魔芋葡苷聚糖(KGM)凝胶为亲和层析载体与 Sepharose 4B的比较研究Ⅱ.KGM染料亲和层析分离人血清白蛋白

将KGM和Sepharose 4B凝胶在相同条件下活化、偶联接上染料Cibacron Blue F3GA制成了KGM和Sepharose 4B染料亲和吸附剂,并用来与牛血清白蛋白(BSA)作用,每毫升KGM亲和吸附剂可吸附BSA 28 mg,用NaSCN洗脱时回收为84.5%,而Sepharose 4B梁料亲和吸附剂每毫升可吸附BSA 15.3 mg,用NaSCN洗脱时回收为81.7%,并对两种凝胶的染料亲和吸附性能进行了比较.用KGM染料亲和吸附剂分离的人血清白蛋白与人血清白蛋白标准品有同样的纯度,都达到了电泳纯.     

魔竽葡苷聚糖凝胶为亲和层析载体与Sepharose 4B的比较研究——Ⅰ.KGM金属螯和层析分离纯化猪血SOD

将KGM凝胶和Sepharose 4B在同样条件下活化偶联,制成Cu~(2 )金属螫合亲和胶,亲和纯化猪血SOD,并对这两种亲和胶的层析效果和性能进行了比较。KGM金属螫合胶对猪血SOD吸附量、纯化倍数、纯化SOD的比活力和回收率分别为53000U/ml胶、19倍、12000U/mg蛋白和94.6％,而Sepharose 4B亲和胶对SOD 的吸附量、纯化倍数、纯化SOD的比活力和回收率分别为79920U/ml胶、11倍、10125U/mg蛋白和95.4％。两种亲和胶所纯化的SOD经聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)、活性染色及SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)证明其均为电泳纯。KGM金属螯合胶使用六次后,其对SOD吸附量、去Cu量及SOD的回收率均无明显影响。     

魔竽葡苷聚糖凝胶为亲和导析载体与Sepharose 4B的比较研究

将KGM凝胶和Sepharose 4B在同样条件下活化偶联,制成Cu2 金属螯合亲和胶,亲和纯化猪血SOD,并对这两种亲和胶的层析效果帮性能进行了比较,KGM金属螯合胶对猪血SOD吸附量,纯化倍数,纯化SOD的比活力和回收率分别为53000U／ml胶,19倍,12000U/mg蛋白和94．6％,而epharose 4B亲和胶对SOD的吸附量,纯化倍数,纯化SOD的比活力和回收率分别为7992U／ml胶,11倍,10125U/mg蛋白和95．4％,两种亲和胶所纯化的SOD经聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）,活性染色及SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS－PAGE）证明其均为电泳纯,KGM金属螯合胶使用六次后,其对SOD吸附量,去Cu量及SOD的回收率均无明显影响。     

以魔芋葡甘聚糖凝胶为载体亲和层析分离纯化猪血SOD

以魔芋葡甘聚糖（ＫＧＭ）凝胶作为铜金属螯合亲和层析的载体一步亲和纯化猪血ＳＯＤ,得到电泳均一,比活为８６２２Ｕ／ｍｇ,纯化倍数为７７．８倍的ＳＯＤ,其回收率为８５．４％．探讨了魔芋葡甘聚糖凝胶作为亲和载体的可能性及前景．     

以魔芋葡甘聚糖凝胶为载体亲和层析分离纯化猪血SOD

以魔芋葡甘聚糖（ＫＧＭ）凝胶作为铜金属螯合亲和层析的载体一步亲和纯化猪血ＳＯＤ,得到电泳均一,比活为８６２２Ｕ／ｍｇ,纯化倍数为７７．８倍的ＳＯＤ,其回收率为８５．４％。探讨了魔芋葡甘聚糖凝胶作为亲和载体的可能性及前景。     

脱乙酰魔芋葡苷聚糖对刚果红吸附性能研究

采用静态吸附法研究脱乙酰魔芋葡苷聚糖对刚果红的吸附特性。结果表明,脱乙酰魔芋葡苷聚糖脱色率达92%,吸附速率符合拟二级速率方程,吸附等温线符合Freundlich吸附等温式。根据热力学函数关系计算出吸附焓变(ΔH)为11.033 kJ/mol,为吸热反应,升高温度有利于吸附;且不同温度下的吉布斯自由能变(ΔG)均小于0,表明脱乙酰魔芋葡苷聚糖对刚果红的吸附是自发过程。     

魔芋葡甘聚糖在固定化领域里的应用

魔芋葡甘聚糖是天然中性多糖,具有良好的成膜、增稠、共混、定型、凝胶和生物相容性等性能,在农业、环境、医药卫生、生物等领域有广泛的应用。鉴于KGM的上述特性以及如今对环保型材料的热点研究,文章总结了KGM作为固定化材料在固定化领域里的应用。另外,就固定化载体的特点及较常见的载体材料、KGM的物理、化学的改性方法等作了简述。近年来,众多研究者已经在载体不溶性的处理、活化、改性、制备KGM微胶囊方面作了许多研究,今后可以注重发掘KGM在精细化工、生物材料等方面的突破点,扩大KGM的应用范围。     

基于魔芋葡甘聚糖微球的胶原覆层型微载体的制备研究

以魔芋葡甘聚糖(KGM)微球为基质,用1,4-丁二醇二缩水甘油醚将KGM微球进行活化,将胶原覆层到微球上,对胶原覆层进行再次交联,得到覆层均匀、稳定的微载体.通过四因素三水平的正交回归组合试验设计,考察了活化时间、蛋白质用量、偶联时间、交联剂用量对微载体细胞培养效果的影响.以Vero细胞培养效果为指标,制备胶原包被微载体的最佳工艺为活化时间5h、蛋白用量1∶0.1(球:蛋白)、偶联时间5h、交联剂用量每1gKGM加入0.5ml交联剂.在最优制备条件下,培养Vero细胞最大细胞密度可达到1.7×106 cells/ml,证明了胶原覆层的KGM微球作为动物细胞培养的微载体具有可行性.     

魔芋葡甘聚糖磷酸酯化反应的研究(Ⅰ)

本文旨在研究干法条件下魔芋葡甘聚糖磷酸化反应,反应温度、时间、pH和磷酸盐用量对酯化反应以及酯化产物粘度的影响.利用红外光谱、X-射线衍射、扫描电镜及旋转粘度计等分析测试手段,探讨酯化产物的结构和性能之间的关系.     

魔芋葡甘聚糖-尼莫地平药膜体外释放性能的初步探讨

本文选用尼莫地平(nimodipine,NMP)作为模型药物,以魔芋葡甘聚糖(Konjac glucom annan,KGM)为材料制备KGM-NMP药膜,对其在体外不同介质和不同温度下的释药特性进行考察,初步探讨魔芋葡甘聚糖-尼莫地平药膜的体外释放性能。采用扫描电子显微镜观察药膜各个释放阶段的形态及表面结构,药膜呈胶束状,表面平整光滑,个别表面有凹凸状;用药物释放动力学方程拟合药物释放数据曲线,推导建立数学模型,同时结合电镜扫描结果分析,KGM-NMP药膜的溶蚀特性更符合零级动力学方程,释放机制为扩散和骨架溶蚀的协同作用。该药膜在体外具有明显的缓控释作用,24 h内释药稳定。     

氨基葡甘聚糖的质粒DNA转染载体作用的研究

目的 :发展一种新的半人工合成的质粒DNA转染载体。方法 :用氨基化方法将纯化的葡甘聚糖阳离子化 ,用凝胶阻滞检测法 (gelretardationassayforcomplexformation)观察氨基葡甘聚糖 DNA复合物的形成 ,以及用氨基葡甘聚糖作报告基因质粒pEGFP Cl的载体 ,转染HEK2 93细胞 ,观察转染效率。结果 :葡甘聚糖氨基化后溶液离子强度增大 2 0倍左右 ,氨基葡甘聚糖可与质粒DNA形成复合物 ,形成的复合物转染HEK2 93细胞后 ,报告基因pEGFP Cl获得阳性表达。氨基葡甘聚糖最大至 1 0 %仍未显示细胞毒性。结论 :氨基葡甘聚糖可发展为DNA载体系统 ,在HEK2 93细胞中获得理想的目的基因表达。     

制备条件对魔芋葡甘聚糖硝酸酯取代度的影响及产物热重分析

以魔芋葡甘聚糖(KGM)为底物,浓H2SO4为催化剂,发烟HNO3为改性剂,制备了高取代度的KGM硝酸酯(KGMN)。考察了制备条件对产物取代度(DS)的影响,在最佳条件下所得产物的DS为2.63。FTIR图谱显示,-NO2已成功引入到KGM分子中;SEM照片表明,KGMN的表观形貌变为疏松絮状,这与-NO2基的引入导致其疏水性增强有关;TGA测试表明,KGMN的热稳定性与KGM相比明显下降,且DS越高,下降程度越显著,更为重要的是,KGMN的热重曲线表现出瞬间热失重和/或表观增重的特性。本研究结果初步表明,KGMN有望作为一种新型环保含能材料应用于相关领域。     

含幽门螺杆菌CagA、UreB蛋白与霍乱肠毒素B亚单位（CTB）融合基因的植物表达载体的构建及遗传转化

幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染是慢性胃炎和消化性溃疡的主要病因,与胃癌和胃粘膜相关淋巴组织(MALT)淋巴瘤的发生也密切相关。目前所用的疫苗制造成本高、运输费用贵,然而利用转基因植物生产的植物疫苗成本低廉、服用方便是现有疫苗的良好替代品。将Hp相关蛋白与免疫佐剂CTB的融合基因(ctb-linker-cagA和ctb-linker-ureB)利用PCR、酶切、连接等一系列方法从载体p1300-WxCLCN和p1300-WxCLUN中重组到载体pCAMBIA2301中(含35S启动子),重组载体分别命名为p2301-35SCLCN和p2301-35SCLUN。通过冻融法将载体导入农杆菌EHA105菌株中,以农杆菌介导的方法,将重组载体p2301-35SCLCN和p2301-35SCLUN转化烟草黄苗榆和心叶烟,获得了具有卡那霉素抗性再生植株,经过酶切、PCR、GUS染色和PCR-Southern鉴定结果表明,目的基因分别正确插入载体中并稳定整合到植株中,为利用植物反应器生产幽门螺杆菌疫苗奠定了坚实的基础。