一株耐酸野生葛藤(Pueraria lobata)根瘤菌的筛选与耐酸机理初步研究

从重庆市北碚区缙云山酸性黄壤(pH4.6)上生长的葛藤根瘤中分离到一株耐酸葛藤根瘤菌PR389,能在pH4.3的YMA培养基上正常生长,而一般根瘤菌最适生长pH值为6.5~7.5,说明PR389为一株耐酸葛藤根瘤菌。通过质子通量试验发现,与不耐酸的菌株相比,PR389的细胞膜能阻止过量的H 进入细胞,表明PR389具有某种能力使之在低酸性环境下不受伤害。在耐酸性试验中,PR389在加氯霉素的强酸性(pH3.8)YMA培养液中表现出来的耐酸性被氯霉素抑制,推测胞内特异蛋白质的诱导合成是PR389具有耐酸性的原因。     

一株耐酸野生葛藤（Pueraria lobata）根瘤菌的筛选与耐酸机理初步研究

从重庆市北碚区缙云山酸性黄壤 （pH4.6）上生长的葛藤根瘤中分离到一株耐酸葛藤根瘤菌PR389,能在pH43的YMA培养基上正常生长,而一般根瘤菌最适生长pH值为6.5～7.5,说明PR389为一株耐酸葛藤根瘤菌。通过质子通量试验发现,与不耐酸的菌株相比,PR389的细胞膜能阻止过量的H+进入细胞,表明PR389具有某种能力使之在低酸性环境下不受伤害。在耐酸性试验中,PR389在加氯霉素的强酸性（pH3.8）YMA培养液中表现出来的耐酸性被氯霉素抑制,推测胞内特异蛋白质的诱导合成是PR389具有耐酸性的原因。     

三种根瘤菌诱变菌株的形态特征及其与抗性的关系

用紫外线照射四季豆根瘤菌(R.Phaseoli)、豌豆根瘤菌(R.Leguminosarm)和花生根瘤菌(R.Peanut),然后观察其形态特征,并将不同形态特征菌落的菌株接种于不同pH值YEM培养基和不同NaCl浓度的YEM培养基上培养。结果表明,突变株的抗酸碱性和抗盐性随根瘤菌不同而异,并与其菌落形态有关。     

农业其它

862748含有本地根瘤菌的土壤中接种一个豌豆根瘤菌株及其竟争的研究〔英〕/Mea-de,J.…了Appl.Environ.Mierobiol一1955,49(4)一599~903〔译自CBA,1985,(8),.2739〕在田间分隔的两处,对推广种植的豌豆进行接种试验,研究了一个豌豆根瘤菌     

pH对紫膜表面电位的影响

用荧光标记物1,8-AMS与紫膜结合,测量了能化态和非能化态下紫膜表面电位随介质pH的变化.在pH5.5以下,紫膜表面电位随pH的降低而下降,但囊泡中的紫膜表面电位变化幅度较大;在pH5.5以上,处于非能化态的紫膜(无论是紫膜碎片还是处于囊泡中)的表面电位都没有明显变化,处于能化态时,紫膜碎片的表面电位在pH9.2出现一个峰.     

小麦根H^＋—ATPase与脂质体的重组方法研究

液泡是植物细胞中的大型细胞器,除了维持细胞的渗透压和贮存代谢的中间产物外,其内部还含有多种水解酶、pH值偏酸且具有类似溶酶体的功能。液泡膜ATPase是一种新类型的质子泵。由质子泵作用形成的跨液泡膜质子电化学梯度和质子驱动力为各种溶质(如阳、阴离子、氨基酸和糖类等)分子的主动跨膜转运提供了动力,使液泡成为植物细胞内离子平衡的调节器。液泡膜ATPase和线粒体膜ATPase都具有泵质子的功能,而且都受阴离子激活,其生化性质有许多相似     

研究有机缓冲剂用于耐酸根瘤菌选择

五种缓冲剂对根瘤菌生长的酵母汁—阿拉伯糖—半乳糖培养基(YAG)低pH的缓冲作用进行了测定。30.7mM2[N-吗啉]乙醇磺酸(MES)具有维持pH(5.5或4.9)基本不变的缓冲能力,且根瘤菌数从10~(3-4)增加到10~9/ml.适用于耐酸的花生、大翼豆快生型根瘤菌选择。30mM的其它缓冲剂与慢生型根瘤菌的耐酸能力测定结果指出:苯甲酸(BA)pH6.0抑制根瘤菌生长;琥珀酸(SA)、柠檬酸(CA)pH变化较大;邻苯二甲酸氢钾(PHP)虽然在pH5.52条件下具有强的缓冲能力,且能区分菌株的生长差异,但在更低pH(4.5以下)条件下,则使根瘤菌生长受到抑制。     

环境因子对根瘤菌吸氢活性表达的影响

自生条件下,测定准噶尔盆地南部的68株根瘤菌吸氢活力,获得一株Hup~+的冬箭筈豌豆根瘤菌C_(48)。经与紫云英根瘤菌株109及89比较,两者氢酶表达的最适pH相同;温度分别以20或30℃为宜;Ni~(2+)显著促进吸氢表达,但C_(48)还受Co~(2+ )、Mg~(2+)、Cu~(2+)的促进;紫云英根瘤菌的氨酶表达受碳水化合物抑制较冬箭筈豌豆根瘤菌明显。此外,自生条件下生长的Hup—菌株,经与宿主共生后,Hup~+的百分率大为增加。     

盐胁迫下根瘤共生豌豆植株对外源钙的生理响应

为明确外源钙对根瘤共生豌豆植株耐盐性的影响机制,本试验采用盆栽方式研究了NaCl (170 mmol·L^-1)胁迫下,外源施加CaCl₂(0、5、15 mmol·L^-1)对接种根瘤菌(菌株15657、15735、Ca66)的两种耐盐性不同品种豌豆(定豌8号、陇豌6号)植株生理指标的影响。结果表明: 接种根瘤菌、施加CaCl₂或接种根瘤菌后施加CaCl₂均提高了豌豆植株的生物量、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化物酶(POD)活性、脯氨酸(Pro)和可溶性糖(SS)含量,降低了丙二醛(MDA)含量;接种根瘤菌后施加15 mmol·L^-1 CaCl₂显著提高了豌豆植株的生物量、POD活性和Pro含量。接种与豌豆植株匹配性较好的15735菌株并施加CaCl₂对豌豆在盐胁迫下各指标的影响相对较小,接种匹配性差的菌株(156567、Ca66)并施加CaCl₂影响较大。经隶属函数综合分析表明,接种根瘤菌后施加CaCl₂的豌豆植株表现出较强的耐盐性,接种15735菌后施加15 mmol·L^-1 CaCl₂的定豌8号隶属函数值为0.814,耐盐性最强。本研究表明,相比接种根瘤菌和施加CaCl₂处理,接种根瘤菌后施加CaCl₂可更有效地提高盐胁迫下豌豆植株的抗氧化酶活性,增强渗透调节能力,降低膜脂过氧化伤害,从而提高豌豆植株的耐盐性。     

胡杨液泡膜微囊H^＋—ATPase质子泵活性研究

将悬浮培养的胡杨 (PopuluseuphraticaOliv .)细胞捣碎后 ,通过差速离心和不连续蔗糖密度梯度离心获得富集液泡膜的膜微囊。通过连续监测吖啶橙的荧光淬灭研究膜微囊上H _ATPase的质子转运特性。结果表明 ,质子转运依赖于ATP ,其表观米氏常数Km 值为 0 .6 5mmol/L。质子泵活性受pH和温度的影响较大。测定液pH值为7.5时 ,质子泵的活性最高 (测定温度选定为 2 2℃ )。一些二价阳离子可启动H _ATPase的质子转运 ,其中Mg2 的作用远高于Fe2 。在实验条件下 ,Ca2 、Cu2 和Zn2 均不能启动H _ATPase的质子转运。质子跨膜转运还可被一价阴离子激活 ,激活作用的顺序为 :Cl->Br->I->F-。质子泵活性受NEM(乙基马来酰亚胺 )、DCCD (二环己基碳二亚胺 )、NO-3 和BafilomycinA1的强烈抑制 ,但对Na3VO4 和NaN3 不敏感。这些性质说明胡杨液泡膜微囊上的H _ATPase属于囊泡型的ATPase。     

质粒PRP1: : Tn501在根瘤菌、根癌农杆菌及大肠杆菌之间的转移

自1971年Beringer等G3]第一次将质粒 pRP4, pR68.45引入根瘤菌中进行研究以后， Beringer等[41又利用质粒pRP4等诱动豌豆根 瘤菌的染色体基因转移到营养缺陷型受体中； Pilacinski和Schmidt17，报道了P1组质粒在 4株大豆根瘤菌之间的转移情况，其中有3个 菌株可以转移：宁林夫等〔13研究了质粒pRPI:. Tn501, pRPI等由紫云英根瘤菌Nod{菌株转 移到Nod一变异株中，并诱动了结瘤基因的转 移。本文介绍质粒pRP1: : Tn501在不同种的 根瘤菌之间、根瘤菌与根癌农杆菌之间，以及它 们与大肠杆菌之间的转移和表达情况。     

固氮作用

881112固氮兰藻突变株对氨基酸的光合成[英〕/Ker})y,N.W.…了Appl.Mierobiol.B ioteChnol一1987,25(6)一5寸7一552〔译自CBA,1987,(6),2626〕 已分离到对6一氟色氨酸或乙硫氨酸具抗性的固氮兰藻多变鱼腥藻(A淞6ae邢姐r‘a-bilis)突变株。这种藻的许多株系在无6-氟色氨酸或乙硫氨酸时,能将氨基酸释放人培养基中。突变株的固氮酶活性高于其亲本。_将突变株周定于藻酸钙上,可持续光形成氨基酸。(戴顺志)88飞飞1巴花生根瘤菌NC92菌株共生突变株的分离和鉴定:结瘤与固氮寄主专一性缺失、突变株〔英〕Wilson,K.J.…了J.B“cte-r 1 01一工…     

生物固氮

940737 豌豆根瘤菌biovar phaseoli的Sym质粒pRP2J1和2个以上其它位点具有抗致病性细菌噬菌体RL38侵染的抗性[英]/Jun, G.…∥FEMS Microbiol. Lett-. 1993, 111(2-3). -321～326[译自DBA, 1993, 12(19), 93-11081] 致病性根瘤菌噬菌体RL38不使豌豆根瘤菌bv.phaseoli菌株8002形成噬菌斑,但高效作用于上述菌株的衍生菌株8401,8401缺少共生质粒pRP 2JI。在pRP 2JI中含大量缺失(删除了许多结瘤(nod)和固氮(if)基因)的其它菌株保留了对RL38的抗性,表明赋予噬菌体抗性的基因位于质粒的其它位置。虽然上述菌的野生型菌株不能对     

生物固氮

922230通过诱变、基因工程和配方改进根瘤菌接种物〔英〕/Paau,A.5.…了Bioteehnol.Ady一1901,。(2)一173一184〔译自DBA,1991,10(23),91一13543) 就以下方面综述了用于固氮的根瘤菌(Rh玄:-。从。m Spp.)菌株的改良:通过诱变改良菌株;根瘤菌菌株的遗传工程;固氮nif和fix基因,结瘤nod基因;底物传递和利用;竞争性与结瘤,其它有价值性状;和配方。导入另外的ni fA序列的根瘤菌已用于提高首蓓产量。鉴互定的nif和fix启动子可使克隆的外源基因在共生条件下在固氮菌中选择性表达,例如苏云金芽抱杆菌(Ba叭U:s林,,‘。夕艺eos‘。var.te:eb:‘o…     

异叶银合欢根瘤菌的分离和特性

从异叶银合欢K(164)和K(794)的根瘤中各分离到一株根瘤菌,并且,对K164根瘤菌的形态特征和生理生化特性进行了研究。K(164)根瘤菌在平板上培养2天,菌落呈圆形,灰白色,直径约1．2mm;革兰氏染色呈阴性,无芽孢,有美膜,两根极生鞭毛;杆菌大小为2．2×0．89μm,增代时间为1．69小时,属快生型;最适生长温度为30℃,在39℃持续2天不能存活,在20℃以下不能生长;不耐盐,较耐酸,在pH4.5～6．6范围内均能生长,但不耐碱;对庆大霉素和青霉素敏感;对供试的10种糖都能利用,不液化明胶,不利用淀粉,B．T．B试验未变色,不能进行3-酮基乳糖反应,硝酸盐反应呈阳性,石蕊牛奶试验能胨化、还原、产碱,牛肉膏蛋白胨培养生长差,能利用柠檬酸盐;在自生条件下具有吸H2酶活性;回接后结瘤率达100％,根瘤具有固氮酶和吸H2酶活性。     

温度对紫膜bR结构的影响

温度升高使天然紫膜在可见差分吸收光谱中650nm处出现一吸收峰,这意味着紫膜去离子兰膜的形成,而这在脱氧胆酸处理后的紫膜中并未出现.天然紫膜与脱脂紫膜在630nm处的吸收与温度间的关系进一步表明:只有天然紫膜在温度大于68℃才有膜结合离子的释放,释放的离子结合于移去的膜脂之上.紫膜结合离子的释放改变了天然紫膜中bR的构象.热致离子的释放还受介质pH值及介质中离子的影响.pH5.03时,热致离子释放温度提前至温度46℃,而pH7.00,10mM MgCl_2及pH9.00时都没有观察到紫膜离子释放.温度对紫膜在不同pH值时表面电位影响的不一致性进一步表明这是由于膜表面电荷参与的结果.     

豌豆根瘤菌共生基因pJB5JI与华癸中生根瘤菌7653R共生质粒的相互关系

华癸中生根瘤菌(Mesorhizobium huakuii)7653R是分离自我国南方水稻田的一株根瘤菌,含有2个内源质粒:p7653Ra和p7653Rb,其中7653Rb是共生质粒.通过Tn5-sacB的插入方法来消除质粒,获得7653Rb消除的突变株7653RD.将豌豆根瘤菌T83K3的共生质粒pJB5JI导入7653R和7653RD中,盆栽结果表明含有pJB5JI的转移接合子7653R-197的竞争结瘤能力和共生固氮能力均高于7653R.pJB5JI不能恢复7653RD在紫云英上的结瘤能力.含有pJB5JI的7653RD可以在豌豆上结无效瘤,表明pJB5JI可以在7653R的染色体背景下表达其功能.对转移接合子中的质粒稳定性进行检测,结果表明pJB5JI在人工传代的情况下可以稳定存在,但经过共生之后发生了遗传分离,对转移接合子和出发菌株及分离菌株进行kan基因的PCR扩增,除了受体菌外其他菌株都可得到PCR产物,由此推测,pJB5JI可能部分或全部整合到了受体菌的染色体基因组中.     

镁、钙离子对组装于人工膜上CF_0-CF_1质子传导的影响

在电压籍位下,研究Mg2 、Ca2 对重组于平板脂双层上CF0－CF1质子传导的影响,表明：（1）跨膜质子梯度为0时（△pH=0）,在30～150mV范围内,Ca2 引起的正电流比在无金属离子溶液中有一定幅度的增加。在50mV以上,Mg2 比Ca2 有更大的促进正向电流的作用;（2）当△pH=3时,Mg2 比Ca2 更有显著增加正向膜电流的作用,电压在0mV时就已显示出来;（3）Ca2 不影响Mg2 促进正向电流的作用;（4）当△pH=3时,Ca2 ”溶液中DTT促进正向电流的作用要在30mV以上才能显示,并随电位的增加而增大。而Mg2 溶液中,△pH=3,电压为0mV时DTT促进正向电流的作用就能显示出来,且在0至150mV范围内促进的幅度是恒定的。这就说明Mg2 不仅具有调节CF0－CF1质子传导的作用,而且也有助于膜结合CF0-CF1的变构,引起埋于CF0-CF1内部的γ亚单位二硫键暴露出来,促使二硫键为DTT还原,从而增加质子传导量。当CA2 、Mg2 存时,Ca2 不影响Mg2 的作用效应,它仅因其静电屏蔽效应稳定H ．-ATP酶的构象,从而促进对质子的传导。     

环境保护上的应用

将生丝微菌菌种NRRL一B一12569/70/71/72/73及其突变株培养在pH4一7.5、温度20一40℃的有(或无)N源的条件下,能降解含甲基基团化合物,故可用来净化水溶液。(张慧君)86121了用微生物将有异味的有机废物降解为无害物质〔专,英〕/Colaruotolo,J.F.…了US Patent US     

酵母细胞外蛋白质和多肽的产生及分泌

白地霉(Geotrichum candidum)AS 2．198的突变株NX47和橙黄红酵母(Rhodotoru-ta aurantiacam)AS 2．280蛋白质的合成与分泌和多肽的合成均在培养前期与细胞生长同步进行。合成的蛋白质全部或大部分贮存在胞周间,并随即通过细胞壁从胞周间分泌到细胞外,培养基的组成和培养时间对蛋白质的组份无显著的影响。合成的多肽全部贮存在细胞内。突变株NX47缓慢地分泌蛋白质,快速分泌多肽。其分泌能力取决于分为三层的细胞壁结构。多肽在培养前期不分泌,直到进入对数生长后期,才通过原生质膜和细胞壁由细胞内迅速地分泌到细胞外。分泌时间比其合成滞后一天以上。菌株AS 2．280的细胞壁没有三层结构,却能快速分泌蛋白质,但不分泌多肽。