银染色测定粘虫核多角体病毒多角体基因序列

LsMNPV DNA用EcoRV酶切进行基因组克降,用AcMNPV的部分多角体基因顺序DNA片段作探针,菌落原位杂交法结合测序筛选到分别含LsMNPV部分多角体基因的重组质粒pLsEV1和pLsPH5。用银染色PCR线性扩增双脱氧法测序,发现LsMNPv的完整基因即位于这两个片段上。LsMNPV多角体基因长741bp,编码区碱基同源性与AcMNPV和MbMNPV分别为80.0％和97.0％,氨基酸同源性分别为89.8和97.5％。氨基酸组成中以谷氨酸(Glu)含量最高,谷氨酰胺和色氨酸含量最低。密码子选用以第三个碱基为嘧啶的密码子频率最高。多角体蛋白N端有一类似信号肽结构的26个氨基酸的疏水区。     

油桐尺蠖核多角体病毒多角体蛋白双向电泳分析

 <正> 油桐尺蠖核多角体病毒(Buzura suppressaria Nuclear Polyhedrosis Virus,BsNPV)是茶树、油桐等的一种主要害虫——油桐尺蠖的病原体,我国首次分离,并已对其进行了广泛的研究。这种病毒的多角体蛋白在单相SDS-PAGE中分子量显示为31 kD的单一多     

柞蚕核多角体病毒核多角体基因的定位和克隆

通过Southern转印杂交证明,柞蚕核多角体病毒(Antheraea pernyi nuclear polyhedrosis virus,ApNPV)核多角体基因位于该病毒基因组DNA Bam HⅠ D和E片段上,我们巳将这两个片段分别克隆到pAT153质粒中,并用末端杂交法确定了ApNPV核多角体基因的方向,对含有这一基因的片段进行了限制性内切酶图谱分析,进而对这一基因部分编码区进行了核苷酸序列分析,在用ApNPV这一段序列(222bp)与其他昆虫核多角体病毒AcNPV(AutograPha californica NPV,苜蓿丫纹夜蛾NPV);BmNPV(Bombyx mory NPV,家蚕NPV);OpNPV(Orqyia Pseudotsugata NPV,黄杉毒蛾NPV)核多角体基因相应区段相比较分析中,发现它们之间的同源核苷酸序列比率分别为77.5％、84％和80％。     

家蚕核多角体病毒DNA

用酚或pH10缓冲液抽提家蚕核多角体病毒DNA 时,得到两种不同的结果。酚抽提的DNA 超离心沉降系数(S_20,w)是28.5S,电镜观察到的是线型DNA 分子,长约8微米,最长的可达10微米以上。聚丙烯酰胺凝胶电泳、Sepharose 柱分析和蔗糖密度梯度超离心等分析中,都是一个组分。pH10缓冲液抽提的DNA,超离心沉降系数(S_(20),w)只有4.7S,聚丙烯酰胺凝胶电泳中迁移速度远比酚抽提的快,并且是一条扩散的宽带,Sepharose 柱分析亦表明分子量远比酚抽提的小。文章对这种不同的结果进行了讨论。     

油桐尺蠖血球细胞系的建立及其对多角体病毒敏感性的测定

建立了稳定生长的油桐尺蠖幼虫血球细胞系,称为WIV-BS-02细胞系,原代培养始于1981年4月,至今已传至第83代,细胞系的群体倍增时间为48～72小时,形状有圆形和梭形两种,具有鳞翅目昆虫的典型染鱼体。比较了6种培养液和3种培养温度对细胞生长的影响,观察了同源油桐尺蠖核型多角体病毒感染后,光学显微镜下的细胞病理变化及电镜下病毒的形态发生,测定了细胞培养物对油桐尺蠖的体外培养细胞和幼虫的感染性。     

甜菜夜蛾核多角体病毒杀虫剂研究进展

一、利用人工半合成饲料批量饲养甜菜夜蛾从 2 8种不同的人工饲料配方中 ,筛选出一种有利于甜菜夜蛾生长发育的人工饲料。经大批量连续饲养表明 ,该饲料具有饲养效率高、产卵量多和历期短等特点。其中孵化率为 85 %、幼虫存活率 93.3%、幼虫历期 9.5± 2 .1ｄ、化蛹率 92 .6 %、雌蛹重 1 2 1 .2± 1 4.3ｍｇ、雄蛹重1 0 8.6± 1 0 .9ｍｇ、羽化率 1 0 0 %、产卵量 1 45 2 .2粒 /雌、成虫期 (寿命 ) :雌 1 2 .2± 2 .3ｄ、雄 1 1 .0± 2 .8ｄ。经多年连续批量饲养 ,已建立了一套较为成熟的饲养技术 ,平均每人每月饲养幼虫达 1 0 - 1 2万条。…     

油桐尺蠖核多角体病毒多角体蛋白基因定位与克隆

以[~(32)P]-dATP标记含AcNPV DNA的EcoRI-I片段的重组质粒为探针,在35℃条件下对油桐尺蠖核多角体病毒(BsNPV)多角体蛋白基因进行了定位,将其分别定位在BamH Ⅰ-A,Bgl Ⅰ-A,Bgl Ⅱ-F,EocR Ⅰ-R,Hind Ⅲ-A,Kpn Ⅰ-Ⅰ,Pst Ⅰ-D,Xba Ⅰ-A(或B),Xho Ⅰ-F和G片段上,并以M13mp18为载体,克隆了Kpn Ⅰ-Ⅰ片段。     

棉铃虫核多角体病毒iap3基因表达时相分析

目的:原核表达棉铃虫核多角体病毒(Helicoverpa armigera nucleopolyhedrovirus,HearNPV)iap3基因,制备该蛋白的多克隆抗体,并利用该抗体分析iap3基因在病毒感染过程的表达时相,为深入研究提供基础.方法:PCR扩增iap3基因后,克隆至pET28b,转化到大肠杆菌BL21 (DE3)中诱导表达,利用亲合层析进行蛋白纯化,将纯化融合蛋白免疫大鼠制备抗血清,利用抗血清Western blot检测IAP3在病毒感染过程的表达时相.结果:成功在原核细胞中表达iap3基因,并获得纯化的融合His - tag的IAP3蛋白,制备了该蛋白的多克隆抗体.发现iap3基因最早在感染后24h表达,到72h到达表达高峰.结论:获得了IAP3多克隆抗体,iaP3基因是一个晚期表达基因.     

斜纹夜蛾核多角体病毒基因组全序列分析

已完成斜纹夜蛾核多角体病毒 (Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａｌｉｔｕｒａｍｕｌｔｉｃａｐｓｉｄｎｕｃｌｅｏｐｏｌｙｈｅｄｒｏｖｉｒｕｓ,ＳｐｌｔＭＮＰＶ)基因组全序列测定。ＳｐｌｔＭＮＰＶ基因组全长 1 39341ｂｐ ,碱基组成中Ｇ Ｃ含量为 42 .7% ,与已发表的Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａｅｘｉｇｕａｍｕｌｔｉｃａｐｓｉｄｎｕｃｌｅｏｐｏｌｙｈｅｄｒｏｖｉｒｕｓ (ＳｅＭＮＰＶ) (44 % )和Ｂｏｍｂｙｘｍｏｒｉｎｕｃｌｅｏｐｏｌｙｈｅｄｒｏｖｉｒｕｓ (ＢｍＮＰＶ) (40 % )相似 ,而与Ｌｙｍａｎｔｒｉａｄｉｓｐａｒｍｕｌｔｉ ｃａｐｓｉ…     

油桐尺蠖核多角体病毒的基因型变异

本文用AvaⅡ、BamHⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ四种限制性内切酶对油桐尺蠖核多角体病毒(Buzvra suppressaria Nuclear PolyhedrosisVirus)DNA作酶解图谱分析,比较了湖北、湖南、四川三个分离株的基因组。三者图谱基本相似,但少数片段略有不同。亚克分子片段的存在表明野生的油桐尺蠖核多角体病毒有基因型变异,包含着数个基因型变种。     

棉铃虫核多角体病毒lef-3基因的序列分析

在棉铃虫核多角体病毒(Helicoverpa armigera Single-nucleocapsid Nucleopolyh edrovirus,HaSNPV)基因组中发现了lef-3基因,该基因位于病毒基因组的BamHⅠ -F片段上, 全长1140bp,编码379个氨基酸,预计蛋白质分子量为44kD,启动子区具有TATAbox,位于起 始密码子ATG上游40～43nt处,在终止密码子下游具典型的poly(A)终止信号AATAAA.并且 在它的氨基酸序列的N-端也具有一个类似SSB保守序列的基元结构.     

斜纹夜蛾核多角体病毒基因组的hr序列分析

对斜纹夜蛾核多角体病毒 (Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａｌｉｔｕｒａｍｕｌｔｉｃａｐｓｉｄｎｕｃｌｅｏｐｏｌｙｈｅｄｒｏｖｉｒｕｓ,ＳｐｌｔＭＮ ＰＶ)基因组进行全序列分析 ,发现共存在 1 6个非编码的同源性 (ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓｒｅｇｉｏｎｓ,简称ｈｒ) ,长度介于 1 5 6～ 1 347ｂｐ之间 ,Ｇ Ｃ含量平均为 33.0 %。在这 1 6个ｈｒ中 ,存在两类的不完全回文重复 (ｉｍｐｅｒｆｅｃｔｐａｌｉｎｄｒｏｍｉｃｒｅｐｅａｔ) ,即Ｐ Ｉ和Ｐ ＩＩ。Ｐ Ｉ是一个 41ｂｐ的回文序列 ,无明显的保守侧翼区 (ｆｌａｎｋｉｎｇｒｅｇｉｏｎ)。除ｈｒ3…     

斜纹夜蛾核多角体病毒抑制苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒诱导的斜纹夜蛾细胞凋亡

野生型苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californica multicapsid nucleopolyhedrovirus, AcMNPV)感染斜纹夜蛾(Spodoptera litura)细胞系Sl-zsu-1,可引起典型的细胞凋亡;但可以在草地夜蛾(Spodoptera frugiperda)细胞Sf-9中复制并形成多角体.比较了AcMNPV p35基因在病毒感染两种细胞的复制和转录情况,认为p35在非受纳细胞中及时有效的表达能阻止细胞发生凋亡;共感染实验结果表明,斜纹夜蛾核多角体病毒(Spodoptera litura multicapsid nucleopolyhedrovirus, SpltMNPV)可以抑制AcMNPV诱导的细胞凋亡并可帮助病毒进行复制,推测SpltMNPV基因组中与p35同源的p49基因挽救了细胞的自杀行为.     

中国棉铃虫核多角体病毒VHA273毒株多角体蛋白的纯化及某些理化性质的测定

中国棉铃虫核多角体病毒(Heliothis armigera NPV,HaNPV)VHA273毒株,属杆状病毒科杆状病毒属A亚组。1981年通过省级鉴定,该毒株可望发展成商品杀虫剂。本文首次报道VHA273株多角体蛋白的纯化方法及某些理化性质的测定结果,这对该昆虫杆状病毒的分类鉴定及病毒制剂的标准化工作具有实用意义。     

棉铃虫核多角体病毒lef—3基因的序列分析

在棉铃虫核多角体病毒 (HelicoverpaarmigeraSingle nucleocapsidNucleopolyhedrovirus ,HaSNPV)基因组中发现了lef 3基因 ,该基因位于病毒基因组的BamHⅠ F片段上 ,全长 114 0bp ,编码 379个氨基酸 ,预计蛋白质分子量为 4 4kD ,启动子区具有TATAbox ,位于起始密码子ATG上游 4 0～ 4 3nt处 ,在终止密码子下游具典型的 poly(A)终止信号AATAAA。并且在它的氨基酸序列的N -端也具有一个类似SSB保守序列的基元结构     

长须刺蛾核多角体病毒的分离、鉴定和毒力测定

长须刺蛾(Hyphorma minax W.)属鳞翅目刺蛾科。是油桐的主要害虫之一。另外,还危害茶和樱花。分布于华北、浙江、江西、湖南、贵州、四川、广西、云南等地。在广西一年发生2代,老熟幼虫于土中结茧越冬,幼虫一般6—8龄。     

家蚕核多角体病毒解旋酶基因启动子功能区域缺失分析

杆状病毒DNA解旋酶是病毒复制所必需的。瞬时表达分析显示 ,家蚕核多角体病毒解旋酶基因启动子属于延迟早期基因启动子。通过PCR技术在该启动子区产生的一系列缺失分析表明 ,解旋酶基因启动子的基础转录调控区主要位于ATG上游 - 5 1 0～ - 4 1 0bp之间。当只保留ATG上游 98bp区段时 ,仍可测到该启动子的基础活性。在病毒因子存在下 ,将启动子区域删除到ATG上游 - 4 1 0bp时 ,对启动子活性影响不大 ;若继续删除 ,则其活性显著下降。据此推测对病毒因子响应的启动子区段应主要位于ATG上游 - 4 1 0～ - 30 9bp之间     

大尺蠖核型多角体病毒多角体蛋白基因的结构分析

大尺蠖核型多角体病毒(BsNPV)的多角体蛋白基因(ocu)定位在2．3kb的BamHl—H片段上,用xho1、sma1、HindIII和PstI构建了H片段的物理图谱,并测定了两端636bp序列。在5’端发现了杆状病毒ocu基因共有的典型特征,即：ATG起始区;启动子区(14bp保守序列);TATA box和CATA box区等。单一xhoI位点在ATG上游-15bp处,适于作为构建ocu基因转移载体的插入位点。在这一基因5’端序列中发现了五个反转重复单元CGAGC GCTCG,讨论了这一单元在杆状病毒ocu基因高效表达中的调控功能。