶解和Southern印迹,表明它含有全长猪生长激素基园,将sma Ⅰ酶解后soufhem印迹为阳性的两个片段进行了亚克隆,对其中含有猪生长激素基因sma Ⅰ位点上游序列的片段进行了部分序列分析,并和已发表的相应序列进行了比较。     

疫苗

922901在杂种病毒辐粒表面表达口蹄痊病毒外宪蛋白抗原决定签单体或二聚体的修饰的活的感染性牛.炎病拜度苗〔英〕/K it,5.…f Areh.virol一i。。1,120(i~2)。一i~17〔译自DBA,1992,11(s), 92一01373〕 将化学合成的编码牛生长激素信号肤序列和口蹄疫病毒(FMDV)VPI抗原决定基序列单体或二聚体擂入到感染性牛鼻炎(IRV)主要糖蛋白g皿基因中,构建了修饰的减活的牛感染性鼻炎杂种病毒疫苗。外源DNA序列擂入到IRVg皿编码序列的N一末端上,并受IRV 9111启动子控制。由含单体和二聚体FMDV抗原决定基序列插入的杂种病毒分别选择编码IRVg…     

头鲂胰岛素样生长因子-Ⅰ基因克隆与分析

胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)是一单链多肽。在脊椎动物中，IGF-Ⅰ通过介导生长激素达到促进生长的作用。为研究鲤科鱼类IGF-Ⅰ的结构功能及在水产养殖中的潜在应用前景，采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法，从团头鲂(Megalobrama amblycephala)肝脏的总RNA中扩增出IGF-ⅠCdna。测定了该基因序列，推导其编码的蛋白质序列。克隆 的Cdna序列编码包括信号肽和B、C、A、D、E 6个区域的161个氨基酸。E区域分析结果表明所克隆的团头鲂IGF-Ⅰ序列属于IGF-ⅠEa-2亚型。     

侧耳木霉T2-1植酸酶基因的序列分析及蛋白结构预测

利用GenBank发表的植酸酶A编码序列设计的引物,通过PCR的方法对侧耳木霉(Trichoderma pleuroticola)T2-1基因组DNA进行扩增,获得了一条长约1.7 kb的特异性DNA片段.序列测定结果表明,该DNA片段含有植酸酶编码基因的完整序列和3段内舍子序列,其中植酸酶基因全长1 443 bp,编码480个氨基酸,5'端有一段编码23个氨基酸的信号肤序列,其余的457个氨基酸残基为成熟植酸酶的氨基酸序列.对该基因编码的氨基酸序列进行三级结构预测,发现它为磷酸单酯酶.已将侧耳木霉T2-1植酸酶基因序列在GenBank中注册(登录号:GQ325590).这是目前中国在GenBank注册的第一个完整的木霉植酸酶编码基因.     

番茄1-氨基环丙烷羧酸(ACC)合成酶基因的反义RNA-核酶嵌合DNA序列的构建

根据番茄ACC合成酶基因（LE—ACC2）DNA序列,以番茄(LycopersiconesculentumMill)果实的总DNA为模板,利用PCR技术扩增得到预期大小的该基因编码区内部分DNA序列,插入到质粒载体pGEM—3zf(＋)的BamHⅠ和HindⅢ位点之间后转化E．coliDH—5α,可选出重组子pRE,经酶切,PCR及DNA序列分析证明克隆成功;将pRE上的目的DNA序列以反义方式构建到我室已合成并克隆的含核酶DNA序列的重组质粒pRⅠ的BamHⅠ和HindⅢ之间,构成含有反义RNA-核酶嵌合DNA序列的重组质粒pREⅠ,经酶切及序列分析,结果与预期一致.     

编码人生长激素的DNA序列在大肠杆菌中的直接表达

编码人生长激素的DNA通过用化学合成的DNA与酶促制备的CDNA连接而建立。这一“杂化物”基因在乳糖操纵子控制下在大肠杆菌中表达,产生的肽在大小和免疫学性质上具有成熟的人的生长激素的特性。 人生长激素(HGH)是垂体前叶合成的具有191个氨基酸的蛋白质。垂体机能减退 的侏儒因HGH缺陷而身材矮小,在儿童期使用人生长激素可以治疗这一缺陷症。另外,HGH在治疗各种创伤疾病如骨折、皮肤烧伤、溃疡等被证实是有效的。由于生长激素具种属专一性,人的尸体成为HGH的唯一来源。 生长激素mRNA的初级翻译产物是一个蛋白前体,含有与生长激素N末端相接的一段信号肽。这种信号或“前”序列是分泌蛋白的特征。对于大鼠生长激素(RGH),已经鉴定了由RGH mRNA制备的CDNA序列中前序列的26个氨基酸残基。由人生长激素cDNA序列获得的信息,我们设计并建立了一个细菌质粒,它可以在微生物细胞中指导合成大量的成熟HGH。     

大鼠肝含5~1端氨甲酰磷酸合成酶Ⅰ基因的克隆

为研究氨甲酰磷酸合成酶Ⅰ(CPS Ⅰ)基因表达的调控,我们根据CPS Ⅰ编码1—10氨基酸的mR NA顺序,合成一个30碱基的寡聚核苷酸。以它作为探针从大鼠肝基因库中筛选出一个阳性克隆,λ10。对其中4.5kb插入片断的内切酶谱及部分核苷酸序列测定证明它确含5′上游CPS Ⅰ基因DNA序列。     

普氏野马GH基因的克隆及生物信息学分析

普氏野马(Equus przewalskii)属国家Ⅰ级保护动物,是现存的马中唯一的野生亚种。生长激素(Growth Hormone, GH)是大脑垂体前叶分泌的一种多肽类激素,对动物个体的生长、发育的影响极其明显。为了更好的保护普氏野马,提高其野外生存与繁殖能力,本研究利用PCR技术首次获得了普氏野马GH基因,并利用生物信息学方法对其编码的蛋白质结构和功能进行分析和预测,旨在探明普氏野马生长激素(Growth Hormone, GH)基因的结构特点以及其编码蛋白质的结构与功能。结果显示,普氏野马GH基因所在基因组DNA全长为1 577 bp,经BLAST比对后,发现普氏野马与家马(GenBank:EU939446.1)GH基因序列相似性高达99.68%,属于同源序列。该基因编码蛋白质的氨基酸数量为152个,分子量为17 638.54 Da,理论等电点为9.01,带负电荷的残基总数(Asp+Glu)为19个,正电荷残基总数(Arg+Lys)为23个,分子式为C₇₉0H₁₂₇₄N₂₁₆O₂₂₆S     

激素和活性多肽

<正> 854997 编码人胰岛素原的 DNA 合成[英]/Ovchinnikov,Y.A.…//Gene.-1984,31(1～3).-65～78[译自 DBA,1985,4(4),85-01704]使用化学-酶方法合成271bp 和286bp 的双链 DNA,每个 DNA 含有为胰岛素原编码     

番茄1―氨基环丙烷羧酸(ACC)合成酶基因的反义RNA―核酶嵌合DNA序列的构建 The Construction of Antisense RNA-Ribozyme Chimeric DNA Sequence of Tomato ACC Synthase Gene

根据番茄ACC合成酶基因(LE-ACC2)DNA序列,以番茄(Lycopersicon esculentumMill)果实的总DNA为模板,利用PCR技术扩增得到预期大小的该基因编码区内部分DNA序列,插入到质粒载体pGEM-3zf(+)的BamHⅠ和HindⅢ位点之间后转化E. coliDH-5α,可选出重组子pRE,经酶切,PCR及DNA序列分析证明克隆成功;将pRE上的目的DNA序列以反义方式构建到我室已合成并克隆的含核酶DNA序列的重组质粒pRI的BamHⅠ和HindⅢ之间,构成含有反义RNA-核酶嵌合DNA序列的重组质粒pREI,经酶切及序列分析,结果与预期一致。 Abstract　According DNA sequence of Tomato ACC synthase gene(LE-ACC2)。5,Y#〗　Abstract　According DNA sequence of Tomato ACC synthase gene(LE-ACC2), and using total DNA of fruit of tomato (Lycopersicon esculentumMill) as template, the expected partial DNA Sequence in coding region of gene was obtainted by PCR amplification and inserted imto pGEM-3zf(+) digested with BamHⅠ and HindⅢ, then we transformcd the system into DH5-α and selected the postive recombinant (pRE). The digestion of enzyme, PCR amplification and sequence of DNA analysis demonstrated that the cloning was successiful; By the antisense way, the DNA sequence from pRE was combined to pRI between BamHⅠand HindⅢ to consturct pREI containing antisense RNA-Ribozyme chimeric DNA sequence (pRI was constructed in our Lab and contains Ribozyme DNA sequence). The restriction map of recombinants and sequence analysis were indentical to the expected results.     

含有融合标记基因和LoxP/FRT位点的植物表达载体构建及应用

本研究利用化学合成法合成了包含pCAMBIA0390左右边界T-DNA和LoxP/FRT (LF)位点的DNA片段Ⅰ,利用SacⅡ和SphⅠ酶切位点,去除了pCAMBIA0390左右边界T-DNA和多克隆位点之间的序列,然后连接DNA片段Ⅰ和载体片段,构建了植物表达载体pGM323-LF-enTP.随后,再合成含有适合在单子叶植物中表达的由玉米Ubi-1启动子驱动的融合标记基因(Bar::gus)和水稻actin-1启动子驱动的Bt抗虫蛋白基因(Cry1Ab)表达元件的DNA片段Ⅳ,在pGM323-LF-enTP的基础上,利用SalⅠ和PstⅠ位点构建了同时含有LF位点、Bar::gus以及Cry1Ab基因表达元件的表达载体pGM626-LF-ABt.利用含有pGM626-LF-ABt的农杆菌遗传转化烟草和玉米,以草丁膦作为抗性筛选剂,非转化细胞得到了有效抑制,快速获得了转基因植株,利用GUS组织化学检测和RT-PCR分析了转基因植株中标记基因的表达,结果表明pGM626-LF-ABt可以用于农杆菌介导的单、双子叶植物遗传转化.本研究为培育安全抗虫转基因植物奠定了基础.     

半胱胺盐酸盐和LHRH-A对黄鳍鲷IGF-Ⅰ基因表达和生长的影响

本文以黄鳍鲷 (Sparuslatus)为研究对象 ,利用GeneRaceTM 技术 ,从其肝组织中克隆出类胰岛素生长因子 (IGF Ⅰ )cDNA ,并应用半定量RT PCR方法研究了半胱胺盐酸盐 (Cysteaminehydrochloride)和LHRH A对其肝组织IGF Ⅰ基因表达的影响。黄鳍鲷IGF ⅠcDNA全长为 84 0bp ,编码 185aa多肽 ;序列分析表明 ,黄鳍鲷IGF Ⅰ基因编码的氨基酸序列与金鱼的同源性为 75 8% ,与牙鲆的同源性为 86 5 % ,与同属鲷科的黑鲷同源性高达 10 0 % ,证明鱼类类胰岛素生长因子是非常保守的 ,E区域分析结果表明黄鳍鲷IGF Ⅰ属Ea 4型。在饲料中投喂CSH、LHRH A等添加剂 ,实验组黄鳍鲷鱼种的相对生长率、垂体GH含量、肝脏IGF ⅠmRNA水平均显著高于对照组。以上结果提示 :CSH、LHRH A能促进黄鳍鲷生长激素的合成和IGF Ⅰ基因的表达 ,从而促进鱼种的生长     

克氏光唇鱼线粒体基因组测定及光唇鱼属的系统发育分析

根据侧条光唇鱼(Acrossocheilus parallens)线粒体基因(mt DNA)序列设计引物,采用引物步移和PCR扩增产物测序,获得了克氏光唇鱼(A.kreyenbergii)的mt DNA全序列。结构分析表明,克氏光唇鱼mt DNA为首尾闭合的环状基因,全长16 596 bp,编码37个基因,包括13个蛋白编码基因、22个t RNA基因、2个r RNA基因和两段非编码区(D-loop和轻链复制起点OL),碱基组成具有明显的A+T偏好和反G偏倚现象。13个蛋白编码基因中,除COⅠ的起始密码子是GTG,其余基因的起始密码子均为ATG;终止密码子包括完全的终止密码子TAA(38.46%)和TAG(7.69%),不完全的终止密码子TA(15.38%)和T(38.46%)。在D-loop区的811~837 bp区间发现了一段"TA"短串联重复序列。从蛋白编码基因所包含的信息量、变异位点和变异率看,ND5、ND4、COⅠ和ND2最适合作为光唇鱼属种间系统发育分析的分子标记。采用贝叶斯法利用13个蛋白编码基因所构建的系统发育树显示,光唇鱼属和白甲鱼属(Onychostoma)的24种鱼类各自没有聚为单系群,相互间不能明确区分。     

每期10题

八.脱皮激素B.性激素 C.生长激素D.甲状腺激素6.下列食物链中哪一组最稳定?( 1.用噬菌体去感染内含足够量3H的细菌,待细菌解体后,3H应()。 A.随细菌解体而消失。 B.发现于新噬菌体的外壳和DNA中 c.仅发现子新噬菌体的DNA中 D.仅发现于新噬菌体的外壳中 2.有一肤结构如下: CH3 CHZCHZC00H CHZSH CH3 }{11 HZN-CH~一毛公一NH吮一{H一一毛仓一NH一代:H一一仁O卜~NH一CH一(OOH (1)该肤含一个肤键,共有_种氨基酸。 (2)该肚水解时需要_个水分子。 (3)合成该肤链时,需要_个遗传密码,与该肤相应的荃因(双链DNA)上至少有一个碱…     

鲑鱼生长激素基因分泌型表达质粒的构建

生长激素(GH)是动物垂体前叶分泌的一种多肽类激素.应用分子重组及PCR等技术,构建了一种鲑鱼生长激素基因分泌型表达质粒pOsGH153,使编码鲑鱼生长激素成熟肽的序列克隆在大肠杆菌分泌型表达载体PIN-Ⅲ-ompA内,直接位于编码大肠杆菌外膜蛋白A信号肽序列的下游,在Lpp-Lac杂合启动子控制下,经IPTG诱导,分子量约23 000的鲑鱼生长激素在大肠杆菌中获得高效表达,该产物具有天然鲑鱼生长激素的免疫活性,直接分泌到细胞周质,而信号肽被自动剪除.