与损伤神经细胞共育后小胶质细胞促进骨髓间充质干细胞神经保护功能

采用原代细胞培养法培养骨髓间充质干细胞(BMMSCs),以鼠小胶质细胞瘤细胞(BV2)和鼠嗜铬细胞瘤细胞(PC12)细胞株分别代替小胶质细胞和神经细胞进行传代培养,应用转移筛网进行BV2与正常或损伤PC12的共育后,考察BV2对BMMSCs的神经保护作用的影响。结果发现小胶质细胞(BV2)与损伤PC12共育后,能促进BMMSCs的神经保护作用,后者的上清液能降低受损PC12的凋亡率(35.9±13.5)%,同对照组(95.1±26.6)%相比差异有统计学意义(P<0.05),且BMMSCs上清液中bFGF升高达到(34.0±10.0)pg/ml,同对照组(20.3±7.1)pg/ml相比二者差异有统计学意义(P<0.05)。     

间充质干细胞来源外泌体对脑内小胶质细胞极化和炎症因子释放的影响及机制研究

摘要 目的：探究间充质干细胞外泌体对脑内小胶质细胞极化和炎症因子释放的影响及其机制。方法：收集体外培养的间充质干细胞上清，超高速冷冻离心获取外泌体。采用纳米颗粒系统和透射电子显微镜分别检测外泌体粒径大小、形态结构和功能完整性。通过免疫荧光、ELISA和细胞流式等方式检测LPS刺激下，外泌体对BV2细胞的表型极化和炎症因子释放的影响。采用Western Blot法检测间充质干细胞外泌体对BV2细胞JAK1/STAT3通路活化的影响。结果：（1）间充质干细胞分泌的外泌体粒径大小主要介于40-100 nm，透射电镜显示外泌体形态呈典型膜性"杯盘"状结构；（2）流式结果表明，相比于对照组，LPS组能显著激活M1型小胶质细胞表面标志物CD11b和M2型小胶质细胞表面标志物CD206的表达，而经外泌体处理，CD11b的表达显著被抑制，CD206显著升高。同时ELISA结果证实，相比于LPS组，外泌体组分泌的促炎症因子（IL-1β、IL-6）和NO水平显著降低（P<0.05），抗炎因子（IL-10）显著升高 (P<0.05)；（3）间充质干细胞外泌体显著提高了BV2细胞JAK1/STAT3通路的磷酸化水平。结论：间充质干细胞外泌体通过激活JAK1/STAT3通路有效促进脑内小胶质细胞M1型向M2型极化。     

骨髓间充质干细胞培养液促进STAT3磷酸化诱导Raw264.7细胞向M2型极化

炎症性疾病的发生是当今临床医学攻克的重点。M1型巨噬细胞分泌炎症因子产生炎症,而M2型巨噬细胞分泌抑炎因子抑制炎症的发生。M1型巨噬细胞向M2型极化,则是从炎症状态转变成抑制炎症发生的状态,因此研究巨噬细胞向缓解炎症的M2型极化将有利于炎症性疾病的治疗。本研究利用骨髓间充质干细胞(BMSC)培养液处理已被脂多糖(LPS)诱导呈M1型的Raw264.7巨噬细胞,探究骨髓间充质干细胞培养液(BMSC-CM)对巨噬细胞向M2型极化的影响及其分子机制。提取来源于3周龄C57BL/6鼠的骨髓间充质干细胞;再收集BMSC-CM处理M1型的Raw264.7巨噬细胞;半定量PCR检测M1型标记基因[肿瘤坏死因子α(TNF-α)和诱导型一氧化氮合酶(INOS)]和M2型标记基因[精氨酸酶1(ARG-1)和转化生长因子β1(TGF-β1)]mRNA表达以及白介素10(IL-10)mRNA表达水平;Western蛋白质印迹法检测信号传导及转录激活蛋白3(STAT3)和磷酸化STAT3(p-STAT3)的表达。本研究发现,经过BMSC-CM培养后的M1型的Raw264.7巨噬细胞,其M2型相关指标ARG-1和TGF-β1 mRNA水平明显上升,并且IL-10 mRNA水平和p-STAT3蛋白水平也明显上升。这些结果说明,骨髓间充质干细胞培养液通过IL-10/STAT3信号通路促进STAT3磷酸化,诱导巨噬细胞Raw264.7细胞向M2型极化。     

K562来源的外泌体对骨髓间充质干细胞造血和成骨基因表达的影响

目的 探讨K562细胞来源的外泌体(EXO)对骨髓间充质干细胞(BMMSCs)支持造血和成骨分化相关因子表达的影响.方法 利用超速离心法提取K562细胞培养上清中的EXO并进行鉴定.在体外,诱导BMMSCs的成骨分化,根据是否加入EXO分为3组:BMMSCs+PBS、BMMSCs+EXO(25μg/mL)、BMMSCs...     

脐带间充质干细胞诱导分化为类许旺细胞的实验研究

目的:探讨通过化学诱导的方法,诱导脐带间充质干细胞分化为类许旺细胞,为组织工程神经寻找一种新的种子细胞来源。方法:通过酶消化法,分离获得原代脐带间充质干细胞。体外培养至第3代(P3),以1×103/cm2接种于培养瓶中,待细胞长至亚融合状态,吸弃培养液,加入含β-巯基乙醇的培养液预诱导24 h。然后,加入含有全反式维甲酸的培养液进一步诱导72 h。最后,加入含有胶质细胞生长因子的培养液,作用两周。对诱导后的脐带间充质干细胞用免疫荧光及RT-PCR法,进行形态观察和表型鉴定。结果:经过上述诱导过程,脐带间充质干细胞的形态,由开始时的扁平、片状、多极,类似成纤维细胞状,逐渐变为长梭形,双极或三极,类似许旺细胞。同时,表达许旺细胞特异性标志S-100、P75;而且S100,P75的m RNA水平也明显上调,并且可以观测到GFAP的m RNA条带。结论:化学诱导法,可以将脐带间充质干细胞诱导分化为类许旺细胞,有望为组织工程神经提供一种新的许旺细胞来源。     

TNF-α刺激大鼠骨髓间充质干细胞的机制研究

目的:研究肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)刺激大鼠骨髓间充质干细胞(marrow-derived mesenchymalstem cells,MSCs)的作用机制。方法:采取大鼠骨髓,以密度梯度离心分离出单个核细胞(MNCs),于体外培养并由牛垂体提取物(PEX)诱导扩增传代培养出骨髓间充质干细胞(MSCs)。经形态学和流式细胞仪检测MSCs表面标志物鉴定后,用TNF-α刺激骨髓间充质干细胞(MSCs),通过酶联免疫吸附剂测定法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)观察比较不同组别细胞的生长因子分泌和蛋白印迹法(western blot)来观察细胞中蛋白的变化。结果:①经形态学观察和流式细胞仪检测MSCs表面标志物鉴定,提示骨髓间充质干细胞的培养成功。②无TNF-α刺激组与TNF-α刺激组比较,TNF-α刺激组的生长因子分泌显著性增加,而通过磷酸化IκB的表达量显著性增加提示NF-κB被激活(P<0.05);同时TNF-α刺激组与TNF-α+NF-κB抑制剂组比较,TNF-α+NF-κB抑制剂组的生长因子分泌显著降低,而通过磷酸化IκB的表达量显著减少提示NF-κB的活性被抑制(P<0.05)。结论:NF-κB对TNF-α刺激下的骨髓间充质干细胞分泌生长因子有关键性作用。     

SOCS1在氯胺酮减轻小胶质细胞活化中的机制研究

目的:探讨麻醉药氯胺酮(Ketamine, KET)对暴露于脂多糖(Lipopolysaccharide, LPS)中的小胶质细胞活化水平的影响,并观察细胞因子信号转导抑制因子1(Suppressor of Cytokine Signaling 1, SOCS1)在其中的作用。方法:本研究选用N9小胶质细胞系,将其暴露于浓度为10 ng/mL的LPS中,模拟炎症反应,同时给与浓度为1 m M的KET,采用Western blot、酶联免疫吸附检测(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA)小RNA干扰和免疫细胞染色等方法,观察KET对暴露于LPS中的小胶质细胞活化水平的影响,及SOCS1分子在其中的作用。结果:将细胞分为3组,分别为正常培养的Control组、LPS组和KET+LPS组,研究发现,将N9小胶质细胞暴露于含10 ng/mL的细胞培养基中24 h后,细胞诱导型一氧化氮合酶(Inducible Nitric Oxide Synthase, i NOS)表达和培养基肿瘤坏死因子α(Tumor Necrosis Factorα, TNF-α)含量显著增加(P0.05),而KET可显著降i NOS蛋白表达和培养基TNF-α含量(P0.05)。随后,将细胞分为5组,分别为Control组、LPS组、KET+LPS组、SOCS1-siRNA+KET+LPS组和乱序siRNA(SC-siRNA)+KET+LPS组,我们发现,LPS可显著增加小胶质细胞TNF-α和白细胞介素1β(Interleukin-1β, IL-1β)的释放、增加SOCS1和核因子κB(Neuclear FactorκB, NF-κB)表达(P0.05),而KET可显著逆转LPS对炎症因子释放和NF-κB表达的影响,并进一步增加SOCS1表达(P0.05),而SOCS1-siRNA显著逆转了KET的上述作用(P0.05),SC-siRNA未对KET产生的上述作用造成显著影响(P0.05)。结论:KET可降低LPS对小胶质细胞的活化作用,上述作用可能通过SOCS1分子介导。     

表皮生长因子诱导骨髓间充质干细胞向视网膜神经细胞分化的体外研究

目的:研究表皮生长因子诱导骨髓间充质干细胞向视网膜神经细胞分化的可能性。方法:体外培养骨髓间充质干细胞,利用流式细胞仪分析其细胞表型。采用含EGF的培养液诱导骨髓间充质干细胞向视网膜神经细胞分化,并利用免疫荧光法进行鉴定。结果:从骨髓中分离培养的细胞具有成纤维细胞样形态,贴壁生长,表型相对均一,表面标志为CD90、CD44、CD147阳性;而CD34、CD38、CD45、CD14、HLA-DR阴性。体外诱导后可以得到神经干细胞标志物nestin、神经胶质细胞标志物GFAP和视网膜光感受器细胞标志物Rhodopsin呈阳性表达的细胞。结论:从骨髓中分离培养得到的间充质干细胞具有向视网膜神经细胞分化的潜能。     

低氧联合LPS刺激对星形胶质细胞中炎性因子和BNIP3表达的影响*

目的:探讨在低氧联合脂多糖(LPS)作用下,星形胶质细胞中B淋巴细胞瘤-2/腺病毒E1B 19-kD相互作用蛋白3(BNIP3)的表达和炎症反应变化。方法:将体外培养的原代星形胶质细胞和神经元进行下列分组:常氧组、LPS组、低氧组和LPS+低氧组(每组设置3个复孔)。LPS处理后,低氧组和LPS+低氧组放入低氧细胞孵箱,LPS组和常氧组放入正常的细胞孵箱。LPS浓度:100 ng/ml,氧气浓度为0.3%。处理时间为24 h。原代的星形胶质细胞进行上述的分组,时间点设为6 h、12 h和24 h。Western blot检测BNIP3的表达变化,RT-PCR和ELISA分别检测星形胶质细胞的肿瘤坏死因子-ɑ(TNF-ɑ)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素6(IL-6)mRNA水平变化和分泌情况。结果:与常氧组比较,低氧组炎症因子的表达没有变化,LPS组和LPS＋低氧组的炎症因子TNF-ɑ、IL-1β和IL-6 mRNA水平升高(P＜0.01);与LPS组比较,LPS＋低氧组炎症因子IL-1β和IL-6 mRNA水平进一步升高(P＜0.05,P＜0.01)。与常氧组比较,低氧组炎症因子的分泌水平没有变化,LPS组和LPS＋低氧组的炎症因子TNF-ɑ和IL-6 分泌水平升高(P＜0.01),IL-1β的水平没有变化;与LPS组比较,LPS＋低氧组炎症因子TNF-ɑ和IL-6分泌水平没有进一步升高。BNIP3在体外培养的神经元和星型胶质细胞中都有表达;在星形胶质细胞中,与常氧组比较,LPS组BNIP3的表达没有变化,低氧组和LPS+低氧组BNIP3的表达明显增加(P＜0.01);在神经元中,与常氧组比较,LPS组BNIP3的表达没有变化,低氧组和LPS+低氧组BNIP3的表达增加(P＜0.05,P＜0.01);与神经元的低氧组比较,星形胶质细胞的低氧组BNIP3的表达增加更明显(P＜0.01)。在星形胶质细胞中LPS联合低氧刺激6、12、24 h后BNIP3蛋白的表达,与常氧组相同时间点比较,LPS组BNIP3的表达没有变化,低氧组和LPS+低氧组BNIP3的表达增加(P＜0.05,P＜0.01);与低氧组相同时间点比较,6 h和12 h的LPS＋低氧组BNIP3的表达增加的更高(P＜0.01)。结论:低氧联合LPS刺激可以增强星形胶质细胞的炎症反应,LPS能增加低氧下星形胶质细胞中BNIP3的表达,提示BNIP3在星形胶质细胞的炎性反应中可能具有一定的调节作用。     

CBR2激活与小胶质细胞的活化和损伤的关系

目的：探讨大麻素CBR2受体激动剂AM1241预处理对脂多糖（LPS）和γ-干扰素（IFN-γ）所致炎症反应对小胶质细胞活化和损伤的影响。方法：联用LPS和IFN-γ作为小胶质细胞损伤模型,将细胞分为Control组、AM1241组、LPS/IFN-γ组和AM1241＋LPS/IFN-γ组;AM1241组和AM1241＋LPS/IFN-γ组经AM1241预处理2h,LPS/IFN-γ组和AM1241＋LPS/IFN-γ组用含LPS和IFN-γ的培养基培养24h。采用MTT法检测细胞代谢率,硝酸还原酶法检测细胞培养液中一氧化氮（NO）释放量,酶联免疫吸附剂测定细胞培养基中炎症因子释放量,倒置相差显微镜观察细胞形态。结果：与LPS/IFN-γ组相比,AM1241＋LPS/IFN-γ组细胞代谢率明显升高（P〈0.05）,NO、TNF-α、IL-1β和IL-10释放量明显减少（P〈0.05）,活化和损伤程度明显减轻。结论：大麻素CBR2受体激动剂AM1241预处理可减轻LPS和IFN-γ对小胶质细胞的活化和损伤。     

Phenelzine (Monoamine Oxidase Inhibitor) Increases Production of Nitric Oxide and Proinflammatory Cytokines via the NF-κB Pathway in Lipopolysaccharide-Activated Microglia Cells

Phenelzine is a potent monoamine oxidase inhibitor that is used in patients with depression. It is also well known that nitric oxide (NO) synthase inhibitors show preclinical antidepressant-like properties, which suggests that NO is involved in the pathogenesis of depression. The purpose of this study was to determine if phenelzine affects the production of NO and tumor necrosis factor-alpha (TNF-α) in activated microglia cells. BV-2 microglia cells and primary microglia cells were cultured in DMEM and DMEM/F12 and then cells were treated with LPS or LPS plus phenelzine for 24?h. The culture medium was collected for determination of NO, TNF-α, and IL-6 and cells were harvested by lysis buffer for Western blot analysis. Phenelzine increased the lipopolysaccharide (LPS)-induced expression of inducible nitric oxide synthase (iNOS), as well as the release of TNF-α and IL-6 in BV-2 microglia cells. It is also confirmed that phenelzine increased the levels of NO, TNF-α and IL-6 in LPS-activated primary microglia cells. Phenelzine increased nuclear translocation of NF-κB by phosphorylation of IκB-α in LPS-activated microglia cells. These findings suggest that high doses of phenelzine could aggravate inflammatory responses in microglia cells that are mediated by NO and TNF-α.     

百草枯中毒大鼠TNF-a、IL-10的表达及大黄保护作用的研究

目的：观察大黄对急性百草枯中毒大鼠TNF-α、IL-10的干预作用,探讨其可能的作用机制。方法：90只SD大鼠随机分为生理盐水对照组（A组）、PQ（60 mg/kg）灌胃染毒组（B组）、生大黄（300mg/kg.d）干预组（C组）,每组30只。中毒后6h、24h、72h分批处死存活的大鼠,并且检测大鼠血浆TNF-α、IL-10水平。结果：B组、C组TNF-α、IL-10水平在染毒后6h开始升高,72h达到高峰,与A组相比,差异有统计学意义（P〈0.05、P〈0.01）,在相同时间点C组TNF-α和IL-10的表达低于B组,差异均有统计学意义（P〈0.01）。B组、C组血浆TNF-α、IL-10水平与中毒时间呈显著正性相关关系（r=0.849,P〈0.01;r=0.790,P〈0.01;r=0.0.943,P〈0.01;r=0.892,P〈0.01）。结论：大黄能够通过降低百草枯中毒大鼠体内的TNF-α、IL-10水平,减轻百草枯对大鼠的损伤作用     

ROCK抑制剂Y27632对小胶质细胞炎性分泌的影响

目的观察ROCK抑制剂Y27632对小胶质细胞活化及其炎性分泌的作用。方法采用小胶质细胞系BV2细胞复苏后传代培养,分为对照组和Y27632干预组;在0、3h、6h、18h和24h收取细胞和细胞培养基;采用免疫荧光细胞染色测定各组BV2细胞上Ibal的表达,ELISA法测定各组培养基中IL-1B和TNF-α的浓度变化。结果Y27632可明显改变BV2细胞形态,干预组细胞比对照组细胞的胞体更大,细胞突起增多增长,细胞形态改变在干预6h时最为显著。与对照组相比,Y27632干预后BV2细胞分泌的IL-1β和TNF-α降低,在18h时抑制效果最为显著（P〈0．01）。结论ROCK抑制剂Y27632可诱导BV2细胞活化及炎性分泌降低,提示Rho／ROCK信号通路在小胶质细胞活化及炎性因子分泌中发挥了重要作用。     

姜黄素诱导Nrf2核转位对脂多糖引起库普弗细胞分泌炎症细胞因子的影响

目的：研究姜黄素诱导大鼠Kupffer细胞Nrf2核转位对脂多糖（LPS）引起的炎症细胞因子分泌的影响。方法：分别用10μM、20μM和30μM干预Kupffer细胞8h,诱导Nrf2核转位水平;将Kupffer细胞随机分为对照组、LPS组和干预组,对照组正常培养未加姜黄素和LPS,LPS组用10μg／mL的LPS加入Kupffer细胞培养液共同培养2h;干预组用30μM姜黄素干预8h后,余处理同LPS组。Western blot检测Nrf2核转位水平,分光光度法检测细胞MDA、GSH水平,ELISA法检测上清液TNF-α和IL-6,放免法检测IL-1β。结果：①姜黄素诱导Kupffer细胞Nrf2核转位,核转位水平随浓度增加而增高。②LPS组MDA水平较对照组显著升高（P〈0．01）,干预组MDA水平较LPS组显著降低（P〈0．01）,仍显著高于对照组（P〈0．01）。LPS组GSH水平较对照组显著降低（P〈0．01）,干预组GSH水平较LPS组显著升高（P〈0．01）,仍显著低于对照组（P〈0．01）。③LPS组上清液TNF-α,IL-1β和IL-6显著高于对照组（P〈0．01）,干预组均显著低于模型组（P〈0．01）,但显著高于对照组（P〈0．01）。结论：姜黄素通过诱导Kupffer细胞Nrf2核转位,降低LPS诱导的氧化应激损伤,抑制Kupffer细胞分泌炎症细胞因子。     

TNF-α刺激大鼠骨髓间充质干细胞的机制研究

目的：研究肿瘤坏死因子-α（Tumor necrosis factor-α,TNF-α）刺激大鼠骨髓间充质干细胞（marrow-derived mesenchymalstem cells,MSCs）的作用机制。方法：采取大鼠骨髓,以密度梯度离心分离出单个核细胞（MNCs）,于体外培养并由牛垂体提取物（PEX）诱导扩增传代培养出骨髓间充质干细胞（MSCs）。经形态学和流式细胞仪检测MSCs表面标志物鉴定后,用TNF-α刺激骨髓间充质干细胞（MSCs）,通过酶联免疫吸附剂测定法（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）观察比较不同组别细胞的生长因子分泌和蛋白印迹法（western blot）来观察细胞中蛋白的变化。结果：①经形态学观察和流式细胞仪检测MSCs表面标志物鉴定,提示骨髓间充质干细胞的培养成功。②无TNF-α刺激组与TNF-α刺激组比较,TNF-α刺激组的生长因子分泌显著性增加,而通过磷酸化IκB的表达量显著性增加提示NF-κB被激活（P〈0.05）;同时TNF-α刺激组与TNF-α＋NF-κB抑制剂组比较,TNF-α＋NF-κB抑制剂组的生长因子分泌显著降低,而通过磷酸化IκB的表达量显著减少提示NF-κB的活性被抑制（P〈0.05）。结论：NF-κB对TNF-α刺激下的骨髓间充质干细胞分泌生长因子有关键性作用。     

七氟醚对宫颈癌患者围术期炎性应激反应的影响

目的 研究七氟醚麻醉对宫颈癌患者围术期血清相关细胞因子的影响.方法 将组织学诊断为宫颈癌的患者90例,按手术时采用的麻醉药物的不同随机分为三组:第Ⅰ组患者为异丙酚组(Ⅰ组,n=30);第Ⅱ组患者为七氟醚组(Ⅱ组,n=30);第Ⅲ组患者为异丙酚+七氟醚组(Ⅲ组,n=30);观察麻醉前30 min,手术开始后1、2h,手术结束后1、24和48 h六个时点患者血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-8(IL-8)和白细胞介素-10(IL-10)水平的变化.结果 三组患者术后血清TNF-α、IL-8和IL-10水平与麻醉前值比较均升高(P＜0.01),一般在术后24 h达峰值.比较血清TNF-α、IL-8和IL-10浓度变化,Ⅰ组和Ⅱ组之间差异无统计学意义,Ⅲ组抑制这三种细胞因子释放的能力明显强于Ⅰ组和Ⅱ组(P＜0.05).结论 应用七氟醚或异丙酚进行麻醉维持在官颈癌手术中,两者控制炎性应激反应的作用类似;七氟醚联合异丙酚进行麻醉维持可更有效地降低术后炎性应激反应.     

甲基强的松龙对体外循环下心脏瓣膜置换患者肾功能的影响

背景与目的：有研究表明甲基强的松龙可减轻体外循环所致的肺损伤,但其对体外循环患者术后肾功能损害的作用尚不十分清楚。本文探讨甲基强的松龙是否有效抑制体外循环心内直视术中的炎症反应,并对肾脏有保护作用。方法：随机选取40例体外循环下择期行心脏瓣膜置换手术的患者,年龄30-55岁,心功能II～III级,随机分为甲基强的松龙组和对照组,每组20例。甲基强的松龙（MPS）组于体外循环前以甲基强的松龙10mg／kg预冲,对照组（Ns）以等量的生理盐水代替。于CPB前（T1）,CPB结束后2h（T2）、CPB结束后12h（T3）,CPB结束后24h（T4）,等时点留取中心静脉血和尿液,以酶联免疫吸附实验（ELISA）法检测炎性介质（IL-6、TNF—α、IL-10）;取尿上清液检测反映肾功能的早期敏感指标：尿-N-乙酰氨基-葡萄糖苷酶（NAG）、尿α1-微球蛋白（α1-MG）、尿视黄醇结合蛋白（RBP）的水平。结果：CPB前两组炎性介质和肾功检测指标,差异均无统计学意义（P〉0．05）,而CPB结束后,两组炎性介质的水平和肾功各项指标均较术前增高。与NS相比,MP组T2～T4时点IL-6水平明显降低（P〈0．05）。在T2～T3时点TNF-α的水平明显低于对照组（P〈0．05）。两组IL-10的水平在CPB后均增加,但在T2～T3时点MP组升高幅度明显高于NS组（P〈0．05）。与NS}匕较,MP组在CPB后各时点尿NAG、α1-MG、RBP的水平均明显降低（P〈0．05）。结论：CPB可导致全身炎性反应及肾功能损伤;甲基强的松龙可减轻炎性反应,同时对肾功能有一定的保护作用。     

小鼠精原干细胞在三种培养基中的生长行为

目的：建立小鼠精原干细胞（SSCs）的体外长期培养体系。方法：用分别添加了等量的胶质细胞源神经营养因子（GDNF）、可溶性GFRα1和hFGF的DMEM／F12、KSR和StemPro-34 SFM三种无血清培养基和MEF饲养层分别培养经差异贴壁分选富集的小鼠SSCs,通过形态观察、标志基因的RT-PCR和免疫细胞化学分析检测其SSCs本原。结果：DMEM／F12与KSR可支持小鼠SSCs在体外存活6-7d,而StemPro-34 SFM能能维持SSCs体外增值一个月。结论：StemPro-34 SFM支持小鼠SSCs的体外增殖。     

乌司他丁对肠缺血-再灌注大鼠血清TNF—α，IL-6的影响

目的：通过检测血清TNF-α,IL-6的变化,评价乌司他丁对小肠缺血再灌注损伤的保护作用及机制。方法i健康Wistar大鼠84只,通过夹闭肠系膜上动脉（SMA）60min制作肠缺血模型,随机分成假手术组（C）,肠缺血再灌注组（I）,UTI治疗组（u）。根据缺血后再灌注时间不同又将I组和U组分成0min、2h和6h组。I组、U组于手术前经尾静脉分别注入生理盐水2mL、乌司他丁5×10^4U／kg,假手术组仅分离SMA,不夹闭血管。于各时点取腹主动脉血测定血清TNF-α、IL-6含量。结果：肠缺血再灌注各时相点均引起血清TNF-α、IL-6的变化,与假手术组相比,各时点TNF-α值显著升高（P〈0．01）,IL-6显著升高（P〈0．01）。u组0min、2h血清TNF-α值低于相应时点的I组（P〈0．01）;U组0min、2h、6h血清IL-6值低于相应时点的I组（P〈0．05）。结论：乌司他丁可减轻小肠缺血再灌注后的炎症反应。