夕阳西下 满目霞光——怀念敬爱的刘斌教授

<正>刘斌教授是我国人类体外受精技术研究的开拓者,在国内率先成功建立人类体外受精技术（1985）,是我国大陆第一例体外受精-胚胎移植婴儿（俗称“试管婴儿”）和输卵管配子移植婴儿技术的关键奠基人。早在1984年,我还在福建医学院组织学与胚胎学教研室当助教的时候,就听外出开会回来的老教师说,北医（北京医学院,即现在北京大学医学部的简称）组胚（组织学与胚胎学的简称）的刘斌老师从欧洲留学回来,正在研究引进试管婴儿技术。     

“试管婴儿”研究概况

本文扼要地介绍了“试管婴儿”技术的主要工作:刺激及诱导排卵、监测排卵、取卵和找卵、体外授精和胚胎移植.还分析了影响“试管婴儿”效果的一些因素以及我国“试管婴儿”研究的情况和需要解决的问题.     

人类的体外受精和胚胎移植

人类的体外受精和胚胎移植是一个复杂的过程，关键的步骤是人工诱发超排卵、采集孵细胞、体外受精与体外培养以及胚胎移植。人类的体外受精和胚胎移植技术在研究人类生殖生理，治疗不孕症，计划生育和优生等方面具有很高的价值。     

非人灵长类的体外受精和胚胎移植

非人灵长类的体外受精和胚胎移植是了解人类生殖机制,如卵的成熟调控,受精卵的成熟与分化,胚胎着床,控制某些遗传疾病以及保护珍稀灵长类和提高实验灵长类质量的有效途径。本文从非人灵长类卵的获取(包括超数排卵,非激素刺激动物取卵),精子处理(精液采集,冻存和精子获能),体外受精和胚胎移植、胚胎的冻存等方面介绍了有关研究概况和发展动态。     

试管婴儿与“优生学”的实施

1987年,湖南医科大学为一对10年不孕的夫妇作了体外受精和胚胎移植.为一结扎多年的女工移植了供胚,1988年诞生了两例试管婴儿,目前试管婴儿生长良好.专家们认为,这一科研成果为计划生育和后代优生提供了技术保证,为生殖工程与遗传工程结合防治人类遗传病的研究打下了良好的基础.透过这两例试管婴儿的诞生,也使人们看到了提倡和实施“优生学”的前景.     

4℃保存的小鼠屠体卵巢GV卵的发育能力

为了探明雌性动物死亡后GV期卵的可利用性,本研究将ICR系雌性小鼠处死,尸体在4～6℃下分别保存16h、24h和48h,取其卵巢GV期卵,体外成熟后,应用常规法进行体外受精或透明带切割法体外受精,获得2细胞期胚,通过体外培养或胚胎移植观察其发育能力。结果显示,4～6℃下保存16h和24h处理组的体外受精率(分别为31%、33%和21%、24%)与来自新鲜的带有颗粒细胞卵的体外受精率(33%)相比无显著差异。与其相比,保存48h处理组的GV卵已丧失发育能力。此外,体外受精中获得的2细胞胚经体外培养,16h处理组和24h处理组的囊胚率(60%、61%和72%、83%)与新鲜GV期卵处理组的囊胚率(72%)相比差异不显著。获得的2细胞胚经胚胎移植可得到正常幼鼠。上述结果表明,如果雌性小鼠死亡后立即在冷藏温度下(4～6℃)保存,其体内的GV卵在24h以内仍保持发育能力。     

室温下保存的小鼠屠体卵巢GV卵的发育能力

将ICR系雌性小鼠处死并在10℃、15℃、20℃和25℃下依次保存8、14、24和48 h后,采集其体内的卵巢GV期卵,采用常规方法进行体外成熟和体外受精,获得的2细胞期胚经体外培养或胚胎移植观察其发育能力.其结果,在10℃下保存24 h、15℃下保存14 h、20℃下保存8h和25℃下保存4 h后,其体内附有卵丘细胞的GV卵的体外成熟-体外受精后的2细胞率分别为14%、9%、10%和10%,随着保存温度的提高和保存时间的延长,带有颗粒细胞GV期卵的比率明显降低,同时其GV期卵经体外成熟及体外受精后的2细胞率明显降低.在20℃下保存24 h和25℃下保存14 h时,难以获得形态正常的GV期卵;体外受精获得的2细胞期胚经体外培养,总体上有64%的胚胎发育至扩张囊胚,未见有保存温度和保存时间的显著影响,且利用在15℃保存8 h后的GV卵获得2细胞期胚的移植获得正常新生小鼠.上述结果表明,雌性动物室温条件下死亡后,若能短时间及时采集其体内GV期卵并体外成熟、体外受精,体外培养及胚胎移植技术,就有可能获得新生后代.     

体外受精-胚胎移植术后相先兆流产患者焦虑情绪护理研究进展

本文综述了体外受精-胚胎移植术后先兆流产患者焦虑情绪产生的原因和影响,并总结了国内外对体外受精-胚胎移植术后先兆流产患者焦虑情绪的心理干预方法,结合心理和生理的描述,为临床体外受精-胚胎移植术后先兆流产患者焦虑心理的护理提供了参考依据。     

关于“试管婴儿”的几个重要概念的辨析

通过对“试管婴儿”技术的背景做了简略介绍,针对“试管婴儿”与试管、体内受精与体外受精、人工授精与人工受精、“试管婴儿”与“克隆人”、“试管婴儿与“设计试管婴儿”几个关于“试管婴儿”的重要概念做了详细的辨析,以供中学生物学教学参考.     

不同卵龄小鼠卵母细胞激活和受精的比较研究(英文)

本实验比较了不同卵龄的小鼠卵母细胞受酒精人工刺激后的激活率和体外受精率,以探讨卵母细胞激活和受精的机制。向ＮＩＨ雌鼠腹腔注射孕马血清促性腺激素（ＰＭＳＧ）７．５单位,４８小时后注射人绒毛膜促性激素（ＨＣＧ）７．５单位,于不同时间杀小鼠,取卵母细胞与卵丘细胞的复合体（ＯＣＣ）。从注射ＨＣＧ后到取ＯＣＣ的时间视为卵母细胞的卵龄。将ＯＣＣ置于含８％酒精的Ｍ２中７分钟,再在Ｍ１６中培养５小时后,用０．３ｍｇ／ｍＬ的透明质酸酶去卵丘细胞。卵母细胞形成原核或速即卵裂为激活的标志。将ＯＣＣ加入已获能的精子悬液中,５小时后将从卵丘细胞中释放出来的卵母细胞转移到Ｍ１６中,次日发生卵裂为卵母细胞体外受精和激活的标志。小鼠卵母细胞卵龄为２０ｈ,其激活率为８１．６％,速即卵裂率为４８．０％;而卵龄进一步增加到２４ｈ,激活率和卵裂率转为下降（Ｔａｂｌｅ１）。而卵母细胞受精子激活和受精则不同,卵龄为１５ｈ,卵母细胞的体外受精率为４５．４％;随着卵龄的进一步增加,体外受精率则下降（Ｔａｂｌｅ２）。Ｆｉｇ．１显示：新排出的卵母细胞容易被精子激活而受精;卵龄较大的卵母细胞较易被酒精的人工刺激而激活。可能是卵母细胞从成熟到老化过程中,细胞的结     

大熊猫体外受精的初报

我们在大熊猫精子体外获能与异种穿卵成功的基础上,又进行了大熊猫体外受精的首次尝试。 大熊猫卵母细胞取自刚死的育龄雌性大熊猫的卵巢,经体外培养16小时后,加入在体外已获能的大熊猫精子,进行体外受精。发现精子头能穿入卵透明带并进卵膜,继续培养19小时后因污染不幸夭亡。这是大熊猫同种体外受精的第一次报道。这一新进展表明,对研究试管大熊猫又跨近了一步。人们将有可能利用这种生物高技术去主动地拯救大熊猫,为珍稀动物物种的繁殖和保存开劈了一条新途     

不同卵龄小鼠卵母细胞激活和受精的比较研究

本实验比较了不同卵龄的小鼠卵母细胞受酒精人工刺激后的激活率和体外受精率,以探索卵母细胞激活和受精的机制。向NIH雌鼠腹腔注射孕马血清促性腺激素（PMSG）7．5单位,48小时后注射人绒毛膜促性激素（HCG）7．5单位,于不同时间杀小鼠,取卵母细胞与卵丘细胞的复合体（OCC）。从注射HCG后到取OCC的时间视为卵母细胞的卵龄。将OCC置于含8％酒精的M2中7分钟,再在16中培养5小时后,用0．3mg/mL的透明质酸酶去卵丘细胞。卵母细胞形成原核或速即卵裂为激活的标志,将OCC加入已获能的精子悬液中,5小时后将从卵丘细胞中释放出来的卵母细胞转移到M16中,将日发生卵裂为卵母细胞体外受精和激活的标志。小鼠卵母细胞卵龄为20h,其激活率为81．6％,速即卵裂率为48．0％;而卵龄进一步增加到24h,激活率和卵裂率转为下降（Table1）。而卵母细胞受精子激活和受精则不同,卵龄为15h ,卵母细胞的体外受精率为45．4％;随着卵龄的进一步增加,体外受精率则下降（Table2)。Fig.1显示：新排出的卵母细胞容易被精子激活而受精;卵龄较大的卵母细胞较易被酒精的人工刺激而激活。可能是卵母细胞从成熟到老化过程中,细胞的结构、功能及对外界刺激的敏感状态都在发生一些规律性的变化,而激活和受精的机制不完全,还不能精对卵龄的要求要严格。     

不同取卵时间对兔ICSI胚胎体外发育的影响

目的探讨不同取卵时间对兔ICSI胚胎体外发育的影响。方法采用Piezo操作系统对实验兔进行辅助体外受精。结果hCG注射后14、16、18h取卵,ICSI后的受精率分别为82.2％、75.9％和0.0％,对受精卵进行体外发育培养,桑椹胚的发育率分别为72.9％、70.0％、0.0％,囊胚的发育率分别为62.2％、53.3％、0.0％。14h和16h之间受精率、桑椹胚率、囊胚率差异不显著（P〉0.05）,但是14h采卵比16h要好;18h和14h、16h之间差异显著（P〈0.05）。结论不同取卵时间影响实验兔的ICSI体外受精率及胚胎的体外发育率,hCG注射后14h取卵最有利于兔ICSI胚胎的发育。     

我国水牛胚胎研究创4项世界第一

由中国农业科学院水牛所研究员黄右军主持的“水牛胚胎体外生产与胚胎移植技术研究”日前通过专家鉴定。据悉 ,该研究成果创 4项世界第一 :世界最大的试管水牛群 (生产 2 2头全部成活 ) ;世界首例完全体外化冻胚试管水牛 ;世界第一例试管水牛双犊 ;世界首列利用先人工授精后胚胎移植生产的不同品种的水牛双犊。其卵母细胞成熟率、受精分裂率和囊胚率分别为71.6%、5 2 .8%和 2 7.2 %。鉴定委员会专家一致认为 ,该研究成果建立的水牛体外受精胚胎生产技术安全、重复性好 ,达到国际领先水平。据了解 ,此项技术的研究成功 ,为开展水牛活体采卵—…     

生殖工程与克隆工程——体外受精技术引发的生殖工程，克隆工程，组织工程的历程

近几年 ,以“多利”羊 (1996 .7)诞生为代表的克隆工程技术和以“胚胎干细胞”(1998.6 )获得为代表的组织工程技术的突破、进展和成果 ,对当今医学生物学前沿学科研究领域产生了强烈冲击和挑战 ,使试管婴儿(1978)和卵胞浆内单精子注射 (1992 )为代表的生殖工程技术应用前景更加广泛 ,引发“人工”制造生命、“人工”制造动物、“人工”制造组织器官的梦想变为可能。1　体外受精技术与生殖工程人工生殖最早可追溯到 1858年德国人 Schenk第1次进行的兔、豚鼠卵细胞的同种体外受精。受精卵移回子宫发育的胚胎移植最早见于 1891年 Heape完成的…     

c-erbB2与小鼠体外受精及作用机理研究

目的和方法：用免疫组织化学的方法观察ErbB2在小鼠睾丸、附睾、卵巢、输卵管、卵母细胞－卵丘细胞复合物及精子细胞上的分布。用不同浓度反义c-erbB2寡脱氧核苷酸（c-erbB2 ASODNs)与精子和卵母细胞－卵丘细胞复合物共孵育,观察其对小鼠体外受精率的影响,并进一步探讨其机制。结果：在附睾的小管上皮细胞的管腔面,卵丘细胞和精子的细胞膜上有ErbB2蛋白分布。c-erbB2 ASODNs呈剂量依赖方式抑制小鼠体外受精率。小鼠体外受精率在空白对照组、低、中、高浓度c-erbB2 ASODNs组、无义tat ODNs组分别为38．3％、19．6％、10．7％、5．0％、33．8％,同时伴有精子细胞上ErbB2免疫组化染色明显下降,中、高c-erbB2 ASODNs浓度组卵丘细胞贴壁生长受抑制。GABA和db cAMP均能增加精子小鼠体外受精率,两者均部分逆转c-erbB2 ASODNs对受精的抑制作用,但对精子细胞上ErbB2免疫组化染色均无明显影响,而Verapamil能抑制小鼠体外受精率,并协同c-erbB2 ASODNs的抑制作用,且使精子细胞膜上ErbB2免疫组化染色明显下降。结论：c-erbB2 ASODNs与受精密切相关,阻断Ca^2 内流后能通过抑制精子的c-erbB2表达,从而抑制小鼠体外受精,而GABA、dbcAMP可能不是通过c-erbB2来影响受精过程。     

小鼠早期胚胎移植技术的研究

哺乳动物胚胎移植技术是实验胚胎学、遗 传学、发育生物学研究中的一项重要技术。在 卵母细胞的体外培养、卵的体外受精及对早期 胚胎进行显微手术等研究中,往往是通过观察 卵在体外培养中的卵裂情况来鉴定实验效果。 但是更理想的方法就是将有发育能力的胚胎移 入受体子宫或输卵管内,以观察胚胎能否继续 发育直至胎儿出生。为此,我们对小鼠早期胚 胎进行了外科、非外科手术移植的研究。     

由诺贝尔生理学奖谈试管婴儿技术

罗伯特·爱德华兹由于在试管婴儿技术领域的贡献荣获2010年度诺贝尔生理学或医学奖。由此回顾了首例试管婴儿诞生的历程,介绍了人工生殖技术发展的几个重要阶段:常规试管婴儿技术、单精子注射技术、胚胎遗传病诊断技术和最新的卵浆置换技术。     

IVF-20培养液用于大鼠体外受精的实验研究

目的探讨人用体外受精液用于实验大鼠体外受精的可行性,为实验大鼠的胚胎保种提供参考。方法选用人体外受精IVF-20培养液作为大鼠精子获能和受精培养液,对SD、Wistar、GK、F344等四种不同品系的实验大鼠进行体外受精;用mR1ECM培养液对体外受精所得胚胎进行体外培养实验。同时,将所得2-细胞胚胎移植给经假孕处理的受体鼠。结果四个品系大鼠体外受精后的卵裂率分别可达83.2%、72.6%、87.8%和71.6%。体外受精卵裂胚能够在体外进一步发育,SD大鼠囊胚发育率为16.7%,与体内受精胚胎在体外培养的囊胚发育率(24.5%)差异不显著。80枚2-细胞胚胎移植给2只受体鼠后均妊娠成功,产下正常仔鼠10只,产仔率12.5%。结论用于人体外受精的IVF-20培养液同样适合于实验大鼠精子的体外获能和受精,可以在多种品系获得较高的卵裂率,所得卵裂胚能够在体外发育到囊胚,并且所得卵裂胚在移植给受体鼠后能够产下正常仔鼠。     

“试管婴儿”技术30年——回顾和展望

1978年第一例试管婴儿诞生以及随后近30多年来该领域不断取得的突破性进展,促进了以体外受精为基础的辅助生殖技术在临床的广泛应用,并取得了很好的疗效。本文将系统回顾近30多年来辅助生殖技术在临床和实验室两方面建立的包括:控制性超排卵、序贯培养、精子胞浆内注射以及植入前遗传学诊断和筛查等主要技术突破,并对医源性多胎、新技术的安全性等目前存在的主要问题及可能的解决方案进行探讨。