鲤春病毒血症病毒G蛋白的研究进展

鲤春病毒血症病毒(Spring viremia of carp virus,SVCV)是引起鱼类传染性病毒病鲤春病毒血症(Spring viremia of carp,SVC)的病原,对鲤科鱼类养殖业造成巨大的经济损失。囊膜糖蛋白G可介导病毒内吞,还是最主要的抗原决定簇蛋白,已成为国内外研究的热点。综述G蛋白在表达技术、病毒检测、疫苗研制等方面的研究状况,旨在为G蛋白的深入研究及鲤春病毒血症的防治提供参考。     

鲤春病毒血症病毒糖蛋白酵母表面展示系统的建立

糖蛋白(Glycoprotein, G)作为鲤春病毒血症病毒(Spring Virernia of Carp Virus, SVCV)主要的抗原蛋白, 已成为现阶段SVCV病毒检测、抗体制备以及疫苗研制的热点。为了对其进行酵母表面展示, 研究以SVCV-shlj1分离株基因组为模板, 通过RT-PCR技术, 体外扩增获得SVCV表面糖蛋白的基因开放阅读框(1530 bp)片段, 将其克隆至酵母表面展示载体pYD1, 构建重组质粒pYD1-G。利用电转化方法将重组质粒pYD1-G导入酿酒酵母EBY100感受态细胞, 经YNB选择培养基筛选和菌液PCR的鉴定, 挑选出阳性转化子(命名为EBY100-pYD1-G), 对其进行2%半乳糖诱导。利用细胞免疫荧光和流式细胞仪检测G蛋白的酵母表面展示情况。细胞免疫荧光结果显示, 诱导后的酵母细胞EBY100-pYD1-G能产生特异性红色荧光, 且随着诱导时间的增加, 红色荧光的酵母细胞所占比例不断增加, 各组之间差异显著(P< 0.05)。流式细胞仪检测结果显示, 酵母细胞的荧光强度与诱导时间呈正比, 其中诱导48h与72h的酵母细胞荧光强度不存在显著差异, 基本趋于稳定不变的状态。因此, 选取诱导48h为酵母表面展示的最佳诱导时间。上述研究结果表明SVCV的G蛋白已经成功展示于酿酒酵母细胞表面, 研究为鲤春病毒血症酵母口服疫苗的研发奠定了前期基础。     

应用RT-PCR技术检测动物组织中的口蹄疫病毒

通过对影响RT-PCR检出率的条件和试剂进行了筛选,确定了提取FMDVRNA的最佳方法的试剂。优选出RT-PCR反应的试剂和最佳反应条件,建立了检测口蹄疫病毒核酸的RT-PCR方法,应用所建立的方法检测送检的鲜牛奶,淋巴结,脊髓,牛备咽拭子,结果阳性率分别为41.4%(24/58),13.33%(2/15),20%(1/5),37.5%(12/32);检测4个屠宰场送检的组织样品40份,结果阳性率为10%——70%;检测送检的奶粉（1份）,水泡皮（1份）,老鼠（2份）,患儿口腔棉拭子（4份）,阳性率均为100%;而检测送检的蝉螂4份,阳性率为0。研究表明检测FMDV的RT-PCR技术能准确快速地检测肉类,奶类,分泌物,排泄物的带毒,排毒情况,可用于口蹄疫的诊断和流行病学调查。     

用巢式RT-PCR检测精神分裂症患者血液标本中博尔纳病病毒p24基因

目的：检测精神分裂症患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)标本中博尔纳病病毒(Borna Disease Virus,BDV)p24基因,探讨BDV感染与精神分裂症的关系。方法：用巢式RT—PCR方法检测黑龙江省精神分裂症患者及正常人PBMCs中BDV—p24基因片段,同时扩增β—肌动蛋白(β-actin)作为内参照。结果：66例精神分裂症患者中,BDV—p24基因的阳性检出率为28．8％(19／66);47例正常人中,BDV—p24基因的阳性检出率为6．3％(3／47),经比较两者间阳性率差异有显著性(P＜0．05)结论：证实中国存在BDV感染,黑龙江省精神分裂症的发生可能与BDV感染有关。     

多重RT-PCR快速检测禽流感病毒的研究

西北农林科技大学生物工程研究所陈思怀、湖北省农科院牧医研究所乔宪凤、华文君等6位科学工作者参考H1-H15亚型禽流感病毒(AIV)的核蛋白(NP)基因序列以及H5、H6、H9亚型AIV血凝素(HA)基因,共设计4对引物,建立了2对引物扩增AIV的NP、HA基因的多重RT-PCR方法。应用此法分别对H5、H6、H9亚型AIV尿囊液RT-PCR,电泳,回收预期片段进行测序,并同Genebank的注册序列进行同源性分析。     

转基因植物快速检测方法的研究

本试验对转基因植物检测中的DNA提取和PCR扩增程序作了改进。经试验,本研究建立的DNA快速提取法与目前广泛使用的CTAB法相比更为简便,快速和经济,提取的DNA质量主扩增效果无明显差异,可用于多种转基因植物,多种植物组织的DNA提取,利用复合PCR法可在同一反应管中同步检测35N,NOS及CP4－EPSPS基因,明显提高了检测效率。应用本试验建立的DNA快速提取－复合PCR扩增－银染检测技术可在6小时内得出结果,达到了快速,简便,灵敏,可靠的检测目的。     

猪圆环病毒2型及猪繁殖与呼吸综合症病毒的快速检测

According to the published genome sequences of Porcine circovirus type 2(PCV2)and Porcine reproductive and respiratory syndrome virus(PRRSV),primers were designed and PCR,RT-PCR were set up for the detection of PCV2 and PRRSV,respectively,With the established methods,38 clinical samples from the respiratory disease pigs were detected for the presence of PCV2 and PRRSV. The results demonstrated that 22 samples were positive for PCV2,27 samples were positive for PRRSV and among the above positive samples,18 samples were positive for both viruses,The data obtained in the present study indicated that PCV2 and PRRSV maybe play an important role in the course of the development of respiratiory diseases.     

PCR法快速检测肉食品污染沙门菌的实验研究

沙门菌属是引起食源性疾病的重要致病菌之一。传统的检测方法费时、费力,研究建立了检测肉食品中沙门菌的PCR检测方法。根据沙门菌侵袭基因invA设计一对引物,对肉食品中沙门菌基因组DNA进行PCR扩增,建立了沙门菌特异、敏感和快速的PCR检测方法,为食源性致病菌的检测提供参照,在食品检测领域中有良好的应用前景。     

一种适于转基因水稻PCR检测的微量DNA快速提取法

对已报道的小麦基因组DNA快速提取方法的部分步骤进行了简化,在水稻上进行了尝试。结果表明,简化法提取的水稻基因组DNA完整性好,PCR扩增效果与试剂盒提取法无明显的差异,结果稳定可靠;而且整个提取过程操作简单、花费时间少,样品用量少,仅需5-10mg,适用于大规模转基因水稻的PCR检测。     

免疫组化法检测美国青蛙组织中的蛙虹彩病毒

分不同时期,收集经人工感染了蛙病毒的样蛙,取其心、肺、肾、肠脾、肝六种组织,并通过免疫组化方法进行检测。结果分别在感染了病毒3d、9d、11d后的幼蛙这六种组织中,由表及里观察到了深色的阳性信号,从而测定了病毒在入侵组织中的存在部位,其中,肺和肠组织中阳性信号最强,呈灶性分布,其余四种组织中的阳性信号则呈散性分布。在未注射病毒的幼蛙阴性对照组六种组织设计中没有检测到阳性信号。     

中华鳖7种组织SOX基因表达的RT-PCR分析

In this paper, RT PCR analysis on SOX gene of seven tissues from the Chinese soft shelled turtle (Pelodiscus sinensis) was studied, and SOX gene fragments of expression from the testicle, brain, heart, kidney and spleen were cloned using RT PCR products.The results show that SOX genes has specific expression in the testicle, brain, spleen, cardiac muscle and kidney and isn't expression in muscle, liver and ovary of femel.The results of sequence reveal that the SOX genes of expression in the testicle are TSSOX1、TSSOX4 TSSOX5 and TSSOX9, and those are TSSOX2 and TSSOX4 in the brain, and this is TSSOX4 in the spleen and heart tissue, and those are TSSOX2 and TSSOX3 in the kidney tissue.This suggests that the SOX gene act important role not only on the sex determination, but also on the development of neural system, immunocyte system and the differentiation of male germ cell.     

用重组Epstein-Barr病毒早期蛋白P83为抗原检测鼻咽癌病人血清中IgA抗体

以重组EB病毒早期蛋白P83为抗原,用Western blot检测了135份鼻咽癌病人和100份正常人血清中IgA/P83抗体,阳性率分别为96％和0,以常规的间接免疫酶法检测这两种血清中IgA/EA抗体,阳性率分别为71％和0。IgA/P83抗体的几何平均滴度较IgA/EA高4倍以上。这表明,用Western blot查IgA/P83敏感、特异,可替代用间接免疫酶法查IgA/EA用于鼻咽癌的早期诊断。     

稀有鮈鲫对草鱼出血病病毒敏感性的初步研究

本文报道稀有鲫对草鱼出血病病毒（ＧＣＨＶ）的敏感性。ＧＣＨＶ是草鱼出血病的病原,用ＧＣＨＶ人工感好１－６月龄的稀有鲫,在水温２２－３２℃时能导致稀有鲫出现出血病症状。在水温２８℃时,病鱼在ｌｄ内死亡,潜伏期为５ｄ,发病高峰期在感染后第６－８ｄ。ＧＣＨＶ能在稀有鲫体内传代,并诱导８０％以上的稀行鲫患病死亡。将人工感染ＧＣＨＶ的稀有鲫病鱼组织超薄切片,电镜观察,发现在肠道、脾脏、肾脏等组织中存在大小与形态和ＧＣＨＶ相似的病毒颗粒。从稀有鲫出血病病鱼组织中纯化病毒,免疫电镜观察,发现病毒颗粒能被ＧＣＨＶ的特异性抗体聚集成团。由上可知,稀有鲫出血病是由ＧＣＨＶ感染所致,稀有鲫对ＧＣＨＶ是敏感的,可以作为草鱼抗出血病育种的模型。     

INHERITANCE AND MEIOTIC ELIMINATION OF A VIRUS GENOME IN THE HOST ECTOCARPUS SZLZCULOSUS (PHAEOPHYCEAE)1

The marine brown alga Ectocarpus siliculosus (Dillwyn) Lyngbye is frequently infected by a latent DNA virus that multiplies in modified sporangia and gametangia of the host. We describe a polymerase chain reaction (PCR) procedure for the amplification and detection of viral DNA in Ectocarpus. PCR analysis of parents and progeny plants confirmed that virus DNA passes through meiosis like a Mendelian trait. An infected sporophyte produced equal numbers of gametophytes with and without the viral genome. Thus, meiosis in sexual populations of the host acts as a mechanism for the creation of virus-free progeny.